調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）在免疫耐受中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，可以通過控制對自身抗原的免疫反應(yīng)來預(yù)防自身免疫性疾病的發(fā)生，同時能夠抑制免疫系統(tǒng)對外來抗原的應(yīng)答，從而減少 T 細(xì)胞介導(dǎo)的病理性免疫應(yīng)答。近年來研究顯示器官特異性自身免疫的抑制作用依賴于 Treg 的抗原特異性。一種新興的 Treg 作用模式是表達(dá)特異性抗原的樹突狀細(xì)胞激活抗原特異性 Treg 并使其獲得抑制活性。因此，抗原特異性 Treg 的過繼治療比多克隆 Treg 更為有效，確定相關(guān)抗原，并從多克隆 Treg 中擴增出抗原特異性 Treg。該文對抗原特異性 Treg 的擴增技術(shù)、功能、抗原特異性以及 Treg 在臨床中的潛在治療進(jìn)行了綜述。
三維（3D）生物打印是近年來新興的一項生物組織工程學(xué)技術(shù)，其發(fā)展有利于解決目前臨床組織器官修復(fù)的問題。本文就 3D 生物打印和泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建的臨床與研究現(xiàn)狀進(jìn)行回顧，并展望 3D 生物打印應(yīng)用于泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建中的可行性與臨床價值。
【摘 要】 目的 通過改進(jìn)胰腺消化和分離的技術(shù)條件，提高成年大鼠胰島分離純化產(chǎn)率和質(zhì)量。 方法 用膠原酶Ⅺ液灌注消化成年SD 大鼠胰腺，對胰島分離純化方法加以改進(jìn)：以4 種比重的Euro-Ficoll（F1：D=1.132，F(xiàn)2：D=1.108，F(xiàn)4：D=1.069）和Hank’s 液（F5：D=1.023）不連續(xù)密度梯度離心，以離心半徑15 cm，2 000 r/min 于4℃緩慢升降離心20 min，收集位于F1 和F2 界面的胰島。雙硫腙特異染色法鑒定胰島純度；二醋酸酯熒光素/ 碘化丙啶染色法計算胰島成活率；放射免疫分析法檢測葡萄糖刺激的胰島素分泌量，計算刺激指數(shù)。將胰島當(dāng)量（islets equivalent quantity，IEQ）為1 000 的胰島移植于同品系糖尿病大鼠腎包膜下，9 d 內(nèi)隔日觀察動物血糖的變化，評價胰島功能。比較分離條件優(yōu)化前后收獲胰島的產(chǎn)率和質(zhì)量。 結(jié)果 改進(jìn)純化方法后每只大鼠胰島收獲量為（920±122）IEQ，胰島純度gt; 90%，胰島細(xì)胞成活率為 91%±2%。胰島細(xì)胞功能良好，在低糖和高糖刺激后培養(yǎng)液中胰島素濃度分別為（18.25±0.32）mU/L 和（36.70±3.57）mU/L，刺激指數(shù)為2.01±0.15。1 000 IEQ 胰島移植于糖尿病大鼠腎包膜下，觀察期內(nèi)可維持動物血糖水平正常。 結(jié)論 改進(jìn)后的膠原酶灌注消化和不連續(xù)梯度離心方法提高了胰島的產(chǎn)率，保證了胰島的高純度及高成活率。
目的 建立恒河猴外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞（regulatory T cells，Tregs）快速有效的分離純化方法。 方法4～5歲健康恒河猴10只，雌性4只，雄性6只，體重5～8 kg；于大隱靜脈抽取外周血，每只抽取8 mL。密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），分別采用非人靈長類Tregs分離試劑盒的生物素標(biāo)記的混合抗體和磁珠標(biāo)記的抗生物素抗體陰性分選，以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C（activated protein C，APC）和抗APC多選試劑盒中的磁珠標(biāo)記的抗APC抗體陽性分選出 CD4+ T淋巴細(xì)胞，比較兩種方法獲得細(xì)胞的得率、活性及純度；選擇得率、活性和純度較高的分選方法獲得的CD4+ T淋巴細(xì)胞，用磁珠標(biāo)記的抗人CD25抗體進(jìn)行陽性分選，獲得 CD4+CD25+ Tregs，流式細(xì)胞儀檢測純度、活性及FoxP3表達(dá)水平，以及Tregs對刀豆蛋白（concanavalin A，ConA）刺激的自體CD4+CD25-效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞（effective T cells，Teffs）增殖的抑制功能。 結(jié)果CD4+ T淋巴細(xì)胞陽性分選和陰性分選后，細(xì)胞活性均達(dá)95%左右，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05），但陽性分選后CD4+ T淋巴細(xì)胞得率和純度均顯著高于陰性分選（P lt; 0.05）。后續(xù)CD4+CD25+ Tregs分選采用陽性分選法獲得的CD4+ T淋巴細(xì)胞。經(jīng)雙陽性分選收集的目的細(xì)胞中CD4+CD25+ Tregs占76.2% ± 8.6%，活細(xì)胞比例為93.3% ± 4.7%，F(xiàn)oxP3陽性細(xì)胞比例為74.2% ± 6.9%?；旌吓囵B(yǎng)后Tregs均對ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。 結(jié)論免疫磁珠雙陽性分選法能有效分選出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+ Tregs。