目的 總結(jié)功能性組織工程肌腱（functional tissue engineered tendons，F(xiàn)TETs）的研究和應(yīng)用。 方法 查閱近年來國內(nèi)外有關(guān)FTETs 研究的相關(guān)文獻，并進行綜合分析。 結(jié)果 功能性組織工程（functionaltissue engineering，F(xiàn)TE）作為一種新方法，強調(diào)了機械應(yīng)力對于成功構(gòu)建組織工程復合物的重要性以及對體內(nèi)組織重塑的影響。在組織工程肌腱的研究中引入FTE 方法，通過測量正常肌腱組織的體內(nèi)載荷，利用這些信息指導設(shè)計能承受體內(nèi)載荷的合適的組織工程肌腱復合物，可望解決修復肌腱缺損的組織工程肌腱生物力學功能不能滿足體內(nèi)力學環(huán)境需要的問題。 結(jié)論 FTETs 對于治療肌腱缺損具有廣闊的應(yīng)用前景。
目的 探討SD 大鼠骨骼肌脫細胞的優(yōu)化處理方法。 方法 SD 大鼠16 只，雌雄不限，體重180 ～ 200 g。取其中10 只大鼠36 條骨骼肌肌束，隨機分為3 組，正常組（A 組，n=4）：不作脫細胞處理；時間組（T 組）及濃度組（C 組）按照低滲- 去垢劑方法進行脫細胞處理（n=16），其中T 組十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）濃度均為1.0%，根據(jù)處理時間不同（24、48、72、96 h），分為T1、T2、T3、T4 組（n=4）；C 組處理時間均為48 h，根據(jù)SDS濃度不同（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）分為C1、C2、C3、C4 組（n=4）。取各組材料行HE 染色觀察及羥脯氨酸含量檢測，并根據(jù)結(jié)果篩選最優(yōu)脫細胞處理條件。另取6 只SD 大鼠14 條完整肌束，隨機取7 條按照最優(yōu)條件進行脫細胞處理（實驗組），余7 條作為正常對照（對照組），對肌束行大體觀察、Masson 染色及生物力學檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示T1、T2、C1、C2、C3 組肌纖維與A 組無差異；C4 組肌纖維部分脫除；T3 組肌纖維完全脫除且基膜結(jié)構(gòu)保留完整；T4 組肌纖維完全脫除但基膜結(jié)構(gòu)部分被破壞。羥脯氨酸含量檢測：A 組與C1、C2、C3、T1 及T2 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；A 組與C4、T3 和T4 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；C4 組與T3、T4 組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；T3 組和T4 組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。根據(jù)HE 染色及羥脯氨酸含量檢測實驗結(jié)果篩選出最優(yōu)脫細胞處理條件為4℃、1.0% SDS、72 h。大體觀察：實驗組與對照組比較肌束顏色變淺，呈半透明狀，且結(jié)構(gòu)相對較松散。Masson 染色觀察：實驗組膠原纖維連續(xù)性良好，較對照組結(jié)構(gòu)疏松。生物力學測試：實驗組及對照組最大破壞載荷分別為（1.38 ± 0.35） N及（1.98 ± 0.77）N，最大拉伸位移分別為（3.19 ± 3.23）mm 及（3.56 ± 2.17）mm，兩組以上指標差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 應(yīng)用1.0% SDS，于4℃條件下對大鼠骨骼肌經(jīng)震蕩處理72 h 可得到完全去除肌纖維且ECM 保留完好的脫細胞基質(zhì)。
對組織工程化肌腱領(lǐng)域中目前研究的主要成果進行綜述，著重闡述了肌腱細胞外基質(zhì)替代物、肌腱細胞生物學性質(zhì)及肌腱細胞與細胞外基質(zhì)材料復合研究中的主要問題。認為，研制適于肌腱細胞生長、粘附和發(fā)揮功能的細胞外基質(zhì)材料；建立生長、增殖可調(diào)控的肌腱細胞系；在模擬體內(nèi)力學條件下，進行肌腱細胞三維培養(yǎng)，將是研究具有特定修復功能的組織工程化肌腱的重要問題。
目的綜述肩袖損傷修復的界面組織工程研究進展。方法查閱近年國內(nèi)外有關(guān)肩袖損傷修復的界面組織工程相關(guān)研究文獻，并進行總結(jié)分析。結(jié)果界面組織工程研究是通過多種方法重建復雜的、層次分明的界面組織，修復或再生受損的不同組織連接部位。肩袖損傷界面組織工程主要包括種子細胞、生長因子、生物材料、氧濃度和力學刺激等方面。結(jié)論肩袖損傷愈合和再生的最佳策略不僅需要使用具有梯度變化的生物材料，還需要種子細胞、生長因子和特定培養(yǎng)條件（例如氧濃度和力學刺激）的結(jié)合，然而相應(yīng)治療手段的臨床轉(zhuǎn)化仍然是一個非常緩慢的過程。
目的 總結(jié)巨大肩袖撕裂的治療及研究進展。 方法 查閱巨大肩袖撕裂臨床治療及實驗研究的相關(guān)文獻，并進行綜合分析。 結(jié)果 巨大肩袖撕裂的治療方法主要有非手術(shù)治療、清創(chuàng)減壓術(shù)、直接修復術(shù)、肌腱轉(zhuǎn)移術(shù)以及各種材料修復，其療效各異。近年來，出現(xiàn)了許多有關(guān)巨大肩袖撕裂治療的實驗研究，如基因治療、細胞治療和組織工程技術(shù)，有望為臨床醫(yī)生提供新的治療策略。 結(jié)論 巨大肩袖撕裂的治療對臨床醫(yī)生是一個挑戰(zhàn)，治療方案的選擇需要從多方面考慮；傳統(tǒng)手術(shù)方法修復斷裂肩袖效果有限，巨大肩袖撕裂的研究和治療技術(shù)尚需進行深入研究。
目的 探討玻璃化凍存組織工程肌腱植入大鼠體內(nèi)修復跟腱缺損后不同時期，大鼠的免疫排斥反應(yīng)及對肝、腎、心血管功能的影響。 方法 抽取1 周齡SD 大鼠尾腱，采用組織塊法培養(yǎng)肌腱細胞。取第2 ～ 4 代肌腱細胞，以5 × 106 個/mL 細胞密度接種至長1.5 cm 生物衍生肌腱材料，復合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程肌腱。采用21%DMSO 作為玻璃化凍存保護液，Eurocollins solution 作為4℃條件下預冷液和洗脫液的基礎(chǔ)液體，按自制的玻璃化凍存方法凍存。健康SD大鼠72 只，雌雄不限，體重210 ～ 230 g。隨機分成A（n=32）、B（n=32）、C（n=8）3 組。A、B 組實驗動物于跟腱中段制備長約0.5 cm 肌腱缺損模型，分別將玻璃化凍存后及未凍存的組織工程肌腱移植修復缺損肌腱；C 組大鼠未手術(shù)，為正常對照。術(shù)后2、4、6、8 周，行大體觀察、肝、腎及心血管功能檢測；術(shù)后2、4、6 周行血清免疫學檢測。 結(jié) 果 A、B 組植入部位均未見組織壞死、積液及化膿感染；術(shù)后2 周，A、B 組均出現(xiàn)粘連現(xiàn)象，4 ～ 6 周逐漸好轉(zhuǎn)，8 周未見明顯粘連，新生組織連續(xù)性完整，肌腱橋接部已愈合，與正常肌腱類似。術(shù)后2、4、6 周，血清中IgG 和IgM 含量A、B、C 組組間比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。肝功能檢測：A 組術(shù)后4 周，B 組術(shù)后4、6 周，谷草轉(zhuǎn)氨酶均低于C 組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；其余各時間點A、B 組谷草轉(zhuǎn)氨酶與C 組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。各時間點A、B 組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、ALP、直接膽紅素和總膽紅素與C 組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。腎功能檢測：術(shù)后2 周，A 組血清白蛋白和B 組肌酐明顯下降，與C 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；術(shù)后4、6、8 周，A、B 組各指標濃度與C 組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。心血管功能檢測：A 組各時間點血糖、甘油三酯、膽固醇與C 組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；B 組術(shù)后8 周甘油三酯與C 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 玻璃化凍存的組織工程肌腱植入大鼠體內(nèi)修復跟腱缺損，未引起明顯免疫排斥反應(yīng)，對肝、腎及心血管功能無明顯影響。
目的 檢測體外構(gòu)建的組織工程骨移植后兔外周血T細胞亞群的變化，對移植組織進行組織學觀察，探討以生物衍生材料作為骨組織工程支架材料的可行性。 方法 組織工程骨以兔骨膜來源的成骨細胞為種子細胞，經(jīng)抗原自消化、部分脫鈣、凍干后的異體骨為支架材料于體外構(gòu)建。將健康新西蘭白兔48只制成1 cm長橈骨缺損模型后，隨機分成A～D 4組，每組12只，分別用部分脫鈣凍干骨（partial demineralized freezedried bone,PDFDB）、組織工程骨、自體骨、同種異體骨植入兔橈骨節(jié)段性缺損。術(shù)后1、2、4周取材,用流式細胞儀檢測4種材料移植早期兔外周血T淋巴細胞亞群的變化；通過常規(guī)組織學檢測觀察2、4、8、12周時4種材料的成骨作用。 結(jié)果 B組術(shù)后2周材料孔隙內(nèi)有成骨細胞和成軟骨細胞，可見骨、軟骨混合性新生物形成，周邊分布有破骨細胞，部分網(wǎng)架呈蠶食狀被破壞吸收。術(shù)后4周，形成的新生骨過渡為編織骨。A、B組材料植入后1、2周外周血CD4+和CD8+ T細胞較術(shù)前明顯升高(P＜0.05)；術(shù)后4周CD4+ T細胞較術(shù)前輕度偏高，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。C組術(shù)后CD4+和CD8+ T細胞升高不明顯(P＞0.05)。D組術(shù)后1、2、4周外周血CD4+和CD8+ T細胞較術(shù)前及其他各組同期均明顯增高(P＜0.05)。 結(jié)論 PDFDB為支架材料構(gòu)建的細胞材料復合物移植后外周血T淋巴細胞增高，但不影響其良好的修復骨缺損能力，生物衍生骨可作為支架材料應(yīng)用于骨組織工程研究。
目的 比較培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨細胞的生物學特性，探討培養(yǎng)軟骨作為半月板移植替代物的可能性。方法 分別自3周齡大耳白兔關(guān)節(jié)軟骨和半月板分離軟骨細胞，行單層傳代培養(yǎng)和離心管培養(yǎng)。將離心管培養(yǎng)形成的軟骨和6周齡兔半月板行組織學和透射電鏡觀察，比較關(guān)節(jié)軟骨細胞和半月板纖維軟骨細胞的生長曲線。流式細胞術(shù)檢測第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細胞和半月板纖維軟骨細胞周期。結(jié)果 第4代關(guān)節(jié)軟骨細胞呈去分化，似成纖維細胞。離心管關(guān)節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)能形成軟骨，半月板纖維軟骨細胞不能形成軟骨。培養(yǎng)軟骨和半月板的組織學及超微結(jié)構(gòu)差異顯著，培養(yǎng)軟骨中軟骨細胞5%呈現(xiàn)凋亡。第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細胞中亞二倍體細胞比例明顯多于第2、4代半月板纖維軟骨細胞（Plt;0.05）。結(jié)論 半月板來源的軟骨細胞經(jīng)離心管培養(yǎng)不能形成軟骨組織，關(guān)節(jié)軟骨細胞離心培養(yǎng)形成軟骨不能作為半月板的移植物，關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨組織存在明顯的區(qū)別。
目的 探討離心管培養(yǎng)軟骨作為移植材料的可能性。方法 3周齡兔關(guān)節(jié)軟骨細胞經(jīng)離心管培養(yǎng) 2周形成軟骨 ,另取 6周齡兔肱骨頭關(guān)節(jié)軟骨、脛骨近端生長板和半月板 ,并對 4種軟骨進行透射電鏡觀察 ,比較其軟骨細胞和細胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)。結(jié)果 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨特的超微結(jié)構(gòu) ,與關(guān)節(jié)軟骨和生長板有一定的相似性 ,而與半月板有明顯區(qū)別。4種軟骨都形成了各自不同的細胞和細胞外基質(zhì)特征 ,離心管培養(yǎng)軟骨呈現(xiàn)典型軟骨細胞凋亡 ,生長板表現(xiàn)“黑暗”軟骨細胞 ,關(guān)節(jié)軟骨和半月板未見細胞凋亡。結(jié)論 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨特的超微結(jié)構(gòu) ,可作為關(guān)節(jié)軟骨和生長板的移植物。
目的研究反復凍融結(jié)合核酸酶處理小牛肌腱脫細胞效果以及對肌腱組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生化成分和力學特性的影響。 方法取新鮮1日齡西門塔爾小牛跟腱48根，隨機分為3組（n=16）：A組為正常對照組，B組采用液氮冷凍/37℃復溫反復凍融5次，C組在反復凍融基礎(chǔ)上結(jié)合核酸酶處理24 h。每組取2根跟腱用于掃描電鏡觀察，3根用于、組織學及免疫組織化學染色觀察，3根用于DNA殘留量檢測，8根用于生物力學檢測。 結(jié)果掃描電鏡觀察示A、B組膠原纖維排列致密有序，形態(tài)完整，未見斷裂；C組膠原纖維排列松散，幾乎無斷裂。阿利新藍、天狼星紅染色及免疫組織化學染色示C組糖胺聚糖、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、纖維連接蛋白大部分被保留；HE染色和DAPI染色示A、B組膠原纖維間可見較多完整的細胞核，而C組膠原纖維之間未見完整細胞核，但腱內(nèi)膜上仍有部分細胞核殘留。A、B、C組的DNA殘留量分別為（0.24 ± 0.12）、（0.16 ± 0.07）、（0.05 ± 0.02）μg/mg，C組顯著低于A、B組（P lt; 0.05）；A、B組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 生物力學檢測顯示，A、B、C組間拉伸強度、斷裂應(yīng)變、剛度和彈性模量差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論反復凍融結(jié)合核酸酶處理小牛肌腱，可有效去除細胞成分，同時基本保留肌腱原始膠原纖維結(jié)構(gòu)、形態(tài)、大部分細胞外基質(zhì)成分和力學特性。