目的 通過(guò)建立小鼠肺炎衣原體感染的模型, 探討小鼠感染肺炎衣原體后, 其信號(hào)通路Toll 樣受體2( TLR2) -p38 蛋白激酶( p38MAPK) 中TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 的表達(dá)變化及其信號(hào)通路抑制劑對(duì)其影響以及炎癥介質(zhì)表達(dá)變化的意義。方法 使用TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 72 只, 隨機(jī)分為正常組、肺炎衣原體感染組、肺炎衣原體感染加特異性p38MAPK 抑制劑SB203580 干預(yù)組, 分別按接種后1、4、7 及14 d 各分4 組。正常組鼻內(nèi)接種2SP 緩沖液, 感染組鼻內(nèi)接種肺炎衣原體; 干預(yù)組在感染肺炎衣原體后即在腹腔注射SB203580, 分別在預(yù)定的時(shí)間處死, 取肺臟組織應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 半定量方法檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA的表達(dá)變化, 用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA) 測(cè)定TNF-α的含量。結(jié)果 與正常組比較, 感染肺炎衣原體后小鼠肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 最明顯, 其中TLR2mRNA 在第7 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 7. 24 ±1. 78) mg/L 比( 0. 64 ±0. 14) mg/L] , p38MAPK mRNA 在第4 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 9. 267 ±1. 813) mg/L 比( 3. 734 ±0. 946) mg/L] , 14 d 以后感染開(kāi)始減輕。其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)也升高, 并明顯高于正常組, 以第4 d 為高峰( 77. 29 ±9. 66) pg/mg。給予SB203580 抑制劑后TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)明顯減弱, 以第4 d 和第7 d 明顯, 其中TLR2 mRNA 在第7 d 為( 0. 269 ±0. 09) mg/L, p38 MAPK mRNA 在第4 d為( 0. 002 ±0. 001) mg/L, 其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)與感染組比較也明顯降低, 以第4 d( 25. 76 ±3. 49) pg/mg 明顯。結(jié)論 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路的活化, 引起細(xì)胞因子的釋放。SB203580 對(duì)TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路有明顯的抑制作用, 并能抑制炎癥介質(zhì)的釋放, 表明肺炎衣原體感染與TLR2-p38MAPK 的信號(hào)通路密切相關(guān)。
【摘要】 目的 觀察機(jī)械通氣對(duì)黏蛋白（mucin，MUC）-5AC表達(dá)的影響及復(fù)方川貝精片的干預(yù)作用。 方法 新西蘭兔25只，6個(gè)月齡，雄性；隨機(jī)分為對(duì)照組、機(jī)械通氣12 h組及復(fù)方川貝精片低、中、高劑量組。收集支氣管灌洗液，分別采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)支氣管灌洗液中p38 MAPK mRNA，MUC-5AC蛋白和mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 機(jī)械通氣能增強(qiáng)MUC-5AC的分泌（Plt;0.05）；加用復(fù)方川貝精片能降低機(jī)械通氣后MUC-5AC蛋白和mRNA的表達(dá)（Plt;0.05）；復(fù)方川貝精片中、高劑量組與低劑量組比較，能降低機(jī)械通氣后MUC-5AC蛋白和mRNA的表達(dá)（Plt;0.05）?！〗Y(jié)論 機(jī)械通氣能促進(jìn)支氣管黏膜上皮細(xì)胞分泌MUC-5AC，復(fù)方川貝精片能抑制機(jī)械通氣所致MUC-5AC表達(dá)升高，其機(jī)制可能與其抑制p38 MAPK表達(dá)有關(guān)。【Abstract】 Objective To observe the effect of mechanical ventilation by breathing machine on the expression of mucin (MUC-5AC) and the interfering effect of compound tablet of fritillary bulb. Methods New Zealand Rabbits were randomly divided into control group, twelve-hour mechanical ventilation group, and low, medium and high-dose compound tablet of fritillary bulb group. Contents of p38 MAPK mRNA, MUC-5AC mRNA and protein in bronchial irrigating solution were detected by realtime RT-PCR and ELISA methods. Results Mechanical ventilation could increase the expression of MUC-5AC in bronchial irrigating solution (Plt;0.05). Compound tablet of fritillary bulb could decrease the expression of MUC-5AC mRNA and protein after mechanical ventilation (Plt;0.05). Compared with low-dose compound tablet of fritillary bulb group, the expression of MUC-5AC mRNA and protein was lower for the high and medium-dose groups (Plt;0.05). Conclusions Mechanical ventilation can promote the expression of MUC-5AC in bronchial endothelial cells, which can be suppressed by compound tablet of fritillary bulb. This may be due to the suppression effect of p38 MAPK expression.
目的探討miR-33s是否能夠通過(guò)靶向p38 MAPK負(fù)性調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。 方法體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞株THP-1,分別將miR-33s的擬似物(mimic,25 nmol/L)和miR-33s的抑制劑(inhibitor,25 nmol/L)轉(zhuǎn)染至THP-1細(xì)胞24 h。用濃度10.0 ng/mL的LPS誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染后的THP-1細(xì)胞24 h,分別采用Realtime RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞miR-33s及p38MAPK蛋白表達(dá),ELISA法檢測(cè)THP-1細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素6(IL-6)的分泌量。 結(jié)果miR-33s mimic轉(zhuǎn)染組p38 MAPK蛋白表達(dá)明顯減少(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6含量顯著降低(P<0.05)。miR-33s inhibitor轉(zhuǎn)染組p38MAPK蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6含量顯著上升(P<0.05)。 結(jié)論LPS能誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞釋放IL-1β、TNF-α、IL-6;miR-33s mimic抑制炎性細(xì)胞因子的分泌。miR-33s inhibitor促進(jìn)促炎性細(xì)胞因子的分泌;miR-33s可能通過(guò)靶向結(jié)合p38 MAPK的3'末端非編碼區(qū)來(lái)發(fā)揮它的負(fù)性調(diào)節(jié)炎癥作用。