目的 探討p38絲裂素活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase，p38MAPK）抑制劑是否通過(guò)調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡減輕脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）所致急性肺損傷（acute lung injury，ALI）。方法 將Balb/c小鼠隨機(jī)分組為對(duì)照組、ALI組和干預(yù)組。對(duì)照組腹腔注射磷酸鹽緩沖液，ALI組腹腔注射40 mg/kg體重的LPS，干預(yù)組腹腔注射不同藥物濃度（0.5、1、2、5 mg/kg）的p38MAPK抑制劑SB203580藥物。1 h后通過(guò)腹腔注射LPS造模，12 h后處死小鼠并取材。肺組織送蘇木精–伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察肺組織病理變化，檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和總蛋白水平。采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)叉頭框蛋白P3（forkhead box p3，F(xiàn)oxp3）和視黃酸受體相關(guān)孤兒受體γt（retinoic acid receptor-related orphan receptor-γt，RORγt）mRNA的表達(dá)量。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)肺組織勻漿中白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-10、IL-17、IL-23和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）及血清中IL-6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的蛋白含量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)脾臟組織勻漿中Th17細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory cells，Treg）亞群。結(jié)果 在LPS誘導(dǎo)建立的ALI小鼠模型中，LPS可引起肺組織內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，BALF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白水平升高（P<0.05），中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞比例升高。SB203580干預(yù)后肺組織病理?yè)p傷程度減輕，相應(yīng)的BALF中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。ALI組血清中IL-6和TNF-α蛋白濃度較對(duì)照組明顯升高，SB203580干預(yù)后炎性細(xì)胞因子下降。與ALI組比較，干預(yù)組Th17細(xì)胞及Th17分化相關(guān)細(xì)胞因子IL-17和IL-23表達(dá)下降，轉(zhuǎn)錄因子RORγt分泌受抑制，而Treg及IL-10和Foxp3相關(guān)分化因子表達(dá)有所升高，且與SB203580呈濃度依賴(lài)性。SB203580干預(yù)后Th17/Treg比值較LPS組明顯降低（P<0.05）。結(jié)論 p38MAPK抑制劑可通過(guò)調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞失衡狀態(tài)減輕LPS導(dǎo)致的ALI。
目的 探討小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TOLL 樣受體( TLR) 2 的基因表達(dá)變化及其信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法 TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 96 只, 隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、SB203580 組和PDTC 組, 每組24 只。每組分別按1、4、7、14 d 各分4 個(gè)小組, 每小組6 只。對(duì)照組鼻內(nèi)接種二磷酸蔗糖( 2sp) 緩沖液, 模型組和干預(yù)組均給予約4. 0 ×106 IFU/mL( 0. 04 mL) 的肺炎衣原體鼻內(nèi)接種,SB203580 組和PDTC 組在接種完肺炎衣原體后分別立即腹腔注射相應(yīng)的p38 蛋白激酶( p38MAPK)抑制劑SB203580 ( 100 mg/ kg ) 或核因子κB ( NF-κB) 抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸( PDTC)( 50 mg/kg) 。分別于接種后第1、4、7 及14 d 處死小鼠, RT-PCR 法檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA 的表達(dá),ELISA 法測(cè)定肺組織勻漿腫瘤壞死因子α( TNF-α) 的含量, 同時(shí)觀察肺組織病理變化。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 明顯, 14 d 以后開(kāi)始下降。PDTC 早期干預(yù)可在一定程度上抑制肺臟組織TLR2 mRNA 表達(dá), 并在感染高峰期抑制明顯。SB203580 對(duì)小鼠肺組織TLR2 mRNA 表達(dá)也有明顯抑制。感染肺炎衣原體后, 肺組織TNF-α表達(dá)水平顯著高于正常組, SB203580 和PDTC 對(duì)小鼠肺組織TNF-α表達(dá)均有抑制作用, SB203580 對(duì)TNF-α的抑制作用強(qiáng)于PDTC。結(jié)果 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2 表達(dá)的增加。對(duì)p38MAPK 和 NF-κB 的干預(yù)均影響TLR2 的表達(dá)以及炎癥介質(zhì)的釋放, 提示肺炎衣原體可能是通過(guò)TLR2 /MAPK 和TLR2 /NF-κB 通路導(dǎo)致肺部炎癥反應(yīng)。
目的 通過(guò)建立小鼠肺炎衣原體感染的模型, 探討小鼠感染肺炎衣原體后, 其信號(hào)通路Toll 樣受體2( TLR2) -p38 蛋白激酶( p38MAPK) 中TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 的表達(dá)變化及其信號(hào)通路抑制劑對(duì)其影響以及炎癥介質(zhì)表達(dá)變化的意義。方法 使用TLR4 基因缺失小鼠( C3H/HeJ) 72 只, 隨機(jī)分為正常組、肺炎衣原體感染組、肺炎衣原體感染加特異性p38MAPK 抑制劑SB203580 干預(yù)組, 分別按接種后1、4、7 及14 d 各分4 組。正常組鼻內(nèi)接種2SP 緩沖液, 感染組鼻內(nèi)接種肺炎衣原體; 干預(yù)組在感染肺炎衣原體后即在腹腔注射SB203580, 分別在預(yù)定的時(shí)間處死, 取肺臟組織應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 半定量方法檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA的表達(dá)變化, 用酶聯(lián)免疫吸附法( ELISA) 測(cè)定TNF-α的含量。結(jié)果 與正常組比較, 感染肺炎衣原體后小鼠肺組織TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)迅速升高, 以第4 d 和第7 d 最明顯, 其中TLR2mRNA 在第7 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 7. 24 ±1. 78) mg/L 比( 0. 64 ±0. 14) mg/L] , p38MAPK mRNA 在第4 d 表達(dá)量明顯高于正常組[ ( 9. 267 ±1. 813) mg/L 比( 3. 734 ±0. 946) mg/L] , 14 d 以后感染開(kāi)始減輕。其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)也升高, 并明顯高于正常組, 以第4 d 為高峰( 77. 29 ±9. 66) pg/mg。給予SB203580 抑制劑后TLR2 mRNA 和p38MAPK mRNA 表達(dá)明顯減弱, 以第4 d 和第7 d 明顯, 其中TLR2 mRNA 在第7 d 為( 0. 269 ±0. 09) mg/L, p38 MAPK mRNA 在第4 d為( 0. 002 ±0. 001) mg/L, 其相應(yīng)的肺組織TNF-α含量表達(dá)與感染組比較也明顯降低, 以第4 d( 25. 76 ±3. 49) pg/mg 明顯。結(jié)論 小鼠感染肺炎衣原體后, 可引起TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路的活化, 引起細(xì)胞因子的釋放。SB203580 對(duì)TLR2-p38 MAPK 信號(hào)通路有明顯的抑制作用, 并能抑制炎癥介質(zhì)的釋放, 表明肺炎衣原體感染與TLR2-p38MAPK 的信號(hào)通路密切相關(guān)。
目的 探討17b-雌二醇（17b-E2）對(duì)兔在體缺血/再灌注（I/R）心肌的急性保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。方法 通過(guò)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立兔在體心肌I/R模型（心肌缺血40 min，再灌注3 h）；采用抽簽法將24只健康雄性新西蘭白兔隨機(jī)分為兩組（每組12只），對(duì)照組：心肌缺血前靜脈注入1ml乙醇；實(shí)驗(yàn)組：心肌缺血前靜脈注入10 μg/kg 17b-E2。用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法分別于心肌缺血前、缺血40 min、再灌注1 h、2 h和3 h不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6(IL-6)的含量；蛋白印跡法（Western blotting）測(cè)定心肌p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表達(dá)；脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡。 結(jié)果 缺血過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)組TNF-α較對(duì)照組降低（F=0.007,P=0.001），而IL-6變化不明顯（F=0.616,P=0.095）; 再灌注過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)組TNF-α和IL6的含量明顯低于對(duì)照組（Plt;0.01）；同時(shí)實(shí)驗(yàn)組p38MAPK的活性和心肌凋亡指數(shù)均明顯低于對(duì)照組(45.07%±2.73% vs. 61.25%±2.41%，t＝-15.398，P=0000；11.21%±3.85% vs. 22.02%±4.49%, t＝-6.332，P=0.000)。 結(jié)論 17bE2通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)及抗凋亡途徑減輕心肌I/R損傷，其作用可能是通過(guò)對(duì)p38MAPK的抑制而實(shí)現(xiàn)的。
目的:探討表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF7生長(zhǎng)的影響及對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDAMB231遷移的影響。方法:MCF7細(xì)胞培養(yǎng)貼壁之后,加入EGCG處理,2d后收集蛋白,采用Western Blot檢測(cè)磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶(phosphop38MAPK)的表達(dá);同樣處理后收集活細(xì)胞,用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞的存活;取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDAMB231細(xì)胞,分至6孔板培養(yǎng),使用EGCG處理后,采用細(xì)胞劃線法探測(cè)乳腺癌細(xì)胞的遷移。結(jié)果:使用EGCG處理乳腺癌細(xì)胞后,phosphop38MAPK的表達(dá)降低,EGCG處理乳腺癌細(xì)胞4d后其增殖率降低50%,遷移活性降低。結(jié)論:EGCG處理乳腺癌細(xì)胞能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)以及遷移,這與p38MAPK信號(hào)通路相關(guān)。