目的 金屬磨損產(chǎn)物對人工關(guān)節(jié)的無菌性松動有影響，通過觀察Co2+、Cr3+ 對小鼠成骨細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期以及在離子刺激下對成骨細(xì)胞分泌ALP 的影響，為防治人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體周圍骨溶解提供實驗依據(jù)。 方 法 體外培養(yǎng)小鼠顱骨成骨細(xì)胞MC3T3-E1 至第3 ～ 5 代，調(diào)整細(xì)胞密度至5 × 105 個/mL，根據(jù)干預(yù)方法不同將細(xì)胞分為兩組。實驗組：成骨細(xì)胞于含10%FBS 的α-MEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待細(xì)胞完全貼壁后，加入CoCl2 與CrCl3 混合溶液；對照組：成骨細(xì)胞于含10%FBS 的α-MEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)。于培養(yǎng)12、24、48 h 后，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及周期分布，ELISA 法檢測培養(yǎng)上清液中ALP 含量。 結(jié)果 培養(yǎng)12、24、48 h，實驗組凋亡率分別為13.90% ± 0.52%、14.80% ± 0.41%、13.40% ± 0.26%，對照組分別為8.56% ± 0.31%、8.19% ± 0.24%、2.15% ± 0.11%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組細(xì)胞G2M期分布比例明顯較對照組降低，G0G1 期分布比例較對照組增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。培養(yǎng)12、24、48 h，實驗組ALP 含量檢測吸光度（A）值分別為0.955 ± 0.052、0.624 ± 0.041、0.498 ± 0.026，對照組分別為1.664 ± 0.041、1.986 ± 0.024、2.192 ± 0.041，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+ 對成骨細(xì)胞的細(xì)胞周期分布有明顯影響，抑制其增殖，使細(xì)胞大部分處于G0G1 期，同時增加其凋亡率，抑制成骨細(xì)胞釋放ALP。
目的 進(jìn)一步研究血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cells，VECs）和脂肪干細(xì)胞（adipose-derived stromal cells，ADSCs）聯(lián)合培養(yǎng)對ADSCs 成骨分化的影響，為聯(lián)合培養(yǎng)VECs 和ADSCs 作為骨組織工程種子細(xì)胞的可能性提供實驗依據(jù)。 方法 分別自足月妊娠SD 大鼠和18 周齡SD 大鼠制備臍血來源的VECs 和ADSCs，行形態(tài)學(xué)觀察及免疫熒光染色鑒定。取第3 代ADSCs 與誘導(dǎo)培養(yǎng)6 周的VECs 按細(xì)胞比例分別為3 ∶ 1、1 ∶ 1 和1 ∶ 3 設(shè)為實驗組A、B、C 組，ADSCs、VECs 單獨(dú)培養(yǎng)設(shè)為對照組D、E 組。培養(yǎng)第7、14 天取各組細(xì)胞行ALP 和飽和茜素紅鈣染色，進(jìn)行ALP 和骨鈣定性檢測；第4、7、14 天定量測定各組細(xì)胞ALP 和骨鈣素（osteocalcin，OC）含量。 結(jié)果 誘導(dǎo)培養(yǎng)6 周的臍血來源VECs 可見短梭形和多角形細(xì)胞混合生長，免疫熒光染色可見血管性血友病因子為陽性。ADSCs 培養(yǎng)可見貼壁單個核細(xì)胞形態(tài)單一，呈梭形生長，無重疊現(xiàn)象；免疫熒光染色可見CD90+。各組細(xì)胞培養(yǎng)第7 天，ALP 染色示A、D、E 組呈陰性反應(yīng)，B、C 組可見部分陽性細(xì)胞；第14 天時D、E 組仍呈陰性反應(yīng)，A、B、C 組可見片狀陽性細(xì)胞。培養(yǎng)第7 天，茜素紅染色示各組均未發(fā)現(xiàn)紅色陽性細(xì)胞；第14 天時A、B、C 組可見極少數(shù)陽性細(xì)胞，D、E 組未發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞。各組ALP 含量隨時間延長均逐漸增高，其中B 組各時間點含量均最高，與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），各時間點A、C 組與D、E 組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），A、C 組間及D、E 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。各組OC 含量隨時間延長逐漸增高，培養(yǎng)第7、14 天時B 組含量最高，各時間點B 組與其余各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），第4、14 天時C、D 組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），第14 天時A、C 組和E 組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），其余各時間點各組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 大鼠臍血來源的VECs 能在體外誘導(dǎo)ADSCs 向成骨細(xì)胞方向分化，1 ∶ 1 比例分化能力最強(qiáng)。
目的初步探討原發(fā)性肝癌行聯(lián)合肝臟離斷和門靜脈結(jié)扎二步肝切除術(shù)（ALPPS）的適應(yīng)證與禁忌證。 方法回顧性分析2014年8月至2015年3月期間四川大學(xué)華西醫(yī)院肝臟外科行ALPPS手術(shù)的15例患者的臨床資料，通過血液學(xué)檢測、剩余肝臟增長體積以及術(shù)后隨訪結(jié)果評價其療效。 結(jié)果14例患者完整接受ALPPS手術(shù)，1例患者因第一步手術(shù)后剩余肝臟體積增長不達(dá)標(biāo)而未行第二步手術(shù)；術(shù)后平均肝臟增長體積為205.5 cm3（-7.92～270.6 cm3），平均增長百分率為56.5%（-1.89%～134.74%）。1例圍手術(shù)期發(fā)生肝功能衰竭死亡，2例分別術(shù)后3個月及4個月因腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移死亡，1例術(shù)后6個月發(fā)現(xiàn)AFP升高而無影像學(xué)證據(jù)證明復(fù)發(fā)，1例已帶瘤生存4個月，其余10例患者存活未發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。 結(jié)論對原發(fā)性肝癌患者行ALPPS手術(shù)，其安全性與可行性值得肯定，并根據(jù)目前資料，初步制定行ALPPS手術(shù)的適應(yīng)證與禁忌證。
目的探討大鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞（synovium-derived mesenchymal stem cells, SMSCs）生物學(xué)特性及誘導(dǎo)成骨的可行性，評估SMSCs復(fù)合羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸（hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid, HA/CS/PLLA）支架材料在體內(nèi)異位成骨能力。 方法采用酶消化法和貼壁法分離培養(yǎng)SMSCs，并利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型，SMSCs成脂及成骨誘導(dǎo)后分別行油紅O染色、ALP染色和茜素紅染色鑒定。取第3代SMSCs，成骨誘導(dǎo)1、7、14、21、28 d后，采用實時熒光定量PCR檢測骨鈣素（osteocalcin, OCN）、Ⅰ型膠原、ALP以及Runx-2 mRNA表達(dá)情況；成骨誘導(dǎo)后1、3、5、7、9、11 d，采用ELISA法檢測ALP活性；成骨誘導(dǎo)后7、14、21、28 d，采用茜素紅S法檢測鈣鹽沉積；以正常培養(yǎng)SMSCs作為對照組。體內(nèi)實驗：取SD大鼠24只，隨機(jī)分為實驗組和對照組（n=12）；取第3代SMSCs接種于HA/CS/PLLA支架材料，體外復(fù)合培養(yǎng)72 h后植入實驗組大鼠右下肢肌袋，對照組大鼠植入單純HA/CS/PLLA支架材料；術(shù)后4、8周通過X線片及組織學(xué)觀察分析SMSCs體內(nèi)成骨情況。 結(jié)果提純后SMSCs CD147、CD90、CD105、CD44表達(dá)超過95%，而CD117、CD34、CD14、CD45表達(dá)低于10%；油紅O染色可見紅色脂滴形成，茜素紅染色可見紅色鈣化灶，ALP染色可見細(xì)胞質(zhì)呈咖啡樣深染。實時熒光定量PCR檢測示，SMSCs成骨誘導(dǎo)7 d，Ⅰ型膠原、ALP、Runx-2 mRNA表達(dá)顯著增加，誘導(dǎo)14 d OCN mRNA表達(dá)顯著增加。成骨誘導(dǎo)后5、7、9、11 d ALP活性明顯高于對照組，7 d時達(dá)峰值（P<0.05）。成骨誘導(dǎo)14 d，鈣含量顯著增加，且隨誘導(dǎo)時間延長鈣含量逐漸增加（P<0.05），且均高于對照組（P<0.05）。體內(nèi)實驗術(shù)后4、8周影像學(xué)和組織學(xué)觀測結(jié)果顯示，兩組均可見新生骨形成，但實驗組成骨量明顯多于對照組（P<0.05）。 結(jié)論SMSCs在體內(nèi)、體外均可誘導(dǎo)成骨，可成為骨組織工程的種子細(xì)胞。