目的：建立存活時(shí)間較長的急性重癥肝炎小鼠模型。方法：將50只BALB/c小鼠平均分成5組，其中A、B、C、D 4組為實(shí)驗(yàn)組，E組為對照組；實(shí)驗(yàn)組分別給予D氨基半乳糖（D-GalN）和脂多糖（LPS），劑量分別為800 mg/kg和10 μg/kg、500 mg/kg和10 μg/kg、500 mg/kg和5 μg/kg、300 mg/kg和5 μg/kg，用生理鹽水稀釋至1 mL，行腹腔注射；對照組E腹腔注射生理鹽水2 mL。以12 h死亡率、24 h死亡率及肝組織學(xué)改變?yōu)橛^察指標(biāo)。結(jié)果：A、B、C、D及E組小鼠12 h死亡率分別為80%%、30%、10%、0和0；24 h死亡率分別為90%、60%、30%、0和0；A和B組小鼠肝組織學(xué)均呈急性重癥肝炎表現(xiàn)，C組中有5只小鼠肝組織學(xué)符合重癥肝炎的表現(xiàn)，而該組其余小鼠及D組所有肝組織學(xué)雖有炎癥改變，但達(dá)不到重癥肝炎的程度，E組肝組織學(xué)表現(xiàn)正常。結(jié)論：LPS 10 μg/kg聯(lián)合D- GalN 500 mg/kg可成功建立12 h存活率較高的急性重癥肝炎小鼠模型。
目的探討梗阻性黃疸大鼠脂多糖結(jié)合蛋白在不同梗阻時(shí)間的變化及其增敏機(jī)理。方法將80只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為梗阻性黃疸組（OJ組，n=40）和假手術(shù)組（SO組，n=40），分別于膽總管結(jié)扎手術(shù)前及手術(shù)后5 d、10 d、15 d、20 d檢測兩組大鼠血清中脂多糖結(jié)合蛋白及血漿中內(nèi)毒素、TNF-α和IL-6水平，每組每一時(shí)相點(diǎn)各取8只大鼠。結(jié)果OJ組大鼠在膽總管結(jié)扎術(shù)后10 d，其血清中脂多糖結(jié)合蛋白值為（11.25±2.41） mg/L，較SO組〔（5.32±1.35） mg/L〕明顯升高（P＜0.05）， 且隨著梗阻時(shí)間的延長而進(jìn)一步升高。相關(guān)分析顯示，血清脂多糖結(jié)合蛋白與血漿內(nèi)毒素、TNF-α和IL-6在大部分時(shí)相呈明顯正相關(guān)。結(jié)論梗阻性黃疸時(shí)血清脂多糖結(jié)合蛋白水平升高，其增敏作用在梗阻性黃疸多器官損害中可能具有重要的作用。由此提示，通過降低血清中脂多糖結(jié)合蛋白，阻斷其增敏作用，可為防治梗阻性黃疸提供一種新的思路。
目的探討內(nèi)毒素血癥時(shí)大鼠肝組織中脂多糖結(jié)合蛋白mRNA的表達(dá)、血漿中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)含量的變化及其意義。方法經(jīng)大鼠尾靜脈注入內(nèi)毒素（5 mg/kg）建立內(nèi)毒素血癥動(dòng)物模型，檢測不同時(shí)點(diǎn)模型鼠肝組織中LBP mRNA的表達(dá)，同時(shí)檢測血漿中LBP、內(nèi)毒素、TNFα及IL6含量的變化，并與對照組相比較。另取肝組織在電鏡下觀察其病理學(xué)改變。結(jié)果隨著內(nèi)毒素血癥時(shí)間的延長，內(nèi)毒素組大鼠肝組織LBP mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，血漿中LBP、TNFα和IL6含量也明顯增加，與對照組比較差異有高度顯著性（P＜0.01）。電鏡觀察見肝細(xì)胞脂肪變，線粒體空化，枯否氏細(xì)胞數(shù)量增多、體積增大、吞噬功能增強(qiáng)。結(jié)論內(nèi)毒素血癥時(shí)，大鼠肝組織中LBP mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，血漿中LBP含量也明顯增加。由此提示，增高的LBP可能在脂多糖介導(dǎo)的枯否氏細(xì)胞激活及產(chǎn)生、釋放各種炎性介質(zhì)中可能起了重要作用。
目的 觀察脂多糖（LPS）及前炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α誘導(dǎo)人原代氣道上皮細(xì)胞人β防御素-2（hBD-2）的表達(dá)，探討呼吸道先天性病原體防御機(jī)制。方法 LPS、IL-1β及TNF-α刺激培養(yǎng)的人原代氣道上皮細(xì)胞后，RT-PCR法檢測hBD-2 mRNA的表達(dá)，Western blot和免疫組化法檢測hBD-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 正常人原代上皮細(xì)胞有微量hBD-2 mRNA表達(dá)，不同質(zhì)量濃度的LPS、IL-1β、TNF-α刺激細(xì)胞后，hBD-2 mRNA表達(dá)呈劑量依賴性增加，與對照組差異顯著。0.1 μg/mL的LPS、1 ng/mL的IL-1β和10 ng/mL的TNF-α刺激上皮細(xì)胞4 h后，細(xì)胞均可見hBD-2蛋白表達(dá)。結(jié)論 一定劑量的LPS及前炎性細(xì)胞因子可誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞hBD-2表達(dá)，且hBD-2可較快表達(dá)，hBD-2的表達(dá)可能是氣道最初的防御反應(yīng)。
目的 探討 霧化吸入前列腺素 E1 （ PGE1 ）對脂多糖（LPS）所致大鼠急性肺損傷（ALI）模型Th1/Th2的影響。方法 尾靜脈注射LPS復(fù)制大鼠ALI模型，PGE1霧化入寬大玻璃瓶內(nèi)讓大鼠自由吸入，用ELISA法檢測大鼠外周血和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中干擾素γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素4（IL-4）的水平及IFN-γ/IL-4比值。結(jié)果 LPS組外周血及BALF中IFN-γ/IL-4比值較生理鹽水對照組（NS組）顯著升高（Plt;0.01），PGE1組外周血IFN-γ/IL-4（Th1/Th2）比值在6、12及24 h時(shí)間點(diǎn)顯著低于LPS組（Plt;0.01），而BALF中各時(shí)間點(diǎn)IFN-γ/IL-4（Th1/Th2）比值顯著低于LPS組（Plt;0.01）。結(jié)論 霧化吸入PGE1可使LPS所致大鼠ALI失衡的Th1/Th2趨于平衡，減輕LPS所致大鼠ALI。
目的 研究脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）抑制肽P12對脂多糖（LPS）與小鼠肺泡巨噬細(xì)胞（AMs）結(jié)合的抑制作用，探討LBP抑制肽體內(nèi)阻斷內(nèi)毒素信號傳導(dǎo)通路的機(jī)制。方法 40只小鼠隨機(jī)分為5組：對照組、內(nèi)毒素血癥組、低劑量P12組、中劑量P12組和高劑量P12組，每組8只。腹腔內(nèi)注射LPS復(fù)制內(nèi)毒素血癥模型，尾靜脈注射P12，流式細(xì)胞檢測分析（FACS）異硫氰酸熒光素標(biāo)記的LPS（FITC-LPS）與AMs的結(jié)合，以平均熒光強(qiáng)度（MFI）表示；ELISA法檢測小鼠血清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）的含量。結(jié)果 內(nèi)毒素血癥組小鼠AMs MFI明顯高于對照組（45.31%比4.61%，Plt;0.05）；低劑量P12組、中劑量P12組和高劑量P12組的MFI分別為40.08%、30.76%和24.45%，明顯低于內(nèi)毒素血癥組（低劑量組P＞0.05，中劑量P12組和高劑量組P均lt;0.05）。內(nèi)毒素血癥組小鼠血清中TNF-α的含量顯著高于對照組[（180.17±39.14）pg/mL比（24.88±5.82）pg/mL，Plt;0.01]；低劑量P12組、中劑量P12組和高劑量P12組血清中TNF-α的含量分別為（112.69±19.78）pg/mL、（86.34±9.25）和（70.48±8.48）pg/mL，均明顯低于內(nèi)毒素血癥組（P均lt;0.05）。結(jié)論 LBP抑制肽P12抑制了LPS與內(nèi)毒素血癥小鼠AMs的結(jié)合，顯著降低了LPS誘導(dǎo)的TNF-α的產(chǎn)生。
目的 觀察不同潮氣量通氣對脂多糖所致大鼠急性肺損傷的影響, 以及谷氨酰胺的防護(hù)作用。方法 將30 只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組。實(shí)施麻醉和氣管切開后, 氣管內(nèi)注入脂多糖( LPS) 5 mg/kg, 接小動(dòng)物通氣機(jī)進(jìn)行機(jī)械通氣, A 組實(shí)施常規(guī)潮氣量通氣, B 組實(shí)施大潮氣量通氣,C 組大潮氣量通氣前1 h靜脈注入谷氨酰胺干預(yù)。每小時(shí)行1 次動(dòng)脈血?dú)夥治?。通? h 后頸動(dòng)脈放血處死大鼠。測定全肺濕重, 并計(jì)算肺系數(shù)( 肺濕重/ 體重×100) 。測定BALF 中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量、TNF-α、IL-6 和中性粒細(xì)胞趨化因子1( CINC-1) 水平, 肺組織勻漿髓過氧化物酶( MPO) 、超氧化物歧化酶( SOD) 水平。結(jié)果 B 組大鼠PaO2 值、肺組織SOD 水平較A 組顯著下降,肺系數(shù)、BALF中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量、TNF-α、IL-6、CINC-1 水平、肺組織MPO 水平較A 組顯著增高; C 組大鼠PaO2 值、肺組織SOD 水平較B 組顯著升高, 肺系數(shù)、BALF 中白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白含量、TNF-α、IL-6、CINC-1 水平、肺組織MPO水平較B 組顯著下降。結(jié)論 大潮氣量通氣能加重脂多糖所致大鼠急性肺損傷, 而谷氨酰胺對此有較明顯的防護(hù)作用。
目的 結(jié)論探討采取小劑量脂多糖( LPS) 間斷腹腔注射的方式制作內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠ALI和肺纖維化動(dòng)物模型, 了解該方法引起的肺急性炎性反應(yīng)以及纖維化的發(fā)展過程。方法健康C57BL/ 6 小鼠40 只隨機(jī)分為陰性對照組( Con 組) 、LPS-3 d 組、LPS-2 周組和LPS-4 周組, 每組10 只。對三個(gè)LPS 處理組連續(xù)3 d 腹腔注射LPS( 5 mg /kg) , 分別于各觀察終點(diǎn)( 3 d、2 周和4 周) 取材; 對Con 組連續(xù)3 d 腹腔注射等體積生理鹽水, 于注射后3 d 取材。通過HE 染色和Van-Gieson 膠原染色及Ashcroft 肺纖維化評分了解LPS 刺激后不同時(shí)期小鼠肺組織炎癥和纖維化發(fā)展的過程, 同時(shí)采用RT-PCR 檢測了解肺組織Ⅰ型前膠原和α平滑肌肌動(dòng)蛋白( α-SMA) mRNA 表達(dá)強(qiáng)度, 通過肺組織羥脯氨酸含量測定了解肺間質(zhì)膠原沉積和纖維化程度, 并觀察各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的存活情況。結(jié)果 小鼠在接受LPS 腹腔注射后3 d 肺組織即出現(xiàn)急性炎性反應(yīng); 注射后2 周, 肺間質(zhì)出現(xiàn)膠原沉積, Ashcroft纖維化評分增高; 4 周形成明顯肺間質(zhì)纖維化, Ashcroft 纖維化評分進(jìn)一步升高。肺組織膠原及α-SMA的表達(dá)量自LPS 刺激后3 d 起增高, 4 周后達(dá)到高峰。到觀察終點(diǎn)所有動(dòng)物全部存活。結(jié)果 LPS 誘發(fā)的ALI 和炎性反應(yīng)在感染早期即啟動(dòng)了纖維化進(jìn)程。使用劑量為5 mg/kg的LPS 對于小鼠進(jìn)行連續(xù)3 d 腹腔注射可以成功制作內(nèi)毒素誘導(dǎo)的小鼠ALI 和肺纖維化的動(dòng)物模型, 制作成功率高,動(dòng)物死亡率低, 適合對小動(dòng)物進(jìn)行較長時(shí)間的觀察和研究。
目的 研究髓樣分化蛋白2( MD-2) 在脂多糖( LPS) 誘導(dǎo)的急性肺損傷( ALI) 大鼠肺組織中的表達(dá)及其作用。方法 20 只健康雄性SD 大鼠隨機(jī)分為LPS 組和對照組, 通過支氣管肺泡灌洗分離肺泡巨噬細(xì)胞, 采用RT-PCR、Western blot 和免疫組化方法分別檢測MD-2 mRNA 和蛋白的表達(dá), ELISA 方法測定血清腫瘤壞死因子α( TNF-α) 水平。將MD-2 siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肺泡巨噬細(xì)胞系NR8383, 以終濃度1 μg/mL的LPS 刺激細(xì)胞, 采用RT-PCR 和Western blot 方法分別測定細(xì)胞MD-2mRNA 和蛋白的表達(dá), ELISA 方法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液TNF-α水平。結(jié)果 LPS 組大鼠肺泡巨噬細(xì)胞和肺組織標(biāo)本中MD-2 mRNA 和蛋白的表達(dá)均顯著高于對照組( P lt;0. 01) , 血清TNF-α水平明顯升高( P lt;0. 01) 。在LPS 刺激下, NR8383 細(xì)胞MD-2 mRNA 和蛋白的表達(dá)顯著增加( P lt;0. 01) , 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α水平升高( P lt;0. 01) 。經(jīng)MD-2 siRNA 處理后, NR8383 細(xì)胞在LPS 刺激下MD-2mRNA 和蛋白的表達(dá)未見明顯增加( P gt; 0. 05) , 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α水平未見明顯升高( P gt;0. 05) 。結(jié)論 MD-2 在LPS 所致ALI 大鼠肺組織中表達(dá)顯著上調(diào), 沉默肺泡巨噬細(xì)胞MD-2 基因可抑制LPS 刺激引起的細(xì)胞因子分泌增加, 提示MD-2 在LPS所致大鼠ALI 中起重要作用。
目的 探討肝臟X 受體α( LXRα) 激活劑T0901317 對脂多糖( LPS) 所致急性肺損傷( ALI) 大鼠動(dòng)物模型的保護(hù)效應(yīng)。方法 72 只雄性Wistar 大鼠, 按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組、LPS 組和T0901317 干預(yù)組。觀察各組大鼠PaO2、肺組織髓過氧化物酶( MPO) 活性及肺組織病理變化; 采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 檢測肺組織中LXRα、腫瘤壞死因子α( TNF-α) mRNA 表達(dá); 采用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA) 檢測TNF-α蛋白變化; 采用免疫組化染色觀察肺組織LXRα蛋白變化。結(jié)果 與對照組比較, LPS 致傷后各時(shí)間點(diǎn)PaO2 顯著降低, 肺組織干/ 濕重比值( W/D) 、MPO 活性均顯著升高( P lt;0. 05 ) , 組織病理顯示肺組織受損; 肺組織LXR-αmRNA 表達(dá)下降, TNF-αmRNA 升高( P lt;0. 05 ) , 肺組織勻漿和動(dòng)脈血清中TNF-α顯著升高。免疫組化顯示LXRα蛋白在對照組肺組織中表達(dá)較高水平, 在LPS致傷后可見該蛋白表達(dá)較對照組顯著下降( P lt; 0.05 ) 。T0901317 干預(yù)組LXRα在基因和蛋白水平表達(dá)上調(diào), TNF-α表達(dá)下降, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P lt; 0. 05) , 同時(shí)觀察到肺部炎癥明顯減輕。結(jié)論 在LPS誘發(fā)的大鼠ALI 模型中, T0901317 通過促進(jìn)LXR-α表達(dá), 抑制TNF-α表達(dá), 減輕炎性細(xì)胞在肺組織的浸潤和聚集, 從而具有保護(hù)作用。