摘要: 目的 在大鼠心肌梗死部位植入微囊化重組中華倉鼠卵巢(chinese hamster ovary, CHO ) 細胞, 觀察其分泌的血管內(nèi)皮細胞生長因子(V EGF) 是否可以促進心肌梗死部位的血管新生, 改善心功能。 方法 通過質粒轉染的方法構建可以分泌V EGF 的重組CHO 細胞系, 用微囊包裹, 觀察微囊內(nèi)細胞的生長及分泌情況。制備大鼠心肌梗死模型, 隨機將48 只8 周齡SD 雄性大鼠分成微囊化細胞移植組(MC2CHO 組)、單純細胞移植組(CHO 組)、空微囊移植組(MC 組) 和無血清培養(yǎng)基移植組(對照組) , 每組12 只。移植3 周后檢測心功能改善情況, 病理切片觀察微囊結構及囊內(nèi)細胞存活情況, 注射部位微血管計數(shù)比較促血管新生效果。 結果 體外檢測可見重組CHO 細胞在微囊生長迅速, 第8 d 時培養(yǎng)上清中V EGF 達3 852 pgouml;m l; 移植3 周后MC2CHO 組左心室大小和心功能明顯好于其它3 組, 差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0. 05) ; 局部微血管密度MC2CHO 組較CHO 組、MC 組和對照組明顯增加(22. 3±3. 1 vs. 15. 6±2.8, 11. 4±2. 5 和13. 2±2. 7 個ouml;每高倍視野, P lt; 0. 05) ; 組織學檢查可見微囊結構完整, 內(nèi)有存活且具有分泌功能的CHO 細胞?！〗Y論 微囊化重組CHO 細胞移植可促進大鼠心肌梗死后血管新生, 改善心功能。
目的 研究骨髓間質干細胞 (MSCs)移植梗死心肌后細胞因子的分泌及其對血管新生的作用。 方法 貴州香豬 2 4只 ,按照計算器隨機數(shù)法隨機分為對照組、實驗組。抽取骨髓液 3ml,按照 Wakitani的方法培養(yǎng)出骨髓間質干細胞 ,經(jīng) 5 -氮胞苷 (5 - aza)誘導后 ,5 -溴脫氧尿苷 (Brd U)標記備用。開胸結扎左冠狀動脈前降支 ,自體骨髓間質干細胞分別經(jīng)局部注射和結扎的左冠狀動脈前降支遠端灌注移植入自體急性心肌梗死區(qū)域 ,對照組以 DMEM作對照。術后 3周、6周取標本 ,免疫組織化學法、計算機圖象分析檢測組織血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子 (b FGF)和 因子表達?！〗Y果 實驗組梗死區(qū) 3周、6周 b FGF、VEGF灰度值明顯高于對照組 (Plt;0 .0 1) ,微血管計數(shù)明顯增多 (Plt;0 .0 1)?！〗Y論 自體骨髓間質干細胞移植梗死心肌后能分泌 VEGF、b FGF,誘導血管新生。
目的 通過局部心外膜下應用堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)緩釋微膠囊,探討其治療心肌梗死的最佳埋藏部位,為進一步臨床應用提供理論依據(jù). 方法 24只新西蘭大白兔隨機分為對照組(Ⅰ組),空白膠囊組(Ⅱ組),bFGF緩釋微膠囊組(Ⅲ組,每只膠囊含bFGF 1μg),每組8只.開胸結扎冠狀動脈前降支根部,Ⅱ組、Ⅲ組于左旋支,前降支交界區(qū)心外膜下埋藏空白微膠囊,bFGF緩釋微膠囊各5只.術后5周,免疫組織化學測定心肌梗死邊緣區(qū),膠囊埋藏區(qū)微血管數(shù). 結果 與Ⅰ組、Ⅱ組相比較,Ⅲ組心肌梗死邊緣區(qū)微血管數(shù)目明顯增多(Plt;0.01),膠囊埋藏區(qū)3組間微血管數(shù)差別無顯著性意義(Pgt;0.05). 結論 bFGF緩釋微膠囊組織相容性較好,在靠近缺血心肌的正常心肌心外膜下埋藏,可以達到理想的誘導缺血心肌血管新生的效果.
目的 探討食管癌血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF) 表達及其與腫瘤血管新生和病理學特點的關系。方法 對40例手術切除的原發(fā)性食管癌標本進行免疫組織化學染色，確定其VEGF的表達及微血管密度。結果 40例食管癌患者中27例VEGF蛋白表達陽性，陽性率為67.5%，微血管密度在食管癌VEGF表達陰性、弱陽性和強陽性者間比較差別具有顯著性意義(Plt;0.05)，有淋巴結轉移者VEGF表達陽性率較無淋巴結轉移者明顯增高（Plt;0.01）。結論 食管癌VEGF表達水平與腫瘤血管新生強度、淋巴結轉移有密切關系。
目的 體外震波（extracorporeal shock wave，ESW）可促進血管新生和組織修復，通過觀察低能量ESW治療糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面的效果，探討其促進糖尿病慢性創(chuàng)面愈合的機制。 方法6～8周齡雄性SD大鼠96只，體重（220 ± 20）g，隨機分為3組（糖尿病對照組、ESW治療組及正常對照組），每組32只。取糖尿病對照組、ESW治療組大鼠，腹腔注射鏈脲佐菌素（60 mg/kg）制備糖尿病大鼠模型后，于背部制備1個直徑1.8 cm的圓形皮膚全層創(chuàng)面，建立糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面模型。正常對照組大鼠同法制備創(chuàng)面。創(chuàng)面制備后1 d ESW治療組采用0.11 mJ/mm2、1.5 Hz的ESW對創(chuàng)面干預500脈沖；糖尿病對照組及正常對照組創(chuàng)面未行ESW治療。觀察創(chuàng)面愈合情況；于3、7、14 d取創(chuàng)面組織行HE及Masson染色，觀察創(chuàng)面組織學變化；行CD31和增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）免疫組織化學染色，觀察創(chuàng)面細胞增殖及血管化程度。 結果糖尿病對照組創(chuàng)面閉合率低于正常對照組，創(chuàng)面閉合時間延長（P lt; 0.05），治療后3、7、14 d，創(chuàng)面組織炎性細胞浸潤明顯，膠原纖維相對面積密度、創(chuàng)面微血管密度、PCNA陽性細胞相對密度均低于正常對照組（P lt; 0.05）。ESW治療組與糖尿病對照組相比，創(chuàng)面愈合時間縮短，創(chuàng)面閉合率提高（P lt; 0.05），各時間點炎性細胞計數(shù)減少，肉芽組織生長良好，創(chuàng)面內(nèi)膠原纖維相對面積密度、微血管密度和PCNA陽性細胞相對密度增加，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；ESW治療組與正常對照組相比，微血管密度和PCNA陽性細胞相對密度差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論低能量ESW治療可以抑制糖尿病大鼠慢性創(chuàng)面內(nèi)局部炎性反應，提高創(chuàng)面內(nèi)修復細胞增殖能力，增加微血管形成和膠原沉積，使肉芽組織形成增加，最終促進創(chuàng)面愈合。
目的 黃芪多糖有促進血管新生作用，通過探討黃芪多糖膠原促進周圍組織中血管新生與膠原代謝的關系及其對相關因子的調(diào)控作用，為該膠原作為促進血管新生與組織愈合的支架提供依據(jù)。 方法 以交聯(lián)劑將黃芪多糖與空白膠原進行1 ∶ 1（W/W）共價結合，形成黃芪多糖膠原。取10 周齡SD 大鼠20 只，雌雄各半，體重200 ～ 250 g。于脊柱兩側作縱形切口，皮下向兩側游離形成“口袋”，左側植入大小為5 mm × 5 mm × 5 mm的黃芪多糖膠原作為實驗組，右側植入相同大小空白膠原作為對照組。術后觀察大鼠一般情況，于3、7、14、21 d 分別處死5 只大鼠，取膠原周圍肉芽組織，組織學染色觀察并計數(shù)毛細血管，測量羥脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）含量，實時熒光定量RT-PCR 測定血管生成素1（angiopoetin 1，Ang1）、基質金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinases 9，MMP-9）及基質金屬蛋白酶抑制物 1（tissue inhibitors of metalloproteinases 1，TIMP-1）mRNA 的表達。 結果 大鼠均存活至實驗完成。術后兩組膠原周圍肉芽組織中毛細血管逐漸增多，14 d 時達峰值，實驗組均多于對照組（P lt; 0.05）。兩組Hyp 含量逐漸升高，各時間點實驗組均高于對照組（P lt; 0.05）。除21 d 外，實驗組術后3、7、14 d 的Ang1 及MMP-9 mRNA 表達均顯著高于對照組（P lt; 0.05）。術后對照組TIMP-1 mRNA 表達逐漸減弱，實驗組呈逐漸增強趨勢；除術后7 d 外，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結 論 黃芪多糖膠原具有促進血管新生與膠原合成作用，機制之一是通過調(diào)節(jié)組織中Ang1、MMP-9 及TIMP-1表達而實現(xiàn)。
目的 探討神經(jīng)干細胞（neural stem cells，NSCs）與血管內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)共移植治療缺血性腦卒中應用的可能。 方法 檢索并分析醫(yī)學和生物醫(yī)學數(shù)據(jù)庫中與腦卒中干細胞治療相關的NSCs與EPCs基礎研究文獻，并進行綜述。 結果 NSCs與EPCs能向腦卒中損害區(qū)域趨化，局部微環(huán)境誘導兩者啟動神經(jīng)新生與血管新生修復損傷，并且血管新生與神經(jīng)新生能相互促進。 結論 NSCs和EPCs共移植為有效的解決缺血性卒中后神經(jīng)元缺失與血管閉塞這兩個病理損害提供了一種新的途徑。
目的 研究腺病毒介導的反義血管內(nèi)皮細胞生長因子165(Adenovirus-mediated averse vascular endothelial growth factor165,Ad-aVEGF165) 基因轉染對惡性黑色素瘤體內(nèi)外生長的影響。方法 選用感染復數(shù)為100的腺病毒介導的綠色熒光蛋白（Adenovirusmediated green fluorescent protein, Ad-GFP）和Ad-aVEGF165轉染人血管內(nèi)皮細胞株304（endothelium cell of vessel304 ,ECV304）和人惡性黑色素細胞（A375）。ECV304細胞分為3組：A375母系組、 Ad-GFP組和Ad-aVEGF165組。A375細胞分為3組：1640組、Ad-GFP組和Ad-aVEGF165組。測定其生長曲線、細胞周期和VEGF基因的表達。于裸鼠皮下接種A375細胞，待成瘤后進行轉種和治療，根據(jù)瘤體內(nèi)注射物的不同隨機分為PBS組、Ad-GFP組和Ad-aVEGF165 組，每組5只；治療結束后行大體觀察、HE染色觀察和微血管密度（micro-vascular density，MVD）檢測。結果 A375 母系組和Ad-GFP組上清液均能刺激ECV304細胞的生長，Ad-aVEGF165 組上清液能抑制ECV304細胞的生長。A375細胞中3組細胞均呈增殖趨勢，各時間點的增殖速度比較無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。ECV304細胞Ad-aVEGF165組增殖指數(shù)降低（Plt;0.05），A375細胞3組細胞增殖指數(shù)比較無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。A375細胞1640組、Ad-GFP組和Ad-aVEGF165 組平均灰度值分別為234.41±13.80、222.73±3.67和180.84±6.34。轉種后2周Ad-aVEGF165組裸鼠體內(nèi)腫瘤體積比Ad-GFP組和PBS組明顯減小，并隨時間延長越來越明顯。HE染色Ad-aVEGF165組有凝固性壞死。PBS組、Ad-GFP組、Ad-aVEGF165組的MVD值分別為65±10、52±11和30±6個/視野。結論 在體外，Ad-VEGF165通過抑制A375細胞VEGF基因的表達，進而抑制ECV304細胞的生長。在體內(nèi)，Ad-aVEGF165阻斷腫瘤血管的生成，進而抑制人惡性黑色素瘤的生長。
目的 觀察成纖維細胞與人工真皮共同移植對移植床及真皮海綿內(nèi)微血管形成、膠原沉積的影響，促進人工真皮海綿內(nèi)類真皮組織形成，縮短“二期植皮”的間隔時間。方法 Wistar大鼠18只，背部兩側各制作2.5 cm×2.5 cm全層皮膚缺損創(chuàng)面，在移植人工真皮之前分為兩組，即成纖維細胞移植組(A組)：向創(chuàng)面噴灑混入密度為1.0×105／cm2 的同種真皮成纖維細胞的纖維蛋白膠0.5 ml；對照組(B組)：只噴灑纖維蛋白膠0.5 ml。于移植后5和10天分別切取移植的真皮及周圍組織，進行HE染色、Masson染色、VEGF免疫抗體染色和墨汁灌注染色，觀察移植床及真皮海綿內(nèi)微血管新生及膠原沉積狀態(tài)；于移植后5天行伊文藍組織灌注，分光光度計測定真皮海綿內(nèi)染料含量，定量檢測真皮海綿內(nèi)循環(huán)滲透情況。結果 移植后5天，新生血管主要集中在真皮下移植床，A組新生血管較B組明顯增多，A組(9.64±2.36)個／高倍視野，B組(3.88±1.62)個/高倍視野，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；VEGF陽性細胞亦明顯增多。移植后10天，移植床及真皮內(nèi)均有微血管形成，A組血管數(shù)量和管徑均較B組增加，膠原沉積量也明顯增加。A組(46.04±8.90)個／高倍視野，B組(30.08±7.76)個／高倍視野，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論 同種成纖維細胞移植可明顯加快人工真皮內(nèi)及移植床的血管新生和膠原沉積，加快真皮海綿內(nèi)類真皮組織的形成。
目的 探討生肌玉紅膠原在缺血組織中促進血管新生的作用效果及其作用機理。方法 Wistar大鼠48只按隨機配對方法隨機均分為空白組、對照組（膠原）及實驗組（生肌玉紅膠原）3組；在大鼠后肢缺血模型基礎上于大鼠右后肢缺血組織中植入不同的膠原制劑，分別于模型制作術后3，7、14及28d取埋植的膠原制劑標本及標本周圍約0.5cm 范圍的缺血肌肉組織。通過激光散斑成像系統(tǒng)觀察大鼠右后肢缺血模型制作術后各時點的血流灌注情況，采用光度計法測定膠原制劑（生肌玉紅膠原）內(nèi)的血紅蛋白含量，采用免疫組化染色方法檢測標本周圍肉芽組織中的微血管計數(shù)，采用實時熒光定量RT-PCR 方法檢測缺血肌肉組織中各時點低氧誘導因子（HIF）-1αmRNA以及血管內(nèi)皮生長因子（VEGF） mRNA的表達。結果 大鼠右后肢缺血模型制作成功即刻大鼠患肢呈現(xiàn)明顯的缺血狀態(tài)，其血流灌注值明顯低于術前（P ＜0.01）；在術后3d卻呈明顯的充血狀態(tài)，其血流灌注值明顯升高，且略高于術前水平，但差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）；在術后7～14d大鼠患肢的血流灌注值呈逐漸下降趨勢，至術后28d又開始回升， 該3個時點實驗組大鼠患肢的血流灌注值均高于空白組（P ＜0.05）， 對照組與空白組比較其差異均無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）；術后7及14d實驗組大鼠肢體的血流灌注值高于對照組（P ＜0.05）。各時點實驗組膠原標本內(nèi)血紅蛋白含量均高于對照組 （P ＜0.01）。實驗組微血管計數(shù)于術后7及14d高于對照組（P ＜0.05）； 實驗組術后各時點HIF-1α mRNA及VEGF mRNA的表達水平均高于對照組和空白組（P ＜0.05），而對照組與空白組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。結論 生肌玉紅膠原通過誘導HIF-1α mRNA及VEGF mRNA血管新生相關基因的表達而改善缺血組織的血流灌注，促進微血管新生，從而達到促進組織修復的功效。