目的 探討胃癌組織中第10號(hào)染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白（PTEN）、Fas/FasL和基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的表達(dá)及其與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系。方法 選擇臨床及病理資料齊全的胃癌蠟塊標(biāo)本75例，另取正常胃黏膜組織15例作對(duì)照，采用SP免疫組化方法檢測(cè)PTEN、Fas/FasL和MMP-2在其中的表達(dá)。采用χ2檢驗(yàn)和相關(guān)分析作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 PTEN、Fas/FasL及MMP-2的表達(dá)與胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及腫瘤的組織分化程度均有關(guān)（Plt;0.05）。PTEN和Fas/FasL的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.401，Plt;0.001），MMP-2與Fas/FasL的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=－0.720，Plt;0.001），MMP-2與PTEN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=－0.336，Plt;0.001）。結(jié)論 胃癌組織中PTEN、Fas/FasL及MMP-2的表達(dá)陽性率可以成為胃癌診斷和預(yù)后的判斷指標(biāo)。
目的 了解HBx基因在乙肝病毒相關(guān)性肝癌形成與發(fā)展中的分子機(jī)理。方法綜合國外近5年的文獻(xiàn)進(jìn)行分析。結(jié)果 HBx具有促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、抑制受損DNA的修復(fù)、反式激活、抑制wtp53功能和抑制細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能。HBx可能通過直接致癌作用、抑制DNA的修復(fù)、抑制wtp53、干擾Fas/CD95系統(tǒng)和抑制Caspase-3 活性等分子機(jī)理，誘發(fā)肝癌形成和促進(jìn)肝癌發(fā)展。結(jié)論 HBx及其編碼的蛋白HBxAg具有廣泛的生物學(xué)功能，從多方面、多途徑促進(jìn)肝癌的形成和發(fā)展。
目的 研究FasL基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞（DC）對(duì)屋塵螨致敏/激發(fā)小鼠氣道炎癥的影響。方法 將FasL基因轉(zhuǎn)染的DC和對(duì)照DC（未轉(zhuǎn)染DC）分別經(jīng)氣管注入屋塵螨致敏/激發(fā)小鼠體內(nèi)，病理切片觀察小鼠肺部炎癥，取支氣管肺泡灌洗液（BALF），行BALF細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)，ELISA檢測(cè)BALF的白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-5和g干擾素（IFN-g）水平。結(jié)果 FasL基因轉(zhuǎn)染的DC過繼處理屋塵螨致敏/激發(fā)小鼠，能顯著地減輕致敏/激發(fā)小鼠氣道變應(yīng)性炎癥，減少BALF中細(xì)胞總數(shù)和嗜酸粒細(xì)胞比例，降低BALF中IL-4和IL-5的水平，增高IFN-?水平。結(jié)論 FasL基因轉(zhuǎn)染的DC過繼處理屋塵螨致敏/激發(fā)小鼠能抑制Th2細(xì)胞活化，抑制變應(yīng)性氣道炎癥。
目的 探討重組的人胰島素樣生長因子1( rhIGF-1) 對(duì)COPD 大鼠膈肌凋亡的保護(hù)作用, 并觀察其對(duì)肺功能的影響。方法 45 只雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組和干預(yù)組, 每組 15 只。模型組和干預(yù)組大鼠置于煙霧濃度為5% 的密閉熏箱內(nèi)( 每天30 min, 共28 d) , 第1 d 和第 14 d向氣管內(nèi)注射脂多糖200 μg。干預(yù)組大鼠同時(shí)每日皮下注射rhIGF-1( 60 μg /100 g) 1 次, 持續(xù) 28 d。對(duì)照組不予特殊處理。第1、14、28 d 各組隨機(jī)取5 只大鼠處死, 測(cè)定各組離體膈肌的重量、細(xì)胞凋亡率、膈肌中Fas 基因及蛋白表達(dá)水平。第28 d 處死前測(cè)定各組大鼠的肺功能。結(jié)果 28 d 后模型組和干預(yù)組大鼠分鐘呼氣量( VE ) 、最大呼氣流速( PEF) 、深吸氣量( IC) 、第0. 3 s 用力呼氣容積 ( FEV0. 3 ) 及膈肌質(zhì)量均較對(duì)照組下降( P lt;0. 05) 。干預(yù)組膈肌質(zhì)量、IC 及VE 值高于模型組( P 均lt; 0. 05) , PEF 和FEV0. 3 與模型組比較無顯著差異( P gt; 0. 05) 。第14 和28 d, 干預(yù)組膈肌細(xì)胞凋亡率、 Fas 基因及蛋白表達(dá)均低于模型組( P 均lt;0. 05) , 仍高于對(duì)照組( P 均lt; 0. 05) 。結(jié)論 Fas / FasL 介導(dǎo)的凋亡途徑參與了膈肌凋亡的發(fā)生, rhIGF-1 可能通過干預(yù)Fas / FasL 途徑減少膈肌凋亡, 在一定程度上改善COPD 大鼠的VE 和IC 值。
目的 觀察Fas 相關(guān)死亡域樣白介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白( FLIP) 重組體腺病毒滴鼻吸入對(duì)大鼠肺組織FLIP表達(dá)的影響以及對(duì)急性肺損傷( ALI) 的防治效果。方法 48 只SD 大鼠隨機(jī)分為4 組, 每組12 只。FLIP治療組: 脂多糖( LPS) 腹腔注射法建立大鼠ALI 模型, 制模后給予Ad-FLIP腺病毒滴鼻吸入; FLIP 預(yù)防組: 先以Ad-FLIP 腺病毒感染大鼠然后復(fù)制ALI 模型。對(duì)照治療組和對(duì)照預(yù)防組則分別在制模之后和之前, 給予增強(qiáng)型綠色熒光蛋白( EGFP) 腺病毒載體作為對(duì)照。觀察各組大鼠的一般情況和肺大體標(biāo)本, 光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變, 測(cè)定肺組織濕干重比( W/D) 和肺通透性指數(shù)( LPI) 。采用RT-PCR、免疫組化法檢測(cè)并比較各組肺組織FLIP 的表達(dá)水平。結(jié)果 FLIP治療組和預(yù)防組與各對(duì)照組相比, 大鼠一般情況較好, 肺大體標(biāo)本和組織病理學(xué)改變減輕, 肺組織濕干重比、肺通透性指數(shù)降低, 肺組織FLIP 的mRNA 和蛋白表達(dá)水平均顯著增高( P lt; 0. 01) 。結(jié)論 滴鼻吸入FLIP 重組體腺病毒能夠上調(diào)大鼠肺組織的FLIP 表達(dá), 保護(hù)肺呼吸膜, 減輕肺水腫,對(duì)大鼠ALI 有一定防治作用。
目的 探討早期膿毒癥患者血漿中可溶性Fas 受體( sFas) 、可溶性Fas 配體( sFas-L)及基質(zhì)金屬蛋白酶7( MMP-7) 水平與患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附( ELISA) 法測(cè)定并比較32 例膿毒癥患者及24 例年齡性別匹配的健康對(duì)照組血漿中sFas、sFas-L、sFas/ sFas-L 比值和MMP-7 的水平差異。根據(jù)膿毒癥患者的28 d預(yù)后不同分為生存組和死亡組, 比較兩組之間各指標(biāo)的差異。結(jié)果 膿毒癥患者血漿sFas、sFas-L和MMP-7 水平均較正常對(duì)照組明顯升高, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P 均lt;0. 01) 。sFas 和sFas-L與患者疾病嚴(yán)重程度評(píng)分急性生理學(xué)和慢性健康狀況評(píng)分系統(tǒng)Ⅱ ( APACHEⅡ) 及序貫器官衰竭( SOFA) 呈正相關(guān)。MMP-7 與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA 評(píng)分之間存在較弱的負(fù)相關(guān), 但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P gt;0. 05) 。與存活患者相比, 死亡患者血漿中的sFas-L 水平明顯升高, 而sFas / sFas-L 比值則明顯降低( P lt;0. 05) 。結(jié)論 膿毒癥患者病情嚴(yán)重程度與血漿中sFas、sFas-L 及MMP-7 水平密切相關(guān), 這些指標(biāo)有望成為判斷膿毒癥預(yù)后的生物標(biāo)志物。
目的通過環(huán)扎法制備大鼠急性脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）模型，研究不同時(shí)間點(diǎn)減壓后細(xì)胞凋亡基因Fas的表達(dá)規(guī)律及與神經(jīng)功能恢復(fù)的關(guān)系。 方法13周齡雄性SD大鼠100只，體重255～376 g，隨機(jī)分為4組，每組25只。A組為對(duì)照組，僅行椎板切除；B、C、D組均采用環(huán)扎法建立急性SCI模型，B、C組分別于術(shù)后8、72 h行脊髓減壓，D組術(shù)后不行脊髓減壓。于術(shù)后1、3、7、14、21 d采用BBB評(píng)分及斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分評(píng)價(jià)神經(jīng)功能恢復(fù)情況；處死動(dòng)物取材行HE染色、免疫組織化學(xué)染色觀察Fas表達(dá)，TUNEL標(biāo)記觀察細(xì)胞凋亡水平。 結(jié)果A組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分和斜板實(shí)驗(yàn)評(píng)分均明顯優(yōu)于B、C、D組，3、7、14、21 d時(shí)B組優(yōu)于C、D組，C組優(yōu)于D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A組各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織結(jié)構(gòu)及形態(tài)清楚，未見出血、水腫和變性壞死的神經(jīng)元。術(shù)后1 d，B、C、D組脊髓組織明顯出血、水腫，可見神經(jīng)元死亡，D組較顯著；3、7 d，B組細(xì)胞變性較C、D組輕；14、21 d，B組損傷區(qū)可見較少膠質(zhì)細(xì)胞，有纖維母細(xì)胞增生和修復(fù)現(xiàn)象，C、D組脊髓內(nèi)有部分壞死、囊腔及空洞形成。A組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均少見Fas和TUNEL陽性細(xì)胞；B、C、D組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均見Fas和TUNEL陽性細(xì)胞，3 d達(dá)峰值，7 d 表達(dá)減弱，21 d仍有表達(dá)；其中D組陽性細(xì)胞數(shù)最多，B組少于C、D組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論SCI后早期減壓有利于大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)， Fas信號(hào)通道可能在誘導(dǎo)SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要作用。
目的 糖皮質(zhì)激素會(huì)破壞軟骨，通過觀察地塞米松對(duì)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞（human articularchondrocytes，HACs）凋亡及Fas/FasL 基因表達(dá)的影響，探討其促進(jìn)HACs 凋亡的作用機(jī)制。 方法 取行人工膝關(guān)節(jié)置換的膝骨關(guān)節(jié)炎患者自愿捐贈(zèng)軟骨組織，體外分離培養(yǎng)HACs，取第2 代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將HACs 分別置于含濃度為0.125、1.25、12.5、25 及50 μg/mL 地塞米松培養(yǎng)液中，培養(yǎng)48 h 后采用MTT 法選擇地塞米松最佳工作濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將HACs 分別采用最佳工作濃度地塞米松（實(shí)驗(yàn)組）及不含地塞米松培養(yǎng)液（對(duì)照組）培養(yǎng)，0、24、48 h 后行TMRE/Hoechst/Annexin V-FITC/7-AAD 四重染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡，48 h 后行實(shí)時(shí)定量PCR 檢測(cè)Fas/FasL mRNA 表達(dá)，0、24、48 h后行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)Fas/FasL 蛋白表達(dá)。 結(jié)果 25 μg/mL 濃度組細(xì)胞抑制率顯著高于50 μg/mL 濃度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；與其他濃度組比較，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；選擇25 μg/mL 濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作濃度。培養(yǎng)0、24、48 h，實(shí)驗(yàn)組HACs 凋亡細(xì)胞百分比分別為5.8% ± 0.3%、27.0% ± 2.6%、36.0% ± 3.1%，呈明顯時(shí)間依賴性（P lt; 0.05）。培養(yǎng)48 h 后實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組Fas mRNA 相對(duì)表達(dá)量分別為（8.93 ± 1.12）× 10—3 及（3.31 ± 0.37）× 10—3，F(xiàn)asLmRNA 相對(duì)表達(dá)量分別為（5.92 ± 0.66）× 10—3 及（2.31 ± 0.35）× 10—3，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。隨培養(yǎng)時(shí)間延長，實(shí)驗(yàn)組Fas 及FasL 蛋白表達(dá)逐漸增加，且各時(shí)間點(diǎn)均顯著高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 地塞米松可促進(jìn)HACs 細(xì)胞凋亡及上調(diào)凋亡基因Fas/FasL 表達(dá)，為進(jìn)一步探討Fas/FasL 信號(hào)通路在地塞米松促HACs 凋亡中的作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的 探討瘢痕疙瘩家系標(biāo)本中Fas基因 (外顯子7～9)有無突變以及Fas基因突變?cè)隈：鄹泶裥纬芍械囊饬x。方法 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來自南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院整形外科2005年收集的A、B兩個(gè)瘢痕疙瘩家系。采用PCR及基因測(cè)序技術(shù)，分別以A家系2例男性患者的瘢痕疙瘩組織為研究對(duì)象, 以其周圍正常皮膚及外周靜脈血作為自身對(duì)照，其配偶的外周靜脈血作為正常對(duì)照，并以B家系2例患者(母親與兒子)的外周靜脈血作為不同家系之間的對(duì)照，共檢測(cè)10份標(biāo)本中Fas基因外顯子7～9基因序列。結(jié)果 10份瘢痕疙瘩家系標(biāo)本Fas基因的7、8外顯子均未發(fā)生突變，2例瘢痕疙瘩組織標(biāo)本均在外顯子9編碼區(qū)的11 bp和53 bp兩個(gè)位點(diǎn)上存在單個(gè)堿基基因突變或多態(tài)性改變。結(jié)論 瘢痕疙瘩Fas基因死亡域外顯子9區(qū)段的基因結(jié)構(gòu)異常，極有可能與Fas蛋白的功能改變有關(guān)，從而導(dǎo)致局部瘢痕疙瘩形成。
目的 應(yīng)用成功制備的攜帶人Fas基因的兩種重組腺病毒，感染瘢痕疙瘩(keroid,K)成纖維細(xì)胞(fibroblasts, FB)，使其穩(wěn)定高效地表達(dá)以替換原有無功能的Fas蛋白，并恢復(fù)正常的重建后Fas信號(hào)傳導(dǎo)通道。 方法 腺病毒感染KFB后，檢測(cè)及比較兩種腺病毒轉(zhuǎn)染前后，KFB內(nèi)Fas蛋白的表達(dá)變化、蛋白功能以及細(xì)胞增殖凋亡狀況。 結(jié)果 腺病毒感染后的KFB均能穩(wěn)定提高Fas蛋白的表達(dá),并且在Fas單克隆抗體的誘導(dǎo)下可以發(fā)生明顯的細(xì)胞凋亡。 結(jié)論 ①構(gòu)建的兩種重組腺病毒AdFas在體外實(shí)驗(yàn)中能有效地提高KFB蛋白的表達(dá),并可以重建原來阻斷的死亡信號(hào)傳導(dǎo)通道；②細(xì)菌內(nèi)重組腺病毒體外治療效果更佳；③再次估證了Fas基因突變與K之間的聯(lián)系，為K基因治療展示了一條新途徑。