【摘要】 目的 分析重力因素對二維探測器陣列驗(yàn)證靜態(tài)調(diào)強(qiáng)計(jì)劃的影響，判斷機(jī)架角度歸為0°的測量方法是否安全可靠?！》椒ā≡?°機(jī)架角和實(shí)際治療機(jī)架角分別測量靜態(tài)調(diào)強(qiáng)計(jì)劃的劑量分布，以3 mm范圍內(nèi)偏差lt;3%(3% 3 mm)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行γ分析，獲得相對于參考劑量分布的通過率，分析通過率變化規(guī)律。分析兩種方法測量的等中心點(diǎn)絕對劑量的差異?！〗Y(jié)果 通過率的變化呈隨機(jī)分布，96.9%的照射野偏差lt;2.5%。所有計(jì)劃的85.7%絕對劑量偏差lt;2%，最大偏差為4.75%。 結(jié)論 使用二維探測器陣列在0°角進(jìn)行調(diào)強(qiáng)計(jì)劃的日常驗(yàn)證是安全可靠的。【Abstract】 Objective To analyze impacts of gravity on the verification of IMRT plans with 2-Dimensional detector arrays and to evaluate the reliability of the measurements in vertical direction (gantry angle=0). Methods The dose distributions for each beam in IMRT plans were measured with 0 degree gantry angle and actual gantry angle respectively. The γ percentage pass rate (according to 3% 3 mm) for each beam under each angle condition was obtained by the comparison between the measured dose distribution and the calculated dose map from the treatment planning system which was treated as the reference distribution. Then the absolute dose at the isocenter for each plan was measured at each angle condition and was analyzed. Results The variations of γ percentage pass rates between the two types of measurements were randomly distributed, and the deviations for 96.9% beams were less than±2.5%. The differences between absolute doses for 85.7% beams were less than±2% and the biggest deviation was -4.75%. Conclusion Verification of IMRT plans for the radiotherapy quality assurance using 2-Dimensional detector arrays in 0 degree gantry angle is safe and reliable.
目的 研究模擬微重力條件下構(gòu)建新生大鼠心肌細(xì)胞三維培養(yǎng)體系的方法。方法 分離新生大鼠原代心肌細(xì)胞，接種于聚乳酸（PLA）支架材料上，經(jīng)攪拌瓶培養(yǎng)24小時(shí)后轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，用倒置相差顯微鏡、掃描電鏡和透射電鏡觀察心肌細(xì)胞在支架上的生長情況，以四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測細(xì)胞活性。結(jié)果 心肌細(xì)胞在PLA支架材料上貼壁、伸展，融合成片，保持持續(xù)的代謝活性，發(fā)現(xiàn)PLA-心肌細(xì)胞復(fù)合構(gòu)造物的搏動(dòng)。結(jié)論 接種于PLA支架材料上的原代心肌細(xì)胞，在旋轉(zhuǎn)式細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)的模擬微重力條件下，可以進(jìn)行較理想的三維培養(yǎng)。
目的探討模擬微重力環(huán)境下，Indianhedgehog（IHH）基因過表達(dá)對兔BMSCs成軟骨分化的影響。 方法取第2代兔BMSCs，分為旋轉(zhuǎn)微重力細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)（rotary cell culture system，RCCS）組和傳統(tǒng)組2個(gè)大組，每個(gè)大組進(jìn)一步分為3個(gè)亞組，即IHH基因腺病毒載體轉(zhuǎn)染組（RCCS 1組和傳統(tǒng)1組）、綠色熒光蛋白腺病毒載體轉(zhuǎn)染組（RCCS 2組和傳統(tǒng)2組）及空白對照組（RCCS 3組和傳統(tǒng)3組）。RCCS組細(xì)胞均在模擬微重力環(huán)境下進(jìn)行成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化；常規(guī)組在6孔板中進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)及成軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)分化過程中，檢測IHH蛋白表達(dá)（ELISA法）及ALP活性；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測軟骨及軟骨肥大相關(guān)基因表達(dá)；Wertern blot法檢測Ⅱ型膠原、聚集蛋白聚糖（aggrecan，ANCN）蛋白表達(dá)；并取細(xì)胞爬片行甲苯胺藍(lán)染色及膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）-cy3免疫熒光染色觀察。 結(jié)果轉(zhuǎn)染后熒光顯微鏡下RCCS 1、2組可見明顯綠色熒光，轉(zhuǎn)染效率約95%。ELISA檢測示，RCCS及傳統(tǒng)1組IHH蛋白均明顯高于2、3組（P < 0.05）；傳統(tǒng)1組各時(shí)間點(diǎn)ALP活性均高于傳統(tǒng)2、3組（P < 0.05），RCCS 1組ALP活性僅于誘導(dǎo)分化3、7 d稍高于RCCS 2、3組（P < 0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測示，傳統(tǒng)1組在誘導(dǎo)分化早期高表達(dá)Ⅱ型膠原、ANCN，但在后期高表達(dá)Ⅹ型膠原、ALP及AnnexinⅤ（P < 0.05）；RCCS 1組在誘導(dǎo)分化各時(shí)期均高表達(dá)軟骨相關(guān)基因Ⅱ型膠原、ANCN、SOX9，且低表達(dá)軟骨肥大相關(guān)基因Ⅹ型膠原、ALP及AnnexinⅤ（P < 0.05）。Wertern blot法檢測示，誘導(dǎo)21 d時(shí)傳統(tǒng)1組Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)量明顯低于傳統(tǒng)2、3組（P < 0.05）；RCCS 1組各時(shí)間點(diǎn)Ⅱ型膠原、ANCN蛋白表達(dá)量均明顯高于RCCS 2、3組（P < 0.05）。甲苯胺藍(lán)染色示，誘導(dǎo)21 d時(shí)傳統(tǒng)1組染色淺于傳統(tǒng)2、3組，RCCS 1組各時(shí)間點(diǎn)染色均明顯深于RCCS 2、3組；Annexin V-cy3免疫熒光染色示，各時(shí)間點(diǎn)傳統(tǒng)1組紅色熒光均強(qiáng)于傳統(tǒng)2、3組，RCCS各亞組紅色熒光表達(dá)均較弱且組間無明顯差異。 結(jié)論在模擬微重力環(huán)境下，IHH基因轉(zhuǎn)染BMSCs可有效促進(jìn)軟骨生成，并抑制軟骨老化或向成骨發(fā)展，適合軟骨組織工程的需要。
目的 模擬微重力培養(yǎng)甲狀旁腺細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞分泌功能，以探討甲狀旁腺細(xì)胞更為優(yōu)良的培養(yǎng)方法。 方法 雄性 Wistar 大鼠，37 只，體質(zhì)量 150～200 g。1% 戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹腔注射麻醉。手術(shù)切取甲狀旁腺并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。用膠原酶 Ⅱ 消化獲得甲狀旁腺細(xì)胞后，按培養(yǎng)條件不同分為普通培養(yǎng)組（單純甲狀旁腺細(xì)胞靜置培養(yǎng)）、聚羥基乙酸（polyglycolic acid，PGA）支架培養(yǎng)組（甲狀旁腺細(xì)胞接種在 PGA 支架上靜置培養(yǎng)）、微重力培養(yǎng)組（甲狀旁腺細(xì)胞和 PGA 支架在模擬微重力環(huán)境中共培養(yǎng)）3 組。于細(xì)胞培養(yǎng)第 1、3、5、7 天時(shí)測量各組細(xì)胞培養(yǎng)液中甲狀旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）的濃度，于倒置相差顯微鏡下觀察甲狀旁腺細(xì)胞的生長形態(tài)、吖啶橙/碘化丙啶染色細(xì)胞并計(jì)算細(xì)胞存活率。 結(jié)果 普通培養(yǎng)組的細(xì)胞在第 7 天時(shí)大部分細(xì)胞形態(tài)良好，部分細(xì)胞團(tuán)中心出現(xiàn)壞死灶。PGA 支架培養(yǎng)組在第 7 天時(shí)支架上的細(xì)胞大部分沿 PGA 纖維縱軸方向向兩極伸展，相鄰支架被細(xì)胞外基質(zhì)連接。微重力培養(yǎng)組的細(xì)胞在培養(yǎng)第 7 天時(shí)細(xì)胞仍呈圓形，相互聚集成團(tuán)，并逐漸增大；培養(yǎng)液中的 PTH 濃度也明顯高于 PGA 支架培養(yǎng)組和普通培養(yǎng)組（P<0.05），且存活率也明顯高于另外兩組（P<0.05）。 結(jié)論 模擬微重力培養(yǎng)甲狀旁腺細(xì)胞，能使細(xì)胞保持良好形態(tài)，并顯著提高細(xì)胞活力及存活率，從而為細(xì)胞輸注移植治療甲狀旁腺功能減退癥提供優(yōu)良的供體細(xì)胞，PGA 支架可以作為甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)的良好載體。
本論文旨在通過大鼠尾部懸吊方式建立模擬微重力動(dòng)物模型，研究微重力環(huán)境對無創(chuàng)方法測量大鼠血氧飽和度結(jié)果的影響。分別在飼養(yǎng)第 14 天、21 天和 28 天使用脈搏血氧儀、血?dú)夥治鰞x測量實(shí)驗(yàn)組、對照組大鼠的脈搏血氧飽和度（SpO2）及動(dòng)脈血氧飽和度（SaO2）。配對 t 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，與對照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠的 SpO2 在第 14 天（P < 0.05）、21 天（ P < 0.05）和 28 天（ P < 0.05）均明顯低于 SaO 2 值。方差分析結(jié)果顯示，SpO2 值與造模時(shí)間有關(guān)，而 SaO2 值與造模時(shí)間無關(guān)。上述結(jié)果表明，現(xiàn)有常規(guī)脈搏血氧儀可能不適用于空間微重力環(huán)境下的血氧飽和度測量。
本文旨在研究微重力環(huán)境對 MC3T3-E1 細(xì)胞成骨分化的影響，并進(jìn)一步探討微重力環(huán)境下核因子 κB（NF-κB）信號通路對成骨細(xì)胞零重力的響應(yīng)機(jī)制。將 MC3T3-E1 細(xì)胞分別進(jìn)行正常培養(yǎng)（CON）和模擬微重力培養(yǎng)（SMG），培養(yǎng)期滿后觀察成骨性相關(guān)分子表達(dá)變化以及 NF-κB 信號通路變化情況。結(jié)果顯示，在微重力條件下，堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素（OCN）、一型膠原（CoL-Ⅰ）的基因和蛋白水平表達(dá)下調(diào)；與此同時(shí)，NF-κB 信號抑制子 α（IκB-α）下調(diào)，p65 表達(dá)顯著上調(diào)，且二者磷酸化水平升高，細(xì)胞培養(yǎng)液中 IL-6 含量增多。研究表明，微重力環(huán)境下 NF-κB 信號通路可激活并調(diào)控成骨細(xì)胞分化。
目的 制備負(fù)載威靈仙總皂苷（clematis total saponins，CTS）絲素蛋白微載體，探討其復(fù)合軟骨細(xì)胞后促進(jìn)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的效果。方法 取5%絲素蛋白溶液與10 mg/mL CTS溶液、甘油混勻后，利用高壓靜電場結(jié)合冷凍干燥方法制備負(fù)載CTS絲素蛋白微載體，掃描電鏡對樣本表征并檢測CTS累積釋放量；同時(shí)制備絲素蛋白微載體。取6只4周齡新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨，分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞并傳代。取第3代細(xì)胞分別與兩種微載體在微重力條件下共培養(yǎng)7 d，期間倒置相差顯微鏡及掃描電鏡觀察軟骨細(xì)胞在微載體上黏附情況，細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）檢測細(xì)胞增殖活性，并與正常培養(yǎng)細(xì)胞比較。取30只3月齡新西蘭大白兔制備雙側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型后隨機(jī)分為3組（n=20），A組膝關(guān)節(jié)軟骨缺損不作任何處理，B、C組分別采用絲素蛋白微載體-軟骨細(xì)胞復(fù)合物、負(fù)載CTS絲素蛋白微載體-軟骨細(xì)胞復(fù)合物填充關(guān)節(jié)軟骨缺損。術(shù)后12周取材，ELISA檢測關(guān)節(jié)液基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、MMP-13、MMP組織抑制因子1（tissue inhibitor of MMP 1，TIMP-1）水平；大體觀察及組織學(xué)觀察（HE、甲苯胺藍(lán)染色）評估軟骨缺損修復(fù)情況；Western blot檢測Ⅱ型膠原及蛋白聚糖表達(dá)；組織學(xué)及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）免疫組織化學(xué)染色觀察關(guān)節(jié)滑膜炎癥程度。結(jié)果 負(fù)載CTS絲素蛋白微載體呈類球形，直徑主要在300～500 μm 之間，表面呈多孔結(jié)構(gòu)，孔隙率達(dá)35.63%±3.51%；藥物緩釋檢測示微載體中CTS可長期緩慢釋放。微重力條件下隨培養(yǎng)時(shí)間延長，兩種微載體表面黏附的軟骨細(xì)胞逐漸增多，培養(yǎng)24 h時(shí)軟骨細(xì)胞增殖活性均較正常培養(yǎng)細(xì)胞提高（P<0.05），兩種微載體間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察，與A、B組相比，C組關(guān)節(jié)液中MMP-9、MMP-13含量均降低（P<0.05），TIMP-1含量上調(diào)（P<0.05）。與A組相比，B、C組軟骨缺損均有組織填充，且C組修復(fù)表面更完整，與周圍軟骨結(jié)合較好；組織學(xué)觀察及Western blot檢測顯示B、C組國際軟骨修復(fù)評分準(zhǔn)則（ICRS）評分以及Ⅱ型膠原、蛋白聚糖相對表達(dá)量均優(yōu)于A組，C組優(yōu)于B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。關(guān)節(jié)滑膜組織學(xué)觀察顯示，與A、B組相比，C組滑膜炎癥細(xì)胞浸潤及小血管增生減少，免疫組織化學(xué)染色示C組iNOS表達(dá)水平降低（P<0.05）。結(jié)論 負(fù)載CTS絲素蛋白微載體具有良好的CTS緩釋效果及生物相容性，在微重力條件下能促進(jìn)共培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞增殖，植入體內(nèi)后能促進(jìn)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)。