目的 探討抑癌基因Ras相關(guān)區(qū)域家族1A （RASSF1A）基因在結(jié)腸癌組織以及相應(yīng)正常結(jié)腸組織中的表達(dá)并分析其表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理因素之間的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法和Western blot法檢測34例結(jié)腸癌手術(shù)標(biāo)本和相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)水平，應(yīng)用RT-PCR法檢測RASSF1AmRNA在結(jié)腸癌和正常結(jié)腸組織中的表達(dá)情況。結(jié)果?、倜庖呓M織化學(xué)法結(jié)果：結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白表達(dá)陽性率明顯低于其在正常結(jié)腸組織中的表達(dá)陽性率 〔35.3% （12/34）比97.1% （33/34），P＜0.05〕。結(jié)腸癌組織中RASSF1A蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度和TNM分期均有關(guān)（P＜0.05），即高、中分化及TNM分期較低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSF1A蛋白表達(dá)陽性率較高（P＜0.05）。②Western blot法結(jié)果：在34例結(jié)腸癌患者中RASSF1A蛋白表達(dá)水平明顯低于其在相應(yīng)的正常結(jié)腸組織中的表達(dá)水平 〔0.316 8±0.019 6比0.914 4±0.177 6，P＜0.05〕；該結(jié)果與RT-PCR法檢測到的RASSF1A mRNA表達(dá)情況基本一致 〔0.158 9±0.223 7和0.572 3±0.193 9，P＜0.05〕。結(jié)論 RASSF1A基因的失表達(dá)可能在原發(fā)性結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，檢測RASSF1A的表達(dá)情況可為結(jié)腸癌的早期診斷提供幫助。
目的克隆大鼠galectin-9基因全長cDNA，構(gòu)建含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒載體，并予以鑒定。方法從大鼠的肝臟組織中用RT-PCR的方法克隆擴(kuò)增大鼠galectin-9基因，再定向插入到帶NotⅠ和HindⅢ酶切的pDC316-GFP穿梭質(zhì)粒中，獲得穿梭質(zhì)粒pDC316-GFP-galectin-9。經(jīng)PCR、NotⅠ和HindⅢ酶切及測序鑒定后，用脂質(zhì)體將穿梭質(zhì)粒pDC316-GFP-galectin-9與腺病毒骨架質(zhì)粒pBHGlox△E1.3Cre共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞。經(jīng)位點(diǎn)特異性重組獲得含目的基因的重組腺病毒Ad5-galectin-9，行PCR鑒定，經(jīng)HEK-293細(xì)胞擴(kuò)增及純化制備高滴度病毒液，用細(xì)胞培養(yǎng)方法測定病毒TCID50滴度。結(jié)果 PCR、酶切及測序證實(shí)穿梭質(zhì)粒構(gòu)建正確，PCR鑒定證實(shí)大鼠galectin-9基因重組腺病毒載體構(gòu)建正確，病毒的感染滴度為1.4×109 U/ml。結(jié)論成功構(gòu)建了含大鼠galectin-9基因的重組腺病毒表達(dá)載體，為進(jìn)一步研究大鼠galectin-9基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
目的分析人直腸癌組織中轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)的表達(dá)變化及其與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系。方法選取四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科中心2009年3～10月期間手術(shù)切除的直腸癌及距離腫瘤5 cm以遠(yuǎn)的正常直腸組織標(biāo)本92對，分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RTPCR和免疫組織化學(xué)染色SP法檢測ATF5 mRNA和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果直腸癌組織中33例(35.9%)ATF5 mRNA表達(dá)上調(diào)，但ATF5 mRNA相對表達(dá)量與正常直腸組織相比，二者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.363)，并且ATF5 mRNA表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期均無關(guān)(Pgt;0.05)； 但直腸癌組織中ATF5蛋白的表達(dá)高于正常直腸組織(P=0.000)，并且其表達(dá)與腫瘤分化程度有關(guān)(P=0.013)，而與其他臨床病理因素?zé)o關(guān)(Pgt;0.05)。結(jié)論ATF5蛋白的表達(dá)與直腸癌的發(fā)生和分化相關(guān)，但這種相關(guān)需要進(jìn)一步的研究證明。
目的探討結(jié)直腸癌患者術(shù)前接受Folfox4方案化療對miR-196和HoxB8表達(dá)的影響，并探討miR-196和HoxB8在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)差異以及與Folfox4方案化療敏感性的相關(guān)性及其意義。 方法分別用熒光定量PCR技術(shù)和免疫組化技術(shù)檢測新輔助化療組（包括化療敏感組與不敏感組）和未化療組患者結(jié)直腸癌組織中miR-196和HoxB8的表達(dá)情況，分析二者在不同組間的表達(dá)差異及其相關(guān)性。 結(jié)果結(jié)直腸癌組織中miR-196和HoxB8 mRNA的相對表達(dá)量在新輔助化療組分別為0.6468±0.6839和0.6076±0.4189，相比未化療組的1.0000±0.0000和1.0000±0.0000均下降（P＜0.01）；miR-196在化療敏感組的表達(dá)相對量為0.9489±0.6910，高于不敏感組的0.3447±0.5361（P＜0.01）；HoxB8 mRNA在化療敏感組的表達(dá)相對量為0.4899±0.3715，低于不敏感組的0.7253±0.4375（P＜0.05）；免疫組化結(jié)果提示化療敏感組中HoxB8蛋白表達(dá)陽性率低于不敏感組（Z=-2.396，P=0.017）。在新輔助化療組和未化療組中，miR-196和HoxB8 mRNA的表達(dá)均存在負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.595，P＜0.01；r=-0.435，P＜0.01）。 結(jié)論術(shù)前Folfox4方案化療可以降低miR-196和HoxB8在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平；miR-196和HoxB8的表達(dá)差異可能與結(jié)直腸癌患者對Folfox4方案的化療敏感性相關(guān)，高表達(dá)的miR-196可能通過抑制HoxB8的表達(dá)水平從而增強(qiáng)Folfox4化療的敏感性。
目的檢測PTEN和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。 方法收集甘肅省天水市第一人民醫(yī)院2012年9月至2015年3月期間手術(shù)切除后經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性甲狀腺癌的石蠟包埋組織40例及術(shù)后離體組織14例，分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法和RT-PCR法檢測PTEN和Ki-67蛋白和mRNA在甲狀腺癌組織及其相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，并分析PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)與甲狀腺癌患者臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。 結(jié)果① PTEN蛋白表達(dá)陽性率在甲狀腺癌組織中明顯低于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)陽性率[35.0%（14/40）比60.0%（24/40），P＜0.05]，Ki-67蛋白表達(dá)陽性率在甲狀腺癌組織中明顯高于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)陽性率[72.5%（29/40）比42.5%（17/40），P＜0.05]。② PTEN mRNA表達(dá)相對灰度值在14例甲狀腺癌標(biāo)本中明顯低于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)（0.225 7±0.036 3比0.503 6±0.037 5，P＜0.05）；Ki-67 mRNA表達(dá)相對灰度值在14例甲狀腺癌標(biāo)本中明顯高于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)（1.212 1±0.042 1比0.293 6±0.027 4，P＜0.05）。③ PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)與甲狀腺癌的組織學(xué)分級(jí)、病理類型、腫瘤分期及有無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與甲狀腺癌患者的性別、年齡及腫瘤包膜是否完整無關(guān)（P＞0.05）。④ PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（rs=-0.605，P=0.000），而其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)無相關(guān)性（rs=-0.021，P=0.899）。 結(jié)論P(yáng)TEN和Ki-67基因在甲狀腺癌組織中異常表達(dá)，其可能與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其機(jī)制有一定關(guān)系，二者聯(lián)合可能有助于甲狀腺癌病理類型的鑒別、生物學(xué)行為的判斷和臨床分期，可能作為甲狀腺癌基因診斷、治療的新靶點(diǎn)。
【摘要】目的以CEA mRNA為標(biāo)記物，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測直腸癌在直腸系膜的播散范圍，以探討直腸癌根治術(shù)直腸系膜的合理切除范圍。 方法40例直腸癌全系膜切除的手術(shù)標(biāo)本，取不同距離的直腸系膜以CEA mRNA為標(biāo)記物，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測其有無癌轉(zhuǎn)移。 結(jié)果在40例病例中發(fā)現(xiàn)直腸系膜有癌播散者9例（22.5%），播散最遠(yuǎn)距離在腫瘤下緣下4 cm。直腸癌在直腸系膜的播散與Dukes分期、腫瘤浸潤腸壁深度、腫瘤分化程度及腫瘤分型相關(guān)（P＜0.05），與腫瘤大小及CEA水平無明顯相關(guān)性(Pgt;0.05)。 結(jié)論直腸癌根治術(shù)中距腫瘤下緣5 cm范圍是直腸系膜的安全切緣。
目的 研究原發(fā)性肝細(xì)胞癌及其癌周肝組織中多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）基因的表達(dá)及意義。方法 用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測25例新鮮原發(fā)性肝細(xì)胞癌及其癌周肝組織中MRP mRNA的表達(dá)，用免疫組織化學(xué)技術(shù)LSAB法檢測60例肝細(xì)胞癌組織中MRP蛋白的表達(dá)，并結(jié)合流式細(xì)胞儀對體外化療藥物敏感性的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中MRP mRNA與MRP蛋白表達(dá)陽性率分別為44.00%（11/25）和45.00%（27/60），均以中、低表達(dá)為主，明顯高于癌周肝組織中MRP mRNA和MRP蛋白的表達(dá)陽性率〔28.00%（7/25）、26.67%(16/60)〕，P＜0.05； 5例復(fù)發(fā)性肝癌的MRP蛋白表達(dá)陽性率和表達(dá)強(qiáng)度呈增高的趨勢。在RT-PCR檢測的25例患者中，該兩項(xiàng)指標(biāo)具有良好的一致性（Plt;0.05）。肝細(xì)胞癌在體外對化療藥物5-FU、DDP、ADM、MMC及CTX的敏感性分別為(15.80±7.63)%、(18.45±9.59)%、(17.95±7.99)%、(16.60±8.69)%和(17.40±10.14)%。MRP蛋白表達(dá)陽性者對5-FU、ADM的敏感性低于陰性者（P＜0.05）。結(jié)論 MRP基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)可能在肝癌內(nèi)在性和獲得性耐藥中起重要作用，檢測MRP基因表達(dá)有助于預(yù)測化療反應(yīng)和選擇合理的化療方案。
淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌行根治性切除術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要途徑之一，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目的多少與胃癌的預(yù)后密切相關(guān)［1］。常規(guī)組織學(xué)檢查淋巴結(jié)有可能忽略微轉(zhuǎn)移的存在，這將直接影響著臨床分期的準(zhǔn)確性、預(yù)后預(yù)測以及輔助治療的選擇。為此，我們采用靶向癌胚抗原（CEA）mRNA的巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Nested RTPCR）方法，檢測常規(guī)病理檢查淋巴結(jié)陰性胃癌的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移情況并探討其臨床意義。
目的 研究膈神經(jīng)切斷后幼豬肺內(nèi)表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）mRNA及角質(zhì)細(xì)胞生長因子（keratinocyte growth factor，KGF）mRNA表達(dá)的變化及其意義。方法 健康雄性幼豬36只，按手術(shù)時(shí)日齡10、30和50 d分為三組，每組12只，再隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(膈神經(jīng)切斷，n=6）和對照組（n=6）。實(shí)驗(yàn)組于頸部將左側(cè)膈神經(jīng)切斷，對照組僅行左側(cè)膈神經(jīng)暴露。分別于術(shù)后2周處死動(dòng)物，采用RT-PCR方法對肺組織中EGF及KGF mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測分析。結(jié)果 RT-PCR的融解曲線示EGF、KGF和內(nèi)參基因GAPDH分別在80.0、84.5和89.0℃附近各有一單峰，融解溫度均一。單側(cè)膈神經(jīng)切斷術(shù)后2周，10 d和30 d實(shí)驗(yàn)組幼豬肺內(nèi)EGF mRNA相對表達(dá)水平分別為3.53±0.36和1.73±029，KGF mRNA的相對表達(dá)水平為4.71±0.42和2.77±0.29，均較相同日齡對照組（EGF mRNA表達(dá)水平4.60±041、2.18±0.24和KGF mRNA表達(dá)水平6.05±0.42、3.58±0.31）低，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；50 d實(shí)驗(yàn)組幼豬肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達(dá)水平（0.72±0.15和1.83±0.22）與對照組（0.74±0.18和2.09±0.23）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對照組間比較顯示幼豬肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），隨幼豬年齡增長肺內(nèi)EGF及KGF mRNA的表達(dá)水平下降。結(jié)論 單側(cè)膈神經(jīng)切斷將導(dǎo)致術(shù)時(shí)日齡＜30 d幼豬肺內(nèi)生長因子表達(dá)水平的下降，進(jìn)而影響肺組織的正常發(fā)育，提示年齡較小的患兒應(yīng)慎行膈神經(jīng)移位術(shù)。
目的：檢測李斯特菌DNA對小鼠H22肝癌Bcl2基因表達(dá)的影響，探討細(xì)菌DNA對腫瘤的抑制作用。方法：建立H22肝癌小鼠模型，從模型建立后的第一天開始，隨機(jī)分組，分別給予李斯特菌DNA液（實(shí)驗(yàn)組）和生理鹽水（對照組）。從癌組織中提取總RNA，設(shè)計(jì)目的基因引物和內(nèi)參照GAPD引物。采用RT-PCR方法，分別檢測實(shí)驗(yàn)組及對照組小鼠瘤體Bcl-2基因的表達(dá)，應(yīng)用Bio-RAD凝膠成像系統(tǒng)及在Quantity One軟件輔助下分析測定表達(dá)結(jié)果。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組小鼠瘤體Bcl-2表達(dá)低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩者有顯著性差異。結(jié)論：李斯特菌DNA對H-22肝癌小鼠腫瘤有抑制作用。