目的 探索G蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白1(G protein coupledreceptor kinase interacting protein 1, GIT1)的RNA發(fā)夾結(jié)構(hairpin)(GIT1-RNAh)對成骨細胞遷移的影響，并分析其機制。方法 取培養(yǎng)至第6代的鼠成骨細胞，隨機分成兩組，分別用包含GIT1-RNAh(實驗組)和綠色熒光蛋白(green fluoresenceprotein, GFP)的RNA發(fā)夾結(jié)構(GFPRNAh)的腺病毒(對照組)感染12 h后，再將每組分成有、無血小板源性生長因子(platelet drived growth factor, PDGF)刺激的兩組。免疫熒光染色方法檢測成骨細胞內(nèi)源性GIT1蛋白表達和Paxillin的位置。 Western Blot檢測Paxillin的磷酸化。 構建包含藍色熒光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)實驗組和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(對照組)， 免疫熒光雙染的方法檢測CFP-GIT1-RNAh和 CFP-GFP-RNAh對Paxillin位置的特異性作用。 用劃痕愈合法檢測GIT1-RNAh(實驗組)和GFP-RNAh(對照組) 腺病毒對成骨細胞在PDGF刺激下的遷移能力的影響。結(jié)果 免疫組織化學觀察，實驗組和對照組比較，明顯抑制成骨細胞內(nèi)源性的GIT1蛋白表達和擾亂Paxillin的分布。 Western Blot觀察，和對照組相比，實驗組明顯抑制了Paxiliin的磷酸化(P＜0.05)。劃痕愈合法檢測觀察，和對照組相比，實驗組明顯抑制成骨細胞的遷移。結(jié)論 GIT1-RNAh通過擾亂Paxillin的分布和其磷酸化從而抑制成骨細胞的遷移。
目的研究抑制樁蛋白(Paxillin)磷酸化對機械通氣相關性肺損傷的效應。 方法60只健康雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、保護性通氣組、大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組, 每組15只。正常對照組僅做氣管切開; 保護性通氣組進行保護性機械通氣2 h, 大潮氣量通氣組進行大潮氣量機械通氣2 h; PP2抑制劑組通氣前1 h腹腔注射酪氨酸蛋白激酶抑制劑PP2并進行大潮氣量機械通氣2 h。正常對照組在自然吸氣2 h, 其余組在機械通氣結(jié)束時處死, 光鏡觀察肺組織病理學改變并進行彌漫性肺泡損傷(DAD)評分; 測定髓過氧化物酶(MPO)活性; 計算肺濕/干重比值(W/D); 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子(TNF-α)的水平; 伊文思藍法檢測肺血管通透性; 蛋白免疫印跡法檢測磷酸化樁蛋白(p-Paxillin)和Paxillin表達情況; TUNEL法檢測原位細胞凋亡。 結(jié)果大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組的DAD評分、伊文思藍滲出量、W/D、MPO及TNF-α差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組細胞原位凋亡率從高到低排序:大潮氣量通氣組＞PP2抑制劑組＞保護性通氣組＞正常對照組。p-Paxillin的表達量在大潮氣量通氣組中最高, 與其他組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。保護性通氣組、大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組間Paxillin的表達量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結(jié)論抑制Paxillin磷酸化可以明顯改善機械通氣相關性肺損傷。