【摘要】目的探討一氧化氮（NO）在大鼠梗阻性黃疸腎功能損害發(fā)生中的作用，以及褪黑素（melatonin,Mel)的保護(hù)作用。方法64只雄性SD大鼠隨機(jī)均分為4組： 正常對照組（CN組）、假手術(shù)組（SO組）、膽總管結(jié)扎組（BLD組）和褪黑素治療組（BDL+Mel組）。應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立梗阻性黃疸模型，分別于手術(shù)后第4天和第8天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測4組中血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平以及腎組織中NO水平和iNOS活性； 光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)改變。結(jié)果BDL組大鼠血漿NO、TB、DB、ALT、AST、BUN、Cr水平和腎組織NO水平及iNOS活性明顯升高（P＜0.01），褪黑素治療可使血漿NO、ALT、AST、BUN及Cr水平和腎組織中NO水平及iNOS活性顯著降低，與BDL組比較差異有顯著性意義（P＜0.01）。結(jié)論梗阻性黃疸時(shí)，腎組織iNOS活性增強(qiáng)，NO大量產(chǎn)生參與了腎功能損害的發(fā)生、發(fā)展； 褪黑素對大鼠梗阻性黃疸腎損害的保護(hù)作用至少部分是通過干擾NO通路實(shí)現(xiàn)的。
目的 研究褪黑素對大鼠腸缺血再灌注肺損傷的保護(hù)作用及其對N-myc 下游調(diào)節(jié)基因2( NDRG2) 表達(dá)的影響。方法 將健康雄性SD 大鼠40 只隨機(jī)分為褪黑素高劑量組( 10 mg/kg) 、褪黑素低劑量組( 1 mg/kg) 、缺血再灌注組和假手術(shù)組。褪黑素高、低劑量組造模前30 min給予腹腔注射褪黑素, 缺血再灌注組和假手術(shù)組造模前30 min 腹腔注射與褪黑素治療量等容量的生理鹽水。褪黑素高、低劑量組和缺血再灌注組大鼠經(jīng)夾閉腸系膜上動脈, 缺血60 min后松開動脈夾造成再灌注, 建立腸缺血再灌注肺損傷模型, 于再灌注45 min 后取右肺組織。假手術(shù)組全身麻醉后只切除右肺, 縫合切口。觀察肺組織病理學(xué)改變和濕/干重比值( W/D) , 免疫組化、Western-blot 方法觀察大鼠肺組織NDRG2 的表達(dá)。結(jié)果 與假手術(shù)組比較, 缺血再灌注組肺泡壁增寬, 肺泡腔內(nèi)可見出血等炎癥表現(xiàn), W/D 顯著升高, 肺組織NDRG2 蛋白表達(dá)明顯降低。與缺血再灌注組比較, 褪黑素高、低劑量組肺泡腔內(nèi)出血等炎癥表現(xiàn)減輕,W/D顯著降低, 肺組織NDRG2 蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)。褪黑素高、低劑量組間各指標(biāo)均無顯著差異。結(jié)論 褪黑素可能通過上調(diào)NDRG2 的表達(dá)而減輕腸缺血再灌注造成的肺損傷。
目的 褪黑素可提高軟骨生長因子的表達(dá)，刺激軟骨基質(zhì)的合成；通過觀察注射褪黑素后大鼠骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）關(guān)節(jié)軟骨中BMP-2 和IL-1β 的表達(dá)，探討褪黑素對損傷軟骨的防治作用。 方法 SPF 級4 周齡SD 雄性大鼠40 只，體重120 ～ 150 g，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。正常對照組（A 組）大鼠不作任何處理。OA 模型組（B組）、OA 模型/ 去松果體模型組（C 組）、OA 模型/ 去松果體模型/ 褪黑素治療組（D 組）于大鼠左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為4% 的木瓜蛋白酶溶液，每2 天1 次，共2 周，制備大鼠OA 模型。木瓜蛋白酶注射2 周后，將C、D 組大鼠置于持續(xù)24 h（光照度為500 lx）光照環(huán)境中，制備去松果體模型。D組于制備去松果體模型第2 天開始于左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2 mL濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液，每周4 次，共4 周。在最后1 次注射褪黑素1 周后，抽取A、B、C 組大鼠心尖處血液應(yīng)用ELISA 法檢測血清褪黑素水平；之后處死各組動物，取材行大體觀察、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)染色觀察。 結(jié)果 模型制備后大鼠均存活。A、B、C 組相同時(shí)間點(diǎn)血清中褪黑素水平比較以及同組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A 組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑平整，有彈性；軟骨細(xì)胞排列整齊。B、C 組關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙，局部區(qū)域軟骨面可見缺損及軟骨下骨外露現(xiàn)象；軟骨細(xì)胞排列及結(jié)構(gòu)較紊亂。D 組關(guān)節(jié)軟骨表面較B、C 組平整，軟骨缺損及外露現(xiàn)象減少；軟骨細(xì)胞排列及結(jié)構(gòu)較整齊。各組組織學(xué)及BMP-2、IL-1β 免疫組織化學(xué)染色觀察Mankin 評分及積分吸光度值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 持續(xù)光照能加速大鼠OA 關(guān)節(jié)軟骨的退變。采用0.2 mL 濃度為20 mg/mL 的褪黑素溶液于關(guān)節(jié)腔注射4 周后能夠延緩大鼠OA 的進(jìn)一步退變，其作用機(jī)制可能與上調(diào)軟骨生長因子BMP-2 及下調(diào)炎性因子IL-1β 表達(dá)有關(guān)。
目的 探討褪黑素（MLT）對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)HXO-RB44細(xì)胞增生活性的影響及相關(guān)機(jī)制。方法 利用四氮唑化合物（MTT）比色法，觀察不同濃度的MLT對RB HXO-RB44細(xì)胞增生活性的影響；利用10-10、10-9、10-8、10-7 mmol/L的MLT對RB HXO-RB44分別進(jìn)行干預(yù)，采用Hoechst熒光染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；利用流式細(xì)胞儀測定不同濃度的MLT干預(yù)24 h后，RB HXO-RB44細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的表達(dá)、細(xì)胞周期與凋亡情況。結(jié)果 濃度為10-7 mmol/L以下的MLT對HXO-RB44細(xì)胞并無抑制作用（P值均＞0.05）。10-6 mmol/L以上的MLT能夠顯著抑制HXO-RB44細(xì)胞增生（P＜0.01）。濃度為10-6、10-5、10-4 mmol/L的MLT干預(yù)后，隨藥物濃度的升高，HXO-RB44細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)逐漸升高。Hoechst染色顯示：不同濃度的褪黑素分別作用于培養(yǎng)的HXO-RB44細(xì)胞4、8、12、24 h后，細(xì)胞核固縮、核碎裂增多，細(xì)胞凋亡的程度隨著MLT濃度的增大而加重。流式細(xì)胞儀檢測：藥物干預(yù)后，G0/G1期細(xì)胞明顯增多，S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞相對增多，隨著MLT濃度的升高，HXO-RB44細(xì)胞凋亡率明顯升高。結(jié)論 濃度大于10-6 mmol/L的MLT能夠有效地抑制HXO-RB44細(xì)胞增生，其抑制效率隨藥物濃度的升高和作用時(shí)間的延長而增強(qiáng)；MLT的抗細(xì)胞增殖作用可能與其誘導(dǎo)HXO-RB44細(xì)胞內(nèi)的活性氧產(chǎn)生、阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。
目的 系統(tǒng)評價(jià)腫瘤患者進(jìn)行化療或放療時(shí)，采用褪黑素進(jìn)行輔助治療的有效性和安全性。方法 計(jì)算機(jī)檢索MEDLINE（1980～2010.1）、Cochrane圖書館（2009年第4期）、萬方數(shù)據(jù)庫（1980～2010.1）、VIP（1980～2010.1）、CNKI（1980～2010.1）、ELSEVIER ScienceDirect（SDOS）（1980～2010.1）、Nature（1980～2010.1）以及在研臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫（www.clinicaltrials.gov和www.controlled-trials.com），納入研究外源性褪黑素輔助治療腫瘤效果的隨機(jī)對照試驗(yàn)，由兩位研究者進(jìn)行資料提取和質(zhì)量評價(jià)后，采用Stata 10.1軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入8個(gè)RCT。Meta分析結(jié)果顯示：褪黑素能顯著提高腫瘤患者的疾病緩解率［RR=1.98，95% CI（1.52，2.58）］及1年生存率［RR=1.90，95%CI（1.28，2.83）］，同時(shí)能顯著減輕化療或放療對骨髓抑制的毒性作用［RR=0.12，95%CI（0.06，0.27）］；治療期間未見褪黑素相關(guān)不良反應(yīng)的報(bào)道。結(jié)論 當(dāng)前證據(jù)顯示，褪黑素作為腫瘤的輔助治療藥物，對提高患者疾病緩解率、減輕化療放療的毒性、延長患者的壽命具有一定作用。受納入研究質(zhì)量限制，上述結(jié)論尚需開展更多高質(zhì)量研究驗(yàn)證。
目的 探討氧化性損傷在大鼠梗阻性黃疸肝功能損害發(fā)生中的作用以及褪黑素對其的保護(hù)作用。方法 成年雄性SD大鼠64只，采用完全隨機(jī)化法隨機(jī)分為正常對照組（CN組，n=16）、假手術(shù)組（SO組，n=16）、膽總管結(jié)扎組（BDL組，n=16）和膽總管結(jié)扎＋褪黑素治療組（BDL＋MT組，n=16）。應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立梗阻性黃疸模型，褪黑素治療組大鼠手術(shù)前1d至手術(shù)后7d連續(xù)腹腔注射褪黑素0.5mg/（kg·d），每日10∶00給藥。分別于手術(shù)后第4d和第8d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本，檢測血漿中總膽紅素（TBIL）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）水平變化，比色法測定肝組織勻漿中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量或活力變化，采用TUNEL法檢測肝組織細(xì)胞凋亡，并計(jì)算肝細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）。結(jié)果 與CN組和SO組比較，BDL組大鼠血漿TBIL、ALT、AST、AKP、GGT水平和肝組織MDA含量明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），SOD、CAT、GSH-Px活力或GSH含量顯著降低（P＜0.01），AI增加（P＜0.01）； 褪黑素治療可使血漿TBIL、ALT、AST、AKP、GGT和肝組織MDA含量顯著降低，SOD、CAT、GSH-Px活力或GSH含量明顯升高（P＜0.01），AI減少（P＜0.01）。BDL組肝組織MDA含量與血漿TBIL、ALT、AKP、AST、GGT水平均呈顯著正相關(guān)（P＜0.01），GSH、SOD、CAT、GSH-Px與血漿TBIL、ALT、AKP、ALT、AST水平分別均呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；BDL組肝組織MDA含量的變化與AI呈正相關(guān)（P＜0.01），而GSH含量及SOD、CAT、GSH-Px活力分別與AI呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論 大鼠梗阻性黃疸時(shí)，肝組織自由基大量產(chǎn)生介導(dǎo)的氧化性損傷及其細(xì)胞凋亡，參與了肝功能損害的發(fā)生、發(fā)展。褪黑素對大鼠梗阻性黃疸肝功能損害有一定程度的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其拮抗肝組織過氧化和細(xì)胞凋亡有關(guān)。
目的 研究胰膽管合流異常（PBM）膽道損傷的抗氧化治療的效果。方法 選取13只健康雜種貓，建立PBM動物模型后隨機(jī)分為2組：7只不進(jìn)行抗氧化治療（非抗氧化治療組），6只行抗氧化治療（抗氧化治療組）；以動物建模術(shù)前情況作為對照。建模術(shù)后飼養(yǎng)6個(gè)月觀察膽囊組織的病理學(xué)改變，檢測過氧化產(chǎn)物丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）的變化情況、PCNA的表達(dá)情況以及膽汁淀粉酶水平。結(jié)果 13只動物建模后均存活6個(gè)月。非抗氧化治療組較正常對照組膽管增粗，膽囊壁增厚，膽囊內(nèi)膽汁稠厚；抗氧化治療組和非抗氧化治療組相比上述改變無明顯不同。光鏡下見正常對照組的膽囊黏膜呈指狀，黏膜數(shù)目少，無增生； 非抗氧化治療組的膽囊黏膜增生及炎性細(xì)胞浸潤，部分纖維組織增生。電鏡下見正常對照組的膽囊黏膜上皮細(xì)胞排列緊密、規(guī)則；非抗氧化治療組膽囊黏膜上皮細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張成囊狀，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞核變形；抗氧化治療組的上述改變較非抗氧化治療組好轉(zhuǎn)。膽汁淀粉酶正常對照組為（203.02±65.04）?U，非抗氧化治療組為（9 368.09±2 204.42）?U，抗氧化治療組為（8 746.25±2 077.95）?U，后2組高于正常對照組（P=0.003），但后２組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.642）。PCNA表達(dá)陽性細(xì)胞所占百分比正常對照組為（7.29±2.71）%，非抗氧化治療組為（54.71±10.90）%，抗氧化治療組為（48.17±13.06）%，3組間相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=48.11，P=0.001）， 其中非抗氧化治療組高于抗氧化治療組（P=0.001）。MDA正常對照組為（1.095±0.653）?nmol/mg prot，非抗氧化治療組為（2.745±1.533）nmol/mg prot，抗氧化治療組為（1.302±0.771）?nmol/mg prot， 3組間相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.17，P=0.017），其中非抗氧化治療組高于抗氧化治療組（P=0.017）。結(jié)論 抗氧化治療對PBM有效。
子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一，病因迄今尚不明確，可能的危險(xiǎn)因素有：肥胖、高血壓、糖尿病、外源性雌激素的增加、高雌激素導(dǎo)致的初潮提前和絕經(jīng)推后、卵巢腫瘤等。褪黑素作為一種主要由松果體分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，有調(diào)節(jié)睡眠/覺醒周期、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)及抗氧化等多種生理功能。由于其抗氧化、免疫刺激、誘導(dǎo)凋亡等特性，在許多腫瘤的抑制和治療上有一定效果。同時(shí)還具有調(diào)節(jié)血脂、血壓、血糖，調(diào)節(jié)卵巢功能，抑制子宮內(nèi)膜增生和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖，恢復(fù)子宮內(nèi)膜等作用。因此，褪黑素水平的降低會增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，且對其治療有一定作用?，F(xiàn)就褪黑素對子宮內(nèi)膜癌的影響作一綜述。
目的 應(yīng)用 meta 分析評價(jià)外源性褪黑素及其類似物預(yù)防危重癥患者譫妄的效果。方法 計(jì)算機(jī)檢索 Cochrane Library、PubMed、Web of Science、Embase、中國知網(wǎng)、維普、萬方、中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫中的外源性褪黑素及其類似物治療危重癥患者譫妄效果的隨機(jī)對照試驗(yàn)，試驗(yàn)組采用褪黑素或褪黑素類似物治療，對照組采用安慰劑治療。檢索時(shí)限為建庫至 2021 年 1 月 14 日。由 2 名研究者獨(dú)立評價(jià)文獻(xiàn)質(zhì)量，采用 RevMan 5.4 軟件進(jìn)行 meta 分析。結(jié)果 納入 11 篇隨機(jī)對照試驗(yàn)研究，納入研究對象 1177 例，其中試驗(yàn)組 588 例，對照組 589 例。Meta 分析結(jié)果顯示外源性褪黑素及其類似物能降低危重癥患者譫妄的發(fā)生率［比值比（odds ratio，OR）=0.45，95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）（0.22，0.91），P=0.03］，縮短機(jī)械通氣時(shí)間［標(biāo)準(zhǔn)化均數(shù)差（standard mean difference，SMD）=–0.49，95%CI（–0.94，–0.03），P=0.04］，對危重患者的病死率［OR=0.73，95%CI（0.46，1.17），P=0.19］和重癥監(jiān)護(hù)病房住院時(shí)間［SMD=–0.05，95%CI（–0.26，0.15），P=0.61］的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 當(dāng)前數(shù)據(jù)表明，外源性褪黑素及其類似物在降低危重癥患者譫妄的發(fā)生率、縮短機(jī)械通氣時(shí)間方面具有一定效果，對降低危重患者的病死率和重癥監(jiān)護(hù)病房住院時(shí)間無明顯影響。以上結(jié)論還需要更多高質(zhì)量研究加以證實(shí)。
目的探討褪黑素（melatonin，MT）對卵巢摘除（ovariectomy，OVX）大鼠骨量、血清炎癥因子水平和對脂多糖刺激下BMSCs培養(yǎng)液中炎癥因子水平和成骨能力的影響。方法將15只12周齡SD大鼠隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組大鼠僅接受雙側(cè)側(cè)腹部切開縫合，OVX組行雙側(cè)OVX，OVX+MT組在雙側(cè)OVX術(shù)后行100 mg/（kg·d）MT口服干預(yù)。8周后采用ELISA法檢測大鼠血液樣本中炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)水平；用Micro-CT檢測股骨遠(yuǎn)端，觀察骨量及骨微結(jié)構(gòu)變化并對骨體積分?jǐn)?shù)、骨小梁厚度和骨小梁數(shù)量進(jìn)行定量檢測。取3只3周齡SD大鼠，采用全骨髓培養(yǎng)法提取股骨骨髓中的BMSCs并傳代培養(yǎng)。經(jīng)鑒定后取第3～5代細(xì)胞，用不同濃度（0、1、10、100、1 000 μmol/L）MT干預(yù)并行細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測細(xì)胞活力，篩選最佳濃度MT用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞分為成骨誘導(dǎo)組（A組）及成骨誘導(dǎo)+1/5/10 μg/mL脂多糖組（B～D組），進(jìn)行相應(yīng)干預(yù)后用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)水平；根據(jù)CCK-8法和ELISA檢測結(jié)果，用刺激炎癥效果最顯著濃度的脂多糖以及最佳藥物濃度的MT加成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基對細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，并設(shè)為E組，同樣采用ELISA法檢測各炎癥因子表達(dá)水平；之后分別對A、D、E組行ALP染色和茜素紅染色，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）法檢測成骨相關(guān)基因Ⅰ型膠原α1鏈（collagen type Ⅰ alpha 1 chain，Col1a1）、RUNX家族轉(zhuǎn)錄因子2（RUNX family transcription factor 2，Runx2）表達(dá)水平。結(jié)果ELISA和Micro-CT檢測示，與假手術(shù)組比較，OVX組大鼠骨量減少，血清炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平升高（P<0.05）；經(jīng)MT治療后，OVX+MT組上述指標(biāo)均得到改善（P<0.05）。成功提取大鼠BMSCs，CCK-8法檢測示100 μmol/L是不影響細(xì)胞活性的最大MT濃度，將其用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。ELISA檢測示，加入脂多糖刺激后，B～D組細(xì)胞培養(yǎng)液中的炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α表達(dá)水平明顯升高，與A組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；并且呈濃度依賴性，D組各炎癥因子表達(dá)水平明顯高于B、C組（P<0.05）；E組加入MT干預(yù)后，各炎癥因子表達(dá)水平較D組顯著降低（P<0.05）。ALP染色、茜素紅染色及RT-qPCR檢測示，與A組比較，D組ALP和茜素紅陽性面積百分比以及Col1a1、Runx2 mRNA相對表達(dá)量均顯著降低，經(jīng)MT干預(yù)后E組上述指標(biāo)均顯著提升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論MT可能通過降低大鼠體內(nèi)炎癥對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的骨量產(chǎn)生影響；MT能降低脂多糖刺激引起的BMSCs炎癥，并減弱其對BMSCs成骨分化的抑制。