建立人結(jié)腸癌細胞株SW480裸鼠移植瘤模型，觀察8肽生長抑素(SMS 201-995，SMS)對移植瘤的作用及機理。結(jié)果∶SMS組及SMS+PG(5肽胃泌素)組移植瘤的體積、重量、瘤細胞內(nèi)cAMP、DNA、蛋白質(zhì)含量、S期和G2M期細胞數(shù)及增殖指數(shù)均顯著低于PG組及對照組，PG組顯著高于對照組；而G0/G1期細胞數(shù)則顯著高于PG組及對照組，PG組顯著低于對照組。本實驗結(jié)果提示：生長抑素具有直接抑制人結(jié)腸癌細胞株SW480移植瘤生長的作用，又可抑制胃泌素對移植瘤的促增殖作用。這種作用機理是通過抑制瘤細胞內(nèi)cAMP、DNA和蛋白質(zhì)的合成，從而抑制瘤細胞從G0/G1期進入到S期和G2M期。這為大腸癌患者應(yīng)用生長抑素類似物進行內(nèi)分泌治療提供了實驗依據(jù)。
目的 通過復(fù)制人肝癌細胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型，觀察綠茶提取物表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）干預(yù)對HepG2移植瘤新生血管生成的影響。 方法 瘤體接種復(fù)制HepG2移植瘤模型，荷瘤裸鼠20只隨機分組，實驗組給予EGCG溶液每日20 mg/（kg·只），腹腔注射3周，對照組給予等量滅菌注射用水3周，末次用藥24 h，后處死裸鼠，剝離移植瘤。常規(guī)病理切片觀察移植瘤組織結(jié)構(gòu)；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免疫組織化學(xué)法檢測移植瘤缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）mRNA及蛋白表達，并通過檢測CD34表達計數(shù)瘤組織微血管密度（MVD）。 結(jié)果 組織病理學(xué)觀察實驗組移植瘤見大量壞死區(qū)，瘤體內(nèi)血管數(shù)量明顯少于對照組；實驗組HIF-1α、VEGF mRNA及蛋白表達水平比對照組均明顯下調(diào)（P＜0.05），實驗組MVD比對照組明顯下降（P＜0.05）。 結(jié)論 EGCG可抑制荷瘤裸鼠HepG2移植瘤新生血管生成。
目的 建立人胃癌羥喜樹堿（HCPT）耐藥細胞系SGC-7901/HCPT裸鼠皮下移植瘤模型并研究其生物學(xué)特征。方法 體外培養(yǎng)人胃癌細胞系SGC-7901和SGC-7901/HCPT，采用皮下注射方式分別接種至裸小鼠，待腫瘤長徑達1.0 cm時，將其切下剪成直徑為0.1～0.2 cm小塊，再接種至第2代裸鼠皮下進行傳代，重復(fù)至第4代。對第4代移植瘤光鏡下的組織學(xué)形態(tài)、電鏡下的超微結(jié)構(gòu)及生長特點進行觀察，四甲基偶氮唑鹽（MTT）法檢測其耐藥性。結(jié)果 裸鼠皮下移植瘤呈圓形或橢圓形，表面可見豐富的血管網(wǎng)。光鏡下見親代細胞移植瘤的細胞大小基本一致，排列較整齊，細胞核的大小較一致； 而耐藥細胞移植瘤的細胞形態(tài)較不規(guī)則，排列紊亂，細胞核的大小差異較大。電鏡下見親代細胞移植瘤細胞的細胞核無腫脹，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常； 耐藥細胞移植瘤細胞的細胞核略腫脹，核異染色質(zhì)凝集，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹較明顯。與親代細胞第4代移植瘤相比較，耐藥細胞第4代移植瘤對HCPT的耐藥指數(shù)為9.02±0.78，對阿霉素、絲裂霉素C、5-氟尿嘧啶及依托泊苷的耐藥指數(shù)分別為1.24±0.09、1.31±0.17、0.96±0.12和1.07±0.16。結(jié)論 本實驗建立了穩(wěn)定的人胃癌HCPT耐藥細胞系SGC-7901/HCPT裸鼠移植瘤模型，耐藥細胞對HCPT的耐藥性保持穩(wěn)定，且對其他化療藥物無交叉耐藥性，可用于下游實驗研究。
目的 探討5-氟尿嘧啶(5-FU)和柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine, SZ)對裸鼠皮下移植瘤胰腺癌細胞BxPC-3凋亡基因的作用。方法 用RT-PCR和Western blot法分別檢測5-FU及SZ單獨或聯(lián)合作用后裸鼠皮下移植瘤凋亡相關(guān)基因NF-κB (p65)、bcl-2及cyclinD1 mRNA和蛋白表達水平以及Bax蛋白表達水平的變化。結(jié)果 5-FU (7.5和15 mg/kg)和SZ(10和20 mg/kg)單獨或聯(lián)合作用裸鼠皮下移植瘤，其NF-κB (p65) mRNA表達相對含量和蛋白表達水平與各自對照組比較，除SZ組2個亞組外，其余各組均明顯降低（P＜0.01）； bcl-2和cyclinD1 在mRNA和蛋白水平以及Bax蛋白表達量與各自對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）； 上述指標(biāo)經(jīng)多因素方差分析顯示二者間有明顯的交互作用。結(jié)論 Bax水平上調(diào), bcl-2、cyclinD1及NF-κB (p65)水平下調(diào)可能是SZ可協(xié)同增強5-FU誘導(dǎo)裸鼠皮下移植瘤胰腺癌細胞BxPC-3凋亡的機理之一。
目的研究中藥茯苓對SGC-7901胃癌細胞株裸鼠體內(nèi)移植瘤的影響。 方法①將10只裸鼠建立移植瘤模型后，隨機分為空白對照組和茯苓組，每組5只，分別給予生理鹽水和茯苓灌胃（0.5 mL），連續(xù)灌胃32 d。每間隔3 d計算移植瘤的體積，繪制移植瘤生長曲線。至第32天時處死裸鼠，稱取瘤體重量，計算抑瘤率；同時采用免疫組化染色方法檢測2組裸鼠移植瘤組織中B細胞淋巴瘤基因-2（B cell lymphoma 2, Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、 胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）及血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的表達。②制備含茯苓血清。將SGC-7901胃癌細胞株分為2組，空白對照組加入含生理鹽水血清，茯苓組加入含茯苓血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)。分別于處理后24 h和48 h行Western-blot法檢測胃癌細胞中Bcl-2及Bax的表達。 結(jié)果第32天時，空白對照組〔（2 652.17±225.01）mm3和（2.48±0.21）g〕裸鼠的移植瘤體積和質(zhì)量均大于茯苓組〔（1 247.56±277.23）mm3和（1.28±0.28）g〕，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.050）。茯苓的抑瘤率為48.39%。免疫組化檢測結(jié)果顯示，茯苓組裸鼠移植瘤組織中Bcl-2〔（4.20±1.10）分和（8.00±1.20）分〕和VEGF〔（3.80±0.45）分和（7.80±1.10）分〕的表達均低于空白對照組（P＜0.050），而Bax〔（7.40±1.34）分和（3.00±0.71）分〕、Caspase-3〔（6.60±1.34）分和（2.60±0.55）分〕及Caspase-9〔（7.20±1.79）分和（4.00±1.22）分〕的表達均高于空白對照組（P＜0.050）。與空白對照組（1.72±0.03）比較，24 h（0.96±0.04）和48 h（0.77±0.04）時茯苓組Bcl-2的表達水平均較高（P＜0.050），且茯苓組48 h時Bcl-2的表達水平高于24 h時（P＜0.050）；與空白對照組（0.15±0.01）比較，24 h時（0.19±0）茯苓組Bax的表達水平變化不明顯（P＞0.050），但48 h時（0.55±0.01）Bax的表達水平高于空白對照組和24 h茯苓組（P＜0.050）。 結(jié)論茯苓能夠抑制裸鼠移植瘤的生長，其機理可能與線粒體凋亡通路及抑制VEGF的表達有關(guān)。
目的研究羥基紅花黃色素A（HSYA）對小鼠Lewis肺癌移植瘤中微血管密度（MVD）及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）mRNA表達的影響，探討HSYA抑制腫瘤的分子機制。 方法運用C57/BL小鼠接種Lewis肺癌細胞株于右側(cè)肋腹皮下建立小鼠肺癌移植瘤模型，隨機分為對照組（生理鹽水）、環(huán)磷酰胺組（CTX）、HSYA不同劑量組（28 mg/L、56 mg/L、112 mg/L），給藥方式均為腹腔注射給藥。用藥22 d后脫頸處死小鼠并剝離腫瘤組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測MVD，采用實時熒光定量PCR檢測各組腫瘤組織中VEGF mRNA的表達情況。 結(jié)果56 mg/L、28 mg/L HSYA組與CTX組小鼠腫瘤組織MVD分別為30.01±3.12、22.56±2.11、16.21±2.40，顯著低于對照組的41.10±2.93以及112 mg/L HSYA組的37.66±3.04，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.82，P=0.010；χ2=3.16，P=0.007；χ2=4.58，P=0.000）及（χ2=1.98，P=0.038；χ2=2.45，P=0.016；χ2=3.82，P=0.001）。28 mg/L HSYA組與對照組VEGF擴增熒光表達閾值所需循環(huán)次數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但其VEGF mRNA的表達值僅為0.43±0.16，明顯低于對照組的0.82±0.06，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=0.77，P=0.038）。 結(jié)論28 mg/L HSYA能夠使小鼠Lewis肺癌移植中MVD明顯減少，具有抑制腫瘤生長的作用，可能與下調(diào)VEGF mRNA表達有關(guān)。
目的 觀察 DDX46 基因沉默后食管鱗癌 Eca-109 細胞裸鼠皮下移植瘤的生長變化，在活體動物模型中進一步研究 DDX46 在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法 4 周齡健康雌性 BALB/c 裸鼠 25只隨機分為 3 組。應(yīng)用 RNA 干擾技術(shù)通過慢病毒載體構(gòu)建獲得 DDX46 基因沉默的慢病毒顆粒（實驗組：DDX46-shRNA-LV，n=10）及空載體慢病毒顆粒（對照組：Control-LV，n=10），分別感染食管鱗癌 Eca-109 細胞株，每只 4×106個細胞量注射至 BALB/c 裸鼠右腋皮下；以人永生化食管鱗狀上皮細胞 Het-1A 為空白對照組（n=5），每側(cè) 4×106 個細胞量分別注射至 BALB/c 裸鼠雙側(cè)腋皮下。檢測各組移植瘤生長情況，活體成像儀觀察各組熒光表達量。Western blotting 檢測 DDX46 基因沉默后移植瘤組織凋亡信號通路關(guān)鍵分子表達的變化。 結(jié)果 與對照組相比，沉默 DDX46 基因使裸鼠移植瘤體積減小、重量減輕，生長減緩（P<0.001）；小動物活體成像顯示 DDX46-shRNA-LV 組熒光區(qū)總熒光表達量和平均熒光表達量均明顯低于 Control-LV 組（P<0.001）；Het-1A 細胞接種裸鼠不成瘤。Western blotting 檢測顯示，與對照組比較，沉默 DDX46 基因使移植瘤 DDX46 蛋白表達水平顯著下降（P<0.01），而 cleaved Caspase-3 和 cleaved PARP-1 蛋白表達水平顯著上升（P<0.01）。 結(jié)論 沉默 DDX46 基因可顯著抑制裸鼠移植瘤的生長，其機制可能是通過激活細胞凋亡信號通路而發(fā)揮抑瘤作用。
目的優(yōu)化人原代胰腺導(dǎo)管癌（PDAC）細胞及腫瘤相關(guān)成纖維細胞（CAFs）的分離及培養(yǎng)方法，驗證 CAFs 對原代 PDAC 細胞的體外生長以及其對高度免疫缺陷模型 NOG 小鼠體內(nèi)成瘤的影響，以探索人源性異種移植瘤（PDX）模型構(gòu)建的新方法。方法首先原代培養(yǎng)手術(shù)切除的 PDAC 組織。以原代 PDAC 細胞單獨培養(yǎng)為對照，觀察 CAFs 和原代 PDAC 細胞共培養(yǎng)對 PDAC 細胞傳代生長活性的影響。最后在 NOG 小鼠肩胛部注射混合培養(yǎng)的原代 PDAC 細胞和 CAFs，觀察 PDX 模型建模情況。結(jié)果原代 PDAC 細胞在體外單獨培養(yǎng)傳代少，均在 5 代及以內(nèi)停止生長；與 CAFs 共培養(yǎng)可促進原代 PDAC 細胞生長活性，可穩(wěn)定傳至 10 代以上。NOG 小鼠體內(nèi)注射混合細胞（原代 PDAC 細胞+CAFs）建模 2～3 周即可形成腫瘤，而注射 CAFs 無腫瘤形成?；旌霞毎ńＳ?13 例（92.9%）成瘤，單一細胞法有 9 例（64.3%）成瘤，可能因為樣本量少，二者成瘤率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.167）；并且腫瘤細胞注射后 2、4、6、8 周時混合細胞法建模的腫瘤體積均明顯大于對應(yīng)觀察時間點單一細胞法建模的腫瘤體積（P<0.01）。結(jié)論CAFs 對原代 PDAC 細胞生長傳代具有促進作用，原代 PDAC 細胞與 CAFs 共培養(yǎng)法可顯著提高 PDAC 原代培養(yǎng)穩(wěn)定傳代，原代 PDAC 細胞與 CAFs 混合培養(yǎng)的細胞注射可提高 NOG 小鼠 PDX 建模成功率。
目的探討 shRNA 靶向沉默接觸蛋白-1（CNTN1）基因表達對人乳腺癌細胞株 MDA-MB-468 裸鼠皮下移植瘤生長的抑制作用。方法18 只 4 周齡雄性 BALB/c 裸鼠隨機均分為 3 組，收集處于對數(shù)生長期的 MDA-MB-468 細胞（空白對照組）、轉(zhuǎn)染無義 shRNA 片段的 MDA-MB-468 細胞（空載體組）及轉(zhuǎn)染 shRNA 載體片段的 MDA-MB-468 細胞（沉默組）分別于每組裸鼠后背部皮下注射制備裸鼠皮下移植瘤模型，觀察沉默 CNTN1 基因?qū)?MDA-MB-468 細胞移植瘤生長的影響以及采用免疫組織化學(xué)方法檢測移植瘤中 CNTN1 與 Ki-67 蛋白的表達情況。結(jié)果各組裸鼠皮下接種腫瘤細胞后均成功致瘤，成瘤率為 100%。每 3 d測量種植瘤體積發(fā)現(xiàn)沉默組種植瘤生長速度顯著低于空白對照組（P<0.05）和空載體組（P<0.05），至第 18 天處死裸鼠獲取腫瘤，發(fā)現(xiàn)沉默組種植瘤的體積及質(zhì)量均顯著小或低于空白對照組（P<0.05）和空載體組（P<0.05）；沉默組種植瘤中 CNTN1 和 Ki-67 蛋白表達陽性率均明顯低于空白對照組（P<0.05）和空載體組（P<0.05）。結(jié)論沉默 CNTN1 基因表達可以抑制人乳腺癌細胞株 MDA-MB-468 細胞裸鼠移植瘤的生長。