目的 富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）具有刺激椎間盤細胞增殖、促進細胞外基質(zhì)合成代謝及抑制纖維環(huán)細胞凋亡等作用。通過觀察自體PRP干預(yù)兔早期椎間盤退變，明確其治療效果，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法取健康成年新西蘭大白兔45只，體重2.5～3.0 kg，雌雄不限；隨機分為實驗組、對照組、假手術(shù)組（n=15）。取實驗組兔耳中央動脈血，采用Landesberg等方法制備PRP，同時對全血及PRP行血小板計數(shù)。實驗組及對照組采用纖維環(huán)針刺法建立L4、5及L5、6椎間盤退變模型，造模2周后于L4、5及L5、6椎間隙分別注入100 ?L自體PRP及100 ?L PBS液；假手術(shù)組僅分離暴露椎間盤，不作處理。觀察實驗動物造模后一般情況；造模2周及干預(yù)1、2周時各組取5只實驗動物行腰椎MRI、HE染色及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色觀察，腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性積分吸光度（IA）值檢測。 結(jié)果兔PRP中血小板計數(shù)約為外周血的4.92倍。實驗動物均存活至實驗完成。造模2周時，與假手術(shù)組相比，實驗組和對照組椎間盤信號降低，髓核細胞減少，基質(zhì)退變，Ⅱ型膠原表達降低。腰椎MRI退變程度分級及Ⅱ型膠原陽性IA值結(jié)果顯示，各時間點實驗組、對照組與假手術(shù)組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），干預(yù)1、2周時，實驗組MRI退變程度分級顯著低于對照組 （P lt; 0.05），但仍與假手術(shù)組有差異（P lt; 0.05）；干預(yù)1、2周時，實驗組髓核細胞及軟骨樣基質(zhì)較對照組增多，基質(zhì)纖維化程度輕，Ⅱ型膠原表達明顯強于對照組（P lt; 0.05）。 結(jié)論椎間盤內(nèi)注射自體PRP可終止甚至一定程度逆轉(zhuǎn)兔早期椎間盤退變，可能與PRP含有多種生長因子調(diào)控細胞功能、改善組織微環(huán)境、促進組織再生修復(fù)有關(guān)。
目的?探討生長分化因子7（growth differentiation factor 7，GDF-7）在體外能否促進BMSCs向肌腱細胞分化，為改善BMSCs修復(fù)肌腱療效提供依據(jù)。?方法?采用密度梯度離心法從綠熒光大鼠骨髓組織中分離培養(yǎng)BMSCs，通過成骨、成脂和成軟骨分化鑒定其多向分化能力。取第3代BMSCs根據(jù)成肌腱培養(yǎng)液中加入不同濃度GDF-7（0、12.5、25.0、50.0 ng/mL），分為A、B、C、D組。體外誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，實時熒光定量PCR檢測各組scleraxis、tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原mRNA表達，免疫細胞化學(xué)染色觀察tenomodulin、tenascin C和Ⅰ型膠原蛋白表達，Western blot法檢測A、C組tenomodulin蛋白的表達。?結(jié)果?經(jīng)鑒定，分離培養(yǎng)的BMSCs具有成骨、成脂和成軟骨分化的多向分化能力。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果示，B、C、D組的tenomodulin mRNA表達分別較A組增加了2.85、3.41、3.07倍（P lt; 0.05），scleraxis mRNA表達增加了2.13、1.50、2.56倍（P lt; 0.05），tenascin C mRNA表達增加了2.45、2.86、1.88倍（P lt; 0.05），但B、C、D組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。B、C組Ⅰ型膠原mRNA表達較A組分別增高了1.92和2.45倍（P lt; 0.05）；D組較A組有所增高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫細胞化學(xué)染色示，B、C、D組均有tenomodulin、tenascin C 和Ⅰ型膠原蛋白表達，而A組均未表達；除C組Ⅰ型膠原表達高于B、D組外，其他蛋白表達B、C、D組間無明顯差異。Western blot檢測示C組比A組有更高的tenomodulin蛋白表達。?結(jié)論?GDF-7在體外能促進大鼠BMSCs向肌腱細胞分化。
目的介紹保守治療、內(nèi)固定、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)和多學(xué)科綜合診療（multidisciplinary team，MDT）模式等治療老年股骨頸骨折的研究進展。方法廣泛查閱國內(nèi)、外近年相關(guān)文獻，對多種老年股骨頸骨折治療方法、新治療模式的特點和應(yīng)用進行總結(jié)分析。結(jié)果老年非移位型股骨頸骨折應(yīng)手術(shù)治療，保守治療繼發(fā)移位風(fēng)險高。移位型骨折則應(yīng)盡早進行手術(shù)，人工半髖、全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后患者的遠期功能結(jié)果沒有差別。人工半髖關(guān)節(jié)置換術(shù)中出血量少、手術(shù)時間短，適合基礎(chǔ)情況不佳的高齡患者；人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)適合基礎(chǔ)情況較好、對生活質(zhì)量要求較高的老年患者。MDT 可有效減少患者術(shù)前等待時間和住院時間、降低內(nèi)科并發(fā)癥發(fā)生率、改善患者營養(yǎng)狀況和降低患者死亡率。結(jié)論內(nèi)固定、人工關(guān)節(jié)置換術(shù)等術(shù)式和 MDT 新模式用于老年股骨頸骨折的治療均取得了顯著成果。
目的探討B(tài)MP-2體外誘導(dǎo)人跟腱來源肌腱干細胞（human Achilles tendon-derived stem cells，hATDSCs）成軟骨分化的作用。 方法無菌條件下取急性跟腱斷裂患者自愿捐贈的跟腱組織，膠原酶消化獲得有核細胞；以500個/cm2細胞密度接種，細胞貼壁呈克隆樣生長，混合培養(yǎng)獲得原代hATDSCs；體外傳代培養(yǎng)至第3代，流式細胞儀檢測hATDSCs免疫表型；油紅O染色、茜素紅染色及番紅O/快綠染色分別鑒定hATDSCs成脂、成骨及成軟骨分化能力。取第3代細胞體外三維培養(yǎng)成微球后分為兩組，實驗組用重組人BMP-2（recombinant human BMP-2，rhBMP-2）干預(yù)，對照組不進行干預(yù)。3周后行微球大體觀察；組織學(xué)切片行HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色觀察；實時熒光定量PCR檢測成軟骨特異性基因SOX9、Ⅱ型膠原和軟骨聚集蛋白多糖（Aggrecan）表達。 結(jié)果原代hATDSCs體外培養(yǎng)呈克隆樣集落生長；傳代后以紡錘形、成纖維樣細胞生長，形態(tài)均一。hATDSCs陽性表達MSCs特異性表面標志CD44、CD90、CD105，陰性表達CD34、 CD45和CD146。多向分化潛能鑒定示hATDSCs成脂誘導(dǎo)3周油紅O染色陽性，成骨誘導(dǎo)4周茜素紅染色陽性，成軟骨誘導(dǎo)3周番紅O/快綠染色陽性。rhBMP-2誘導(dǎo)hATDSCs 3周，實驗組微球形成，體積顯著大于對照組；HE染色、番紅O/快綠染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色均呈陽性，實時熒光定量PCR檢測示SOX9、Ⅱ型膠原和Aggrecan mRNA表達顯著高于對照組（P lt; 0.05）。 結(jié)論體外BMP-2可促進hATDSCs成軟骨分化和蛋白聚糖合成增加，為研究慢性腱病組織病理學(xué)變化提供細胞生物學(xué)依據(jù)。
體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs），探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭，雌雄不限，體重8 ～ 10 kg。取豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng)，待第3 代SMSCs 長滿培養(yǎng)皿后，吸去基礎(chǔ)培養(yǎng)液，分別加入特定培養(yǎng)液進行成軟骨、成骨、成脂誘導(dǎo)分化，作為實驗組；以基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對照組。成軟骨誘導(dǎo)21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學(xué)染色和實時熒光定量 PCR 檢測；成骨誘導(dǎo)10 d 后行ALP 染色檢測，21 d 后行茜素紅染色檢測；成脂誘導(dǎo)21 d 后行油紅O 染色檢測。 結(jié)果 SMSCs 培養(yǎng)24 h后細胞形態(tài)細長或呈多角形；48 h 后細胞數(shù)量增多；72 h 后可見大量紡錘形細胞，其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導(dǎo)21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性，細胞外有蛋白多糖（Aggrecan）形成；免疫組織化學(xué)染色示特異軟骨基質(zhì)Col Ⅱ表達；實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。成骨誘導(dǎo)10 d 后ALP 染色陽性，21d 后茜素紅染色陽性，有鈣結(jié)節(jié)形成。成脂誘導(dǎo)21 d 后油紅O 染色示細胞內(nèi)有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外，余染色均呈陰性。 結(jié)論 豬膝關(guān)節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs，其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能，有望成為組織工程種子細胞來源。
構(gòu)建含人IL-1 受體拮抗蛋白（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體（PLXRNIL-1Ra），體外轉(zhuǎn)染人骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞，研究其相關(guān)特性。 方法 利用細菌內(nèi)同源重組技術(shù)快速構(gòu)建PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒重組質(zhì)粒，經(jīng)測序及酶切鑒定正確后轉(zhuǎn)染PT67 細胞，包裝成為重組PLXRN-IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒，并使用小鼠腎成纖維細胞系NIH/3T3 對病毒進行滴度測定。實驗分為3 組：未轉(zhuǎn)染組（A 組）、PLXRN 空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（B 組）、PLXRN-IL-1Ra 轉(zhuǎn)染組（C 組），病毒感染人OA 軟骨細胞后，RT-PCR 檢測細胞內(nèi)IL-1Ra 基因的轉(zhuǎn)錄和表達；ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清液中人IL-1Ra 蛋白表達。 結(jié)果 酶切鑒定及基因測序證實重組逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒中含有人IL-1Ra cDNA，測定包裝的病毒滴度為3 × 104 CFU/mL。原代軟骨細胞體外培養(yǎng)呈多角形或梭形，甲苯胺藍染色見細胞內(nèi)有紫色異染顆粒。RT-PCR 結(jié)果顯示在C 組出現(xiàn)311 bp 人IL-1Ra mRNA 片段，A、B 組未見人IL-1Ra mRNA 的表達帶，GAPDH 在各組均有表達。ELISA 檢測發(fā)現(xiàn)C 組細胞上清有一定量的人IL-1Ra 表達，蛋白濃度為（60.47 ± 15.13）ng/L，A 組和B 組均無人IL-1Ra 表達。 結(jié)論 構(gòu)建的IL-1Ra 逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體成功地感染人OA 軟骨細胞，并在體外獲得穩(wěn)定表達，為將表達人IL-1Ra 基因的人OA 軟骨細胞用于OA 基因治療提供了實驗依據(jù)。
目的探討深低溫冷凍處理對大鼠髕腱組織中肌腱干細胞（tendon-derived stem cells，TDSCs）的成活、細胞活力、早期凋亡、遷移能力及肌腱相關(guān)基因表達的影響。方法取 12 只 4 月齡雄性 SD 大鼠雙側(cè)髕腱組織，其中 6 只大鼠 12 條髕腱組織（實驗組）進行深低溫冷凍處理；剩余髕腱組織（對照組）不作處理，作為正常對照。取兩組髕腱組織用 0.3% Ⅰ 型膠原酶消化獲得有核細胞，分別用錐蟲藍染色檢測有核細胞成活率、結(jié)晶紫染色檢測有核細胞克隆形成能力；取兩組髕腱組織分離培養(yǎng) TDSCs，并傳至第 3 代，采用 Alamar Blue 法檢測細胞體外增殖能力；Annexin V-FITC/PI 雙染法檢測細胞早期凋亡率；Transwell 法檢測細胞遷移能力；實時熒光定量 PCR 檢測細胞肌腱相關(guān)基因 Ⅰ 型膠原（collagen type Ⅰ，Col1α1）、scleraxis（Scx）和 tenomodulin（Tnmd） mRNA 表達。結(jié)果與對照組（91.00%±3.63%）比較，實驗組原代有核細胞成活率為 61.65%±4.76%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.010，P=0.000）。兩組有核細胞接種后，均呈克隆樣生長；培養(yǎng) 12 d，實驗組每 1 000 個有核細胞克隆集落形成數(shù)為（8.41±0.33）個，較對照組（15.19±0.47）個顯著減少（t=28.910，P=0.000）。實驗組 TDSCs 占活性有核細胞比例為 1.37%±0.09%，較對照組 1.67%±0.10% 顯著減少（t=5.508，P=0.003）。第 3 代 TDSCs 培養(yǎng) 14 d 內(nèi)兩組細胞生長趨勢一致；兩組各時間點吸光度（A）值比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。實驗組及對照組 TDSCs 早期凋亡率分別為 1.67%±0.06%、1.63%±0.06%，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.707，P=0.519）。鏡下見，兩組均有 TDSCs 黏附于 Transwell 小室下室，實驗組細胞數(shù)為（445.00±9.70）個，對照組為（451.50±12.66）個，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.998，P=0.342）。實驗組 Col1α1、Scx、Tnmd 的 mRNA 相對表達量分別為 3.498±0.065、0.062±0.002、（4.211±0.211）×10–5，對照組分別為 3.499±0.113、0.062±0.001、（4.341±0.274）×10–5，比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.013，P=0.991；t=0.042，P=0.969；t=0.653，P=0.549）。結(jié)論大鼠肌腱組織經(jīng)深低溫冷凍后其有核細胞成活率降低，但肌腱組織仍保留大量有活性 TDSCs，且細胞增殖能力、早期凋亡率、體外遷移能力及成肌腱分化能力未見明顯異常。
目的分析老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術(shù)后死亡率及其危險因素。方法以 2011 年 1 月—2015 年 12 月因股骨頸骨折行人工股骨頭置換術(shù)患者為研究對象，將符合選擇標準的 109 例患者納入研究，收集臨床資料，包括年齡、性別、合并基礎(chǔ)疾病數(shù)量、入院至手術(shù)時間以及術(shù)前血紅蛋白、營養(yǎng)狀況。采用單因素分析和 Cox 比例風(fēng)險回歸模型篩查術(shù)后死亡危險因素。結(jié)果術(shù)后 1 年和 2 年死亡率分別為 6.4%（7/109）和 17.4%（19/109）。單因素分析顯示年齡、術(shù)前血紅蛋白水平和營養(yǎng)狀況是患者術(shù)后死亡的影響因素（P<0.05）。多因素分析顯示，年齡≥80 歲和營養(yǎng)不良是患者術(shù)后死亡的獨立危險因素（P<0.05）。結(jié)論老年股骨頸骨折患者人工股骨頭置換術(shù)后死亡率高，對于此類患者，尤其是高齡和營養(yǎng)不良者，應(yīng)多學(xué)科綜合評估圍術(shù)期風(fēng)險，加強圍手術(shù)期管理和優(yōu)化，以改善臨床預(yù)后。
目的 比較鎖定鋼板及髓內(nèi)釘治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折的療效。方法 回顧分析2015年1月—2018年12月符合選擇標準的86例肱骨近端Neer二、三部分骨折老年患者臨床資料。其中，46例行鎖定鋼板固定（鎖定鋼板組），40例行髓內(nèi)釘固定（髓內(nèi)釘）。兩組患者性別、年齡、致傷原因、骨折側(cè)別及分型、受傷至手術(shù)時間以及合并損傷等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。比較兩組疼痛視覺模擬評分（VAS）、美國肩肘外科（ASES）評分、Constant-Murley評分，以及肩關(guān)節(jié)活動度（前屈、外展、外旋）；X線片復(fù)查骨折愈合情況，于術(shù)后第2天及末次隨訪圖像測量頸干角并計算差值。結(jié)果 兩組患者均獲隨訪，隨訪時間18～40個月，平均30.4個月；兩組隨訪時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=?0.986，P=0.327）。X線片復(fù)查示兩組骨折均愈合，鎖定鋼板組骨折愈合時間為（11.3±2.1）周，髓內(nèi)釘組為（10.3±2.0）周，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.250，P=0.027）。鎖定鋼板組頸干角差值為（7.63±7.01）°，髓內(nèi)釘組為（2.85±2.82）°，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.032，P<0.001）。末次隨訪時，兩組Constant-Murley評分、ASES評分、VAS評分及肩關(guān)節(jié)活動度比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。鎖定鋼板組13例（28.3%）、髓內(nèi)釘組4例（10.0%）發(fā)生并發(fā)癥，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.498，P=0.034）。結(jié)論 鎖定鋼板及髓內(nèi)釘均可用于治療老年肱骨近端Neer二、三部分骨折，其中髓內(nèi)釘固定手術(shù)更加微創(chuàng)，術(shù)后并發(fā)癥更少，骨折愈合更快。
目的綜述機器學(xué)習(xí)在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域的應(yīng)用進展并展望其在臨床中的應(yīng)用前景。方法廣泛查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻，闡述機器學(xué)習(xí)算法研究現(xiàn)狀，總結(jié)其在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域的研究進展。結(jié)果隨著計算機數(shù)據(jù)處理能力的飛速發(fā)展、醫(yī)工交叉的逐步深入，人工智能在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用漸廣。目前，機器學(xué)習(xí)在創(chuàng)傷骨科領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，在骨折影像識別與診斷分層、創(chuàng)傷骨科臨床決策及評估、圍術(shù)期與預(yù)后風(fēng)險預(yù)測等方面，有著較強的性能和準確性。然而，機器學(xué)習(xí)的發(fā)展及臨床應(yīng)用仍存在著數(shù)據(jù)庫樣本不足、模型解釋性差以及普適性和個體化差異的問題。結(jié)論 隨著臨床樣本量的增加以及算法性能的提升，機器學(xué)習(xí)在創(chuàng)傷骨科輔助診斷、指導(dǎo)決策、制定個性化醫(yī)療方案以及合理配置臨床資源方面具有廣闊應(yīng)用前景。