目的探究低氧三維培養(yǎng)微環(huán)境對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響及影響機(jī)制。 方法P5 代小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和聚-3 羥基丁酸酯-co-4 羥基丁酸酯［P（3HB-co-4HB）］分別在三維常氧（20%）和三維低氧（4%）條件下共同培養(yǎng)，24 h 后 CCK-8 法測(cè)定兩組細(xì)胞的增殖情況；12 h 后實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（real-time quantitative PCR）檢測(cè) HIF-1α 基因表達(dá)水平；24 h 后 Western blotting 檢測(cè)兩組 HIF-1α 蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果共同培養(yǎng) 24 h 后，CCK-8 法檢測(cè)顯示低氧組 OD 值顯著大于常氧組 (0.455±0.027 vs. 0.352±0.090，n=12，P<0.05)；低氧培養(yǎng) 12 h 后，低氧組的 HIF-1α mRNA 表達(dá)水平顯著高于常氧組（P<0.05）；低氧培養(yǎng) 24 h 后，同常氧組（0.47±0.05）比較，低氧組（0.63± 0.06）HIF-1α 蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著增高（n=3，P<0.05）。 結(jié)論低氧三維微環(huán)境可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，這種效應(yīng)可能與 HIF-1α 信號(hào)通路的激活有關(guān)。
【摘要翻譯】 一 氧化氮合酶( NOS) -2( NOS-2) 的誘導(dǎo)和一氧化氮產(chǎn)物增加是過(guò)敏性氣道疾病的共同特征。嚴(yán)重哮喘與氣道S-亞硝基硫醇減少相關(guān)。S-亞硝基硫醇是NO的生化產(chǎn)物, 可通過(guò)促炎癥轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 的S-亞硝基化抑制炎癥反應(yīng)。因此, 重建氣道S-亞硝基硫醇對(duì)治療可能有益。我們對(duì)此假設(shè)在以卵清蛋白誘導(dǎo)的過(guò)敏性炎癥大鼠模型中進(jìn)行驗(yàn)證。未使用或使用卵清蛋白致敏的動(dòng)物均在卵清蛋白激發(fā)前于氣管內(nèi)灌注S-亞硝基谷胱甘肽( GSNO;50 μl, 10 mM) , 并在48 h 以后進(jìn)行分析。GSNO 給藥增加了肺組織S-亞硝基硫醇水平。與對(duì)照組比, GSNO 降低了卵清蛋白致敏動(dòng)物NF-κB 的活性, 但對(duì)支氣管肺泡灌洗細(xì)胞總數(shù)、分類計(jì)數(shù)及杯狀細(xì)胞化生標(biāo)記物均無(wú)顯著影響。GSNO給藥也改變了HIF-1 的活性, 導(dǎo)致未致敏大鼠HIF-1 活化,但抑制卵清蛋白致敏大鼠的HIF-1 活性。我們使用NOS-2基因敲除小鼠來(lái)評(píng)價(jià)內(nèi)源性一氧化氮合成酶-2 在調(diào)節(jié)NF-κB和( 或) HIF-1 活性及氣道過(guò)敏性炎癥的作用。盡管在NOS-2 基因敲除小鼠中卵清蛋白誘導(dǎo)的NF-κB 活力輕度增高, 這與支氣管肺泡灌洗中性粒細(xì)胞輕度增加有關(guān), 其他的過(guò)敏性炎癥指標(biāo)和HIF-1 活性在NOS-2 基因敲除及野生型小鼠之間卻無(wú)明顯相差?？傮w來(lái)說(shuō), 我們的研究表明GSNO灌注能抑制氣道過(guò)敏性炎癥中NF-κB 活性, 但是并不能顯著地影響大部分炎癥及杯狀細(xì)胞化生指標(biāo), 這樣可能因?yàn)閷?duì)其他信號(hào)通道( 比如HIF-1) 的影響而限制了它的治療價(jià)值?！臼鲈u(píng)】 GSNO 是近年哮喘治療研究的熱點(diǎn)。既往的研究發(fā)現(xiàn)GSNO 在哮喘治療中有一定前景。本研究卻發(fā)現(xiàn)GSNO 氣管內(nèi)滴注雖能抑制過(guò)敏性氣道炎癥中NF-κB 活性,但并不能顯著抑制氣道炎癥反應(yīng)及杯狀細(xì)胞化生這兩個(gè)哮喘關(guān)鍵病理改變, 可能與GSNO 同時(shí)影響了HIF-1 等其他信號(hào)通路有關(guān)。該研究表明GSNO 對(duì)哮喘氣道炎癥治療效果有限, 同時(shí)表明哮喘氣道炎癥調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜, 治療藥物的設(shè)計(jì)需考慮多種信號(hào)通路對(duì)哮喘氣道炎癥的影響。
目的 探討生肌玉紅膠原在缺血組織中促進(jìn)血管新生的作用效果及其作用機(jī)理。方法 Wistar大鼠48只按隨機(jī)配對(duì)方法隨機(jī)均分為空白組、對(duì)照組（膠原）及實(shí)驗(yàn)組（生肌玉紅膠原）3組；在大鼠后肢缺血模型基礎(chǔ)上于大鼠右后肢缺血組織中植入不同的膠原制劑，分別于模型制作術(shù)后3，7、14及28d取埋植的膠原制劑標(biāo)本及標(biāo)本周圍約0.5cm 范圍的缺血肌肉組織。通過(guò)激光散斑成像系統(tǒng)觀察大鼠右后肢缺血模型制作術(shù)后各時(shí)點(diǎn)的血流灌注情況，采用光度計(jì)法測(cè)定膠原制劑（生肌玉紅膠原）內(nèi)的血紅蛋白含量，采用免疫組化染色方法檢測(cè)標(biāo)本周圍肉芽組織中的微血管計(jì)數(shù)，采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 方法檢測(cè)缺血肌肉組織中各時(shí)點(diǎn)低氧誘導(dǎo)因子（HIF）-1αmRNA以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF） mRNA的表達(dá)。結(jié)果 大鼠右后肢缺血模型制作成功即刻大鼠患肢呈現(xiàn)明顯的缺血狀態(tài)，其血流灌注值明顯低于術(shù)前（P ＜0.01）；在術(shù)后3d卻呈明顯的充血狀態(tài)，其血流灌注值明顯升高，且略高于術(shù)前水平，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；在術(shù)后7～14d大鼠患肢的血流灌注值呈逐漸下降趨勢(shì)，至術(shù)后28d又開(kāi)始回升， 該3個(gè)時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組大鼠患肢的血流灌注值均高于空白組（P ＜0.05）， 對(duì)照組與空白組比較其差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；術(shù)后7及14d實(shí)驗(yàn)組大鼠肢體的血流灌注值高于對(duì)照組（P ＜0.05）。各時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組膠原標(biāo)本內(nèi)血紅蛋白含量均高于對(duì)照組 （P ＜0.01）。實(shí)驗(yàn)組微血管計(jì)數(shù)于術(shù)后7及14d高于對(duì)照組（P ＜0.05）； 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)點(diǎn)HIF-1α mRNA及VEGF mRNA的表達(dá)水平均高于對(duì)照組和空白組（P ＜0.05），而對(duì)照組與空白組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。結(jié)論 生肌玉紅膠原通過(guò)誘導(dǎo)HIF-1α mRNA及VEGF mRNA血管新生相關(guān)基因的表達(dá)而改善缺血組織的血流灌注，促進(jìn)微血管新生，從而達(dá)到促進(jìn)組織修復(fù)的功效。
目的 探討HIF-1α和BAK蛋白在胃癌中的表達(dá)情況，以及二者在胃癌中的相互關(guān)系及作用。方法 應(yīng)用免疫組化SABC染色法檢測(cè)80例胃癌組織和20例正常胃組織中的HIF-1α和BAK蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 胃癌中HIF-lα和BAK蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率分別為56.3%（45/80）和67.5%（54/80），而在胃正常組織中分別為5.0%（1/20）和20.0%（4/20），二者在胃癌中的表達(dá)顯著高于胃正常組織，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HIF-1α蛋白表達(dá)與胃癌組織的浸潤(rùn)范圍、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與臨床分期、年齡及性別無(wú)關(guān)（P＞0.05）；BAK蛋白表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)及分化程度相關(guān)（P＜0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、年齡及性別無(wú)關(guān)（P＞0.05）。胃癌組織中HIF-1α與BAK蛋白的陽(yáng)性表達(dá)之間呈正相關(guān)（列聯(lián)系數(shù)r=0.056，P＜0.05）。結(jié)論 HIF-1α與BAK蛋白在胃癌的臨床分期及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中存在關(guān)系，這對(duì)于研究胃癌的發(fā)生和發(fā)展，以及對(duì)于探索以二者為靶點(diǎn)的抗腫瘤治療有重要意義。
目的系統(tǒng)評(píng)價(jià)缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）蛋白表達(dá)與腎細(xì)胞癌及其不同臨床病理特征的相關(guān)性。 方法計(jì)算機(jī)檢索The Cochrane Library、PubMed、EMbase、CNKI、VIP、CBM和WanFang Data，搜集國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)表關(guān)于HIF-1α蛋白表達(dá)與腎細(xì)胞癌及其不同臨床病理特征相關(guān)性的病例-對(duì)照研究，檢索時(shí)限均為從建庫(kù)至2015年6月。由2位研究者獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、提取資料和評(píng)價(jià)納入研究的偏倚風(fēng)險(xiǎn)后，采用RevMan 5.3軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果共納入8個(gè)病例-對(duì)照研究，包括腎細(xì)胞癌組429例，正常腎組織組130例。Meta分析結(jié)果顯示：HIF-1α蛋白在腎細(xì)胞癌組明顯高于正常腎組織組［OR=16.76，95% CI（8.53，32.92），P＜0.000 01］，在腎細(xì)胞癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組［OR=4.33，95% CI（2.53，7.39），P＜0.000 01］，在TNM臨床分期Ⅲ～Ⅳ期組明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組［OR=0.30，95% CI（0.18，0.51），P＜0.000 1］，在病理分級(jí)G3+G4期組明顯高于G1+G2期組［OR=0.54，95% CI（0.29，0.98），P=0.04］，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但在腎細(xì)胞癌患者年齡≥50歲組與＜50歲組［OR=1.09，95% CI（0.54，2.19），P=0.82］、男性組與女性組［OR=0.77，95% CI（0.48，1.25），P=0.29］的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論HIF-1α蛋白的表達(dá)與腎細(xì)胞癌臨床分期和病理分級(jí)有顯著相關(guān)性，其促進(jìn)了腎細(xì)胞癌的形成和發(fā)展。受納入研究數(shù)量和質(zhì)量限制，上述結(jié)論尚待開(kāi)展更多高質(zhì)量研究加以驗(yàn)證。
目的探討缺氧條件下大鼠髓核細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子 1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）與自噬相關(guān)分子 Beclin1、LC3B 的表達(dá)及其相關(guān)性。方法取健康成年 SD 大鼠髓核組織，分離培養(yǎng)髓核細(xì)胞并傳代。取第 3 代髓核細(xì)胞行 HE 染色和Ⅱ型膠原酶免疫熒光染色鑒定后，隨機(jī)分為 4 組。A 組細(xì)胞于常氧條件下（37℃、5%CO2、20%O2）培養(yǎng)，B 組細(xì)胞于缺氧條件下（37℃、5%CO2、1%O2）培養(yǎng)，C 組細(xì)胞轉(zhuǎn)染 HIF-1α-小干擾 RNA 后于缺氧條件下培養(yǎng)，D 組細(xì)胞加入自噬抑制劑 3-MA 后于缺氧條件下培養(yǎng)。各組細(xì)胞培養(yǎng) 8 h 后，采用 Western blot 和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）檢測(cè) HIF-1α 與自噬相關(guān)分子 Beclin1、LC3B 的表達(dá)情況。結(jié)果經(jīng)分離純化的第 3 代大鼠髓核細(xì)胞 HE 染色后細(xì)胞質(zhì)呈淡粉色，細(xì)胞核呈藍(lán)黑色；Ⅱ型膠原酶免疫熒光染色為陽(yáng)性。Western blot 和 qRT-PCR 檢測(cè)示，B 組 HIF-1α、Beclin1 和 LC3B 蛋白及 mRNA 相對(duì)表達(dá)量均顯著高于 A 組（P<0.05），C 組均顯著低于 B 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。D 組 HIF-1α 蛋白和 mRNA 相對(duì)表達(dá)量與 B 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），Beclin1 和 LC3B 蛋白和 mRNA 相對(duì)表達(dá)量均較 B 組顯著降低（P<0.05）。結(jié)論缺氧條件能誘導(dǎo)大鼠髓核細(xì)胞中 HIF-1α 和自噬相關(guān)分子 Beclin1、LC3B 的表達(dá)，且 HIF-1α 與自噬相關(guān)分子的表達(dá)具有相關(guān)性，即 HIF-1α 下調(diào)能降低自噬相關(guān)分子的表達(dá)，而缺氧條件下自噬水平下調(diào)對(duì) HIF-1α 的表達(dá)無(wú)明顯影響。