目的 研究支氣管哮喘模型大鼠肺CD4 + T 細胞中的Notch1 基因mRNA 表達水平、Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 甲基化水平及其甲基化改變的位點。方法 20 只Wistar 大鼠隨機分為對照組和哮喘組( 每組10 只) , 哮喘組用卵白蛋白( OVA) 致敏并激發(fā)的方法建立哮喘大鼠模型。免疫磁珠分離肺CD4 + T細胞并進行純度鑒定。Real-time PCR 檢測肺CD4 + T 細胞Notch1 基因mRNA 表達水平, 重亞硫酸鹽測序檢測Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 甲基化水平。結果 哮喘組大鼠肺CD4 + T細胞中Notch1 基因mRNA 表達水平為對照組的( 2. 254 ±0. 403) 倍( P lt; 0. 01) 。哮喘組大鼠肺CD4 + T淋巴細胞Notch1 基因啟動子區(qū)DNA 10 個位點整體甲基化水平低于對照組( 0. 150 ±0. 108 比0. 300 ±0. 667, P lt;0. 01) 。結論 哮喘大鼠肺CD4 + T 細胞Notch1 基因DNA 低甲基化可能參與了Notch1 基因的轉錄調控, 增高了Notch1 基因的表達量, 從而參與了哮喘的發(fā)病。
目的 觀察Notch受體蛋白1（Notch1）、Delta樣配體4(Dll4)在增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）纖維血管膜中的表達，初步探討Notch1、Dll4在PDR新生血管形成中的作用及與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）信號通路的關系。 方法 行玻璃體切割手術的PDR患者57例60只眼納入研究。根據(jù)手術前是否行抗VEGF藥物玻璃體腔注射將患眼分為PDR未注藥組和PDR注藥組，分別為30例32只眼、27例28只眼。PDR注藥組患眼手術前2～7 d行雷珠單抗玻璃體腔注射治療。選取同期非糖尿病伴特發(fā)性黃斑前膜患者18例18只眼作為對照組。于玻璃體切割手術中獲得PDR纖維血管膜病理標本及黃斑前膜病理標本。應用熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）及免疫組織化學染色法檢測各組病理標本中Notch1、Dll4、VEGF受體2（VEGFR2）的表達；采用蘇木精-伊紅染色計數(shù)突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞數(shù)量。 結果 免疫組織化學染色結果顯示，PDR注藥組、PDR未注藥組病理標本中均有Notch1、Dll4、VEGFR2蛋白表達。PDR未注藥組病理標本中Notch1、Dll4、VEGFR2蛋白相對表達量均高于PDR注藥組，差異均有統(tǒng)計學意義（t=3.45、6.01、4.08，P=0.030、0.008、0.023）。PDR未注藥組、PDR注藥組病理標本中，突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞數(shù)量分別為（41.50±5.57）、（17.17±2.48）個，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.58，P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，PDR未注藥組（H=12.50）、PDR注藥組（H=12.50）、對照組（H=12.02）病理標本中Notch1、Dll4、VEGFR2 mRNA相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.005）。其中，PDR注藥組、PDR未注藥組病理標本中Notch1、Dll4、VEGFR2 mRNA相對表達量顯著高于對照組；與PDR未注藥組比較，PDR注藥組病理標本中Notch1、Dll4、VEGFR2 mRNA相對表達量均減少。Spearman相關性分析結果顯示，VEGFR2與Dll4（r=0.83）、VEGFR2與Notch1（r=0.81）、Notch1與Dll4（r=0.87）之間mRNA相對表達量均呈顯著正相關（P＜0.05）。 結論 Notch1、Dll4在PDR纖維血管膜中的表達均高于對照組，且與VEGFR2的表達呈正相關；Notch1、Dll4在PDR新生血管的發(fā)生中發(fā)揮調節(jié)作用，其作用途徑可能與VEGFR2相關。
目的檢測 Notch 信號通路在激活和失活狀態(tài)下，鼠膝骨關節(jié)軟骨細胞中 Notch1、Bax 和 Bcl-2 基因的表達情況，探討 Notch 信號通路在大鼠膝骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）軟骨細胞凋亡中的作用機制。方法選取 34 只無特定病原體級 Sprague Dawley 大鼠，其中 32 只使用 Hulth 方法制造右膝 OA 模型，余下 2 只正常飼養(yǎng)。4 周后，造模大鼠隨機選擇 2 只以及正常飼養(yǎng)的 2 只大鼠全部處死，觀察右膝軟骨的形態(tài)變化，并進行病理檢查證實造模成功，余下的 30 只大鼠隨機分成激活組、抑制組、空白對照組，每組 10 只。于每周星期二、五行大鼠膝關節(jié)腔注射，其中激活組注射 Nocth 信號通路特異性激活劑 Jagged1 蛋白 25 ng/kg，抑制組注射 γ 分泌酶抑制劑 DAPT（GSI-IX）100 ng/kg，空白對照組注射同體積磷酸鹽緩沖液。關節(jié)腔注射 8 周后全部處死大鼠，取右膝股骨髁關節(jié)骨軟骨標本，大體觀察 3 組大鼠膝關節(jié)軟骨的退變程度，行光學顯微鏡下組織形態(tài)學觀察及 Mankin 評分，并采用免疫組織化學檢測各組軟骨細胞中 Notch1、Bax 和 Bcl-2 蛋白的表達情況。結果關節(jié)腔注射 8 周后，抑制組、空白對照組、激活組 Mankin 評分分別為（3.40±0.84）、（6.70±0.95）、（11.10±1.37）分，組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。抑制組大鼠膝關節(jié)軟骨的 Notch1、Bax 陽性率均低于空白對照組及激活組（P<0.05），Bcl-2 陽性率高于空白對照組及激活組（P<0.05）。結論Notch 信號通路激活后可能通過凋亡途徑上調 Bax 蛋白，下調 Bcl-2 蛋白，從而促進軟骨細胞凋亡，加重 OA；Notch 信號通路抑制后可能通過凋亡途徑下調 Bax 蛋白，上調 Bcl-2 蛋白，從而抑制軟骨細胞凋亡，減輕 OA 發(fā)展。
目的 觀察細顆粒物（particulate matter 2.5，PM2.5）對支氣管哮喘（簡稱哮喘）小鼠氣道重塑及 Notch 信號通路的影響，探討其影響哮喘氣道重塑的可能機制。方法 40 只 8 周齡無特定病原級雌性 BALB/c 小鼠按隨機數(shù)字表法分為健康對照組、健康 PM2.5 組、哮喘組、哮喘 PM2.5 組，每組 10 只。哮喘組及哮喘 PM2.5 組采用卵清蛋白致敏建立哮喘小鼠模型，健康 PM2.5 組和哮喘 PM2.5 組于每次激發(fā)后給予霧化吸入 PM2.5（510 μg/m3）氣溶膠。造模結束后測定各組小鼠肺功能；小鼠肺組織切片行蘇木精–伊紅染色和 Masson 染色，圖像分析軟件測定支氣管基底膜周徑、支氣管管壁總面積、支氣管平滑肌面積及膠原沉積面積；免疫組織化學法和蛋白印跡法檢測肺組織 Notch1、Hes1、α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）和 Ⅰ 型膠原蛋白（type Ⅰ collagen，Col-Ⅰ）蛋白表達；堿水法檢測肺組織羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量。結果 哮喘組氣道管壁總面積、氣道平滑肌面積及膠原沉積面積［（365.81±46.10）、（132.80±20.14）、（221.82±25.20）μm2/μm］顯著高于健康對照組［（187.70±14.80）、（89.73±8.49）、（123.91±16.88）μm2/μm］（均 P<0.01）；健康 PM2.5 組（244.62±42.86）、（116.40±20.40）、（174.91±57.41）μm2/μm］和哮喘 PM2.5 組（447.70±76.14）、（236.14±36.35）、（294.89±75.96）μm2/μm］均分別高于各自對照組（均 P<0.01）。哮喘組小鼠肺組織中 Notch1、Hes1、α-SMA、TGF-β1 和 Col-Ⅰ 的表達呈強陽性，健康對照組表達較弱；PM2.5 干預后，與各自對照組比較，上述分子的表達強度增加。哮喘組 Notch1 受體及下游 Hes1 蛋白（0.86±0.10，1.02±0.06）較健康對照組（0.26±0.07，0.56±0.09）明顯升高（均 P<0.01）；健康 PM2.5 組（0.44±0.06，0.77±0.07）和哮喘 PM2.5 組（1.33±0.23，1.25±0.18）均分別高于各自對照組（均 P<0.01）。哮喘組氣道重塑相關分子 α-SMA、TGF-β1 和 Col-Ⅰ 蛋白（0.60±0.04，0.52±0.09，0.36±0.04）較健康對照組（0.31±0.03，0.22±0.04，0.23±0.04）明顯升高（均 P<0.01）；健康 PM2.5 組（0.49±0.02，0.30±0.03，0.28±0.03）和哮喘 PM2.5 組（0.88±0.09，0.62±0.03，0.49±0.07）均分別高于各自對照組（P<0.05或P<0.01）。哮喘組肺組織 HYP 含量［（57.71±7.60）μg/100 mg］較健康對照組［（40.53±5.73）μg/100 mg］明顯上升；健康 PM2.5 組［（53.92±6.82）μg/100 mg］和哮喘 PM2.5 組（70.96±4.44）μg/100 mg］均分別高于對照組（均 P<0.01）。哮喘組及哮喘 PM2.5 組 Notch1、Hes1 蛋白表達與氣道管壁總面積、氣道平滑肌面積、膠原沉積面積及 α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ 和 HYP 均呈正相關（均 P<0.01）。結論 PM2.5 能夠促進哮喘的早期氣道重塑，Notch 信號通路的活化可能參與了 PM2.5 對早期氣道重塑的促進作用。