目的 觀察細(xì)胞周期蛋白依賴激酶5（Cdk5）和p25在不同病程皇家外科學(xué)院（RCS）大鼠視網(wǎng)膜色素變性（RP）模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，探討Cdk5/p25介導(dǎo)的光感受器細(xì)胞凋亡在RP發(fā)病過程中的作用。 方法 取RCS RP大鼠（RCS大鼠）及正常對照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日齡視網(wǎng)膜，光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)，測量外核層厚度；利用免疫組織化學(xué)染色法觀察視網(wǎng)膜中Cdk5、p25和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleave-caspase 3）的表達(dá)和變化；采用Western blot法測定視網(wǎng)膜中cleave-caspase 3的蛋白質(zhì)水平；原位末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測視網(wǎng)膜中凋亡發(fā)生的情況，并對凋亡細(xì)胞平均吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果 隨著出生日齡的增加，RCS大鼠視網(wǎng)膜厚度較RCS-rdy+大鼠變薄，主要表現(xiàn)為視桿與視錐層和外核層明顯變薄。在RCS大鼠17、25、35日齡組，Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，60日齡組表達(dá)下降；對照組RCS-rdy+大鼠各日齡組表達(dá)無明顯變化。Western blot法檢測結(jié)果顯示，隨著出生日齡的增加，RCS大鼠各日齡組視網(wǎng)膜cleave-caspase 3的表達(dá)明顯增加，以35日齡組增加最為明顯，而RCS-rdy+大鼠各日齡組視網(wǎng)膜cleave-caspase 3的表達(dá)沒有明顯的變化。TUNEL法檢測結(jié)果顯示，凋亡細(xì)胞主要出現(xiàn)在外核層中，在RCS大鼠17、25、35日齡組，各組凋亡細(xì)胞呈逐漸增多的趨勢，60日齡組凋亡細(xì)胞顯著下降；RCS-rdy+各日齡組凋亡細(xì)胞沒有明顯變化。多變量偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，Cdk5表達(dá)與p25表達(dá)、Cdk5表達(dá)與cleave-caspase 3表達(dá)、Cdk5表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、p25表達(dá)與cleave-caspase 3表達(dá)、p25表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、cleave-caspase 3表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)的偏相關(guān)系數(shù)分別為0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852，P值為0.000，兩兩變量之間均顯著相關(guān)。 結(jié)論 17、25、35日齡RCS大鼠，隨著出生日齡的增加，其視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞逐漸增多，而Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。RCS大鼠視網(wǎng)膜中凋亡細(xì)胞變化趨勢與Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達(dá)基本一致。提示RCS大鼠視網(wǎng)膜中光感受器細(xì)胞的凋亡與Cdk5、p25的表達(dá)水平升高有關(guān)，Cdk5可能參與RCS大鼠RP的發(fā)生與發(fā)展。
目的 觀察原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性（RP）患眼短波長自身熒光（SW-AF）和近紅外自身熒光（NIR-AF）特征以及與視野改變的相關(guān)性。方法 臨床檢查確診的原發(fā)性RP患者12例24只眼納入研究。其中，男性9例18只眼，女性3例6只眼。年齡15～69歲，平均年齡（35.33plusmn;15.03）歲。均行眼底彩色照相、SW-AF、NIR-AF、電腦視野、光相干斷層掃描（OCT）檢查。結(jié)果 SW-AF、NIR-AF檢查結(jié)果均顯示，眼底后極部均有大小不等的強(qiáng)熒光環(huán)。SW-AF強(qiáng)熒光環(huán)內(nèi)部弱熒光區(qū)域面積與NIR-AF強(qiáng)熒光區(qū)域面積正相關(guān)（r=0.662，P＜0.05）。OCT檢查證實強(qiáng)熒光環(huán)外的區(qū)域光感受器內(nèi)外節(jié)連接（IS/OS）層和外界膜斷裂、外核層變薄及色素上皮變薄萎縮。周邊部視網(wǎng)膜骨細(xì)胞樣色素沉著在SW-AF和NIR-AF中均為無熒光，眼底斑塊樣改變區(qū)域在SW-AF中同一位置表現(xiàn)為斑駁樣弱熒光。SW-AF強(qiáng)熒光環(huán)與視野具有正相關(guān)（r=0.492，P＜0.05）。結(jié)論 RP患者視野與SW-AF強(qiáng)熒光環(huán)內(nèi)區(qū)域大小相關(guān)，且SW-AF強(qiáng)熒光環(huán)內(nèi)區(qū)域與NIR-AF強(qiáng)熒光區(qū)域視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)正常。
目的 探討在體電穿孔輔助基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞層和光感受器（PR）細(xì)胞層的可行性。方法 147只健康雄性Spragne-Dawley(SD)大鼠根據(jù)電穿孔刺激模式電壓值分為5、10、15、20、25、30、35 V組，右眼視網(wǎng)膜下腔注射增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFPN1為實驗眼，左眼注射TE Buffer 為對照眼。各組根據(jù)不同轉(zhuǎn)染方向再分為RPE和PR兩個亞組。各組除電壓不同外，其余參數(shù)均為脈寬99 ms，脈沖間期0.5 s，連續(xù)5個脈沖。將帶有負(fù)電荷的質(zhì)粒在電場作用下，擬轉(zhuǎn)染到RPE細(xì)胞層，反向置電極，擬轉(zhuǎn)染到PR細(xì)胞層。轉(zhuǎn)染后7 d 取各組視網(wǎng)膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察EGFP表達(dá)強(qiáng)弱、范圍及熒光細(xì)胞計數(shù)分析；采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）、實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量觀察EGFP蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果 轉(zhuǎn)染后7 d，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，各組RPE亞組對照眼RPE細(xì)胞層內(nèi)均未見特異性熒光表達(dá)，實驗眼可見綠色熒光表達(dá)；各組RPE亞組對照眼視網(wǎng)膜鋪片均未見熒光表達(dá)，實驗眼視網(wǎng)膜鋪片均可見轉(zhuǎn)染了EGFP的RPE細(xì)胞。Western blot檢測顯示，隨電壓增加，EGFP蛋白與beta;-肌動蛋白條帶灰度相對比值呈上升趨勢。RT-PCR檢測顯示，各組均產(chǎn)生陽性擴(kuò)增條帶，隨電壓增高，EGFP mRNA與GADPH mRNA擴(kuò)增條帶灰度相對比值逐漸增高。結(jié)論 在體電穿孔方法可以有效輔助基因轉(zhuǎn)染大鼠RPE細(xì)胞層。
目的 觀察視網(wǎng)膜色素變性(RP)患者視錐細(xì)胞和視桿細(xì)胞的多焦視網(wǎng)膜電圖(mfERG)特征，評估感光細(xì)胞功能。方法 選取正常受試者8例8只眼進(jìn)行視桿細(xì)胞mfERG檢查，分析不同刺激光亮度對P1波振幅的影響；對19例RP患者38只眼分別進(jìn)行視桿和視錐細(xì)胞mfERG檢查，根據(jù)局部波形信噪比判斷檢出率，對視錐細(xì)胞mfERG不同類型間的平均視力、P1波振幅密度進(jìn)行比較和統(tǒng)計學(xué)分析。同時對比分析RP患者視桿和視錐細(xì)胞mfERG在各象限P1波振幅的變化。結(jié)果 采用0.04 cd/m2藍(lán)色低刺激光亮度可以穩(wěn)定記錄正常人視桿細(xì)胞mfERG反應(yīng)。RP患者視錐和視桿細(xì)胞mfERG有效波形檢出率分別為65.79%和10.51%。視錐mfERGⅠ型P1波振幅密度高于Ⅱ型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.21,P=0.000)，平均視力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.15, P=0.612)，I型振幅密度與logMAR視力呈負(fù)相關(guān)（r=-0.48，P=0.04）。分別比較RP患者視錐和視桿mfERG局部波形特征發(fā)現(xiàn)，兩者在各象限的P1振幅密度在空間上有一定的對應(yīng)性。結(jié)論 RP患者黃斑區(qū)視錐細(xì)胞的反應(yīng)存在多樣性，視錐細(xì)胞mfERG檢出率高于視桿細(xì)胞，殘存視錐和視桿細(xì)胞功能在空間上有一定的對應(yīng)性。
目的 觀察米諾環(huán)素對視網(wǎng)膜色素變性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP過程的影響。方法 40只新生rd小鼠隨機(jī)分為10組，5組為實驗組，5組為對照組，每組4只小鼠。實驗組，出生后每日腹腔注射米諾環(huán)素22.5 mg/kg；對照組，出生后每日腹腔注射生理鹽水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各處死一組實驗組和對照組小鼠，取眼球做組織學(xué)觀察并行凋亡細(xì)胞檢測，并對兩組視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞數(shù)、外核層厚度以及凋亡細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器細(xì)胞開始凋亡，14 d達(dá)高峰，28 d光感受器細(xì)胞完全消失；（2）出生后7 d實驗組光感受器細(xì)胞數(shù)目和外核層厚度與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；（3）出生后14、21 d實驗組光感受器細(xì)胞數(shù)目和外核層厚度多于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d實驗組外核層凋亡細(xì)胞數(shù)目少于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。結(jié)論 米諾環(huán)素在rd小鼠RP早期可以延緩光感受器細(xì)胞丟失，但不能完全阻止RP的發(fā)生。
目的:觀察川芎嗪對視網(wǎng)膜色素變性rds小鼠的干預(yù)作用和機(jī)制。 方法:rds新生小鼠 84只，隨機(jī)分為實驗組和對照組，每組42只小鼠。實驗組小鼠從出生時開始，腹腔注射鹽酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；對照組同時注射等量生理鹽水。分別在用藥 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取實驗組和對照組小鼠眼球，立即經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)病理切片。另取眼球經(jīng)2.5%戊二醛溶液固定，電子顯微鏡觀察。用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口標(biāo) 記技術(shù)(TUNEL)方法檢測視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡，用免疫組織化學(xué)方法測定bcl-2在視網(wǎng)膜的表達(dá)。 結(jié)果:病理觀察結(jié)果顯示，經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器細(xì)胞核層數(shù)與未用藥的對照組相比較，明顯增加（P＜0.01）。電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，川芎嗪可減緩rds小鼠光感受器細(xì)胞和視網(wǎng)膜外段盤膜部位線粒體的病變，減少盤膜和外界膜的破壞。rds小鼠經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后3、7、14、21、28、35 d，光感受器細(xì)胞凋 亡率比對照組明顯減少（P＜0.01）；治療后3、7、14、21、28、35 d時，bcl -2在視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞及光感受器細(xì)胞內(nèi)外段的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05） 。 結(jié)論:鹽酸川芎嗪可延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的減少，其作用機(jī)制可能是通過上調(diào)視網(wǎng)膜 外核層及光感受器細(xì)胞內(nèi)外段bcl-2的表達(dá)延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡。