目的 綜述杜興肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（Duchenne muscular dystrophy，DMD）治療的最新研究進(jìn)展。 方法 廣泛查閱近年來(lái)相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)DMD治療的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。 結(jié)果 目前對(duì)DMD的治療主要有基因治療、細(xì)胞治療和藥理學(xué)治療，基因治療和細(xì)胞治療通過(guò)傳遞正?；蚧蛐拚蛔兓蛞约耙浦舱＜?xì)胞，如干細(xì)胞來(lái)進(jìn)行治療；而藥理學(xué)治療主要針對(duì)dystrophin基因缺陷引起的下游事件，運(yùn)用各種藥物來(lái)減緩DMD病理進(jìn)程，從而改善患者的生活質(zhì)量，延長(zhǎng)壽命。 結(jié)論 針對(duì)DMD的各種治療手段均存在一定困難，目前尚不能有效治療此病，還需要研究探索更有效的治療途徑。
目的 探討注射心臟毒素后肌損傷的肌衛(wèi)星細(xì)胞中基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究肌肉退行性疾病的分子學(xué)發(fā)病機(jī)制和治療方法提供理論依據(jù)。 方法 取 C57 雄性小鼠12 只，于左側(cè)股四頭肌局部注射心臟毒素（5 μg/ 只），建立小鼠肌損傷模型；右側(cè)股四頭肌作為自身對(duì)照。于注射后1、4 d 及1、2、4、6 周處死小鼠，分離兩側(cè)股四頭肌，取材行HE 染色、免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR 檢測(cè)分析CXCR4 表達(dá)情況。 結(jié)果 HE 染色示肌肉組織從損傷修復(fù)到再生的全過(guò)程。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)示注射心臟毒素后1、4 d 和1、2、4、6 周，肌肉組織內(nèi)CXCR4 表達(dá)分別為1 955.6 ± 150.3、2 223.2 ± 264.3、2 317.6 ± 178.7、3 066.5 ± 269.6、1 770.9 ± 98.7 和1 505.7 ± 107.1，與正常肌肉組織（640.3 ± 124.0）比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.001）。RT-PCR 檢測(cè)顯示，正常肌肉組織、注射心臟毒素后1、4 d 和1、2、4、6 周肌肉組織內(nèi)CXCR4 mRNA 表達(dá)分別為0.349 ± 0.006、0.822 ±0.013、0.882 ± 0.025、1.025 ± 0.028、1.065 ± 0.041、0.837 ± 0.011 和0.777 ± 0.015；肌損傷后各時(shí)間點(diǎn)與正常肌肉組織比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.001）。 結(jié)論 CXCR4 可能在肌肉損傷修復(fù)過(guò)程中起重要作用。
目的 通過(guò)檢測(cè)異染色質(zhì)蛋白1α（HP1α）在DNA損傷后的磷酸化狀況，介紹一種用磷酸化標(biāo)簽(phos-tag)試劑檢測(cè)磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。 方法 取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎，分離并原代培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞。對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組(6個(gè)損傷時(shí)間點(diǎn))各取2個(gè)100 mm培養(yǎng)皿的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用喜樹堿進(jìn)行DNA損傷；對(duì)照組用等量的二甲基亞砜處理。用摻入phos-tag的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白并轉(zhuǎn)印，將膜用抗HP1α的抗體孵育，用偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶的抗體做二抗，通過(guò)成像系統(tǒng)檢測(cè)蛋白。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組存在一條與HP1α有明顯不同遷移率的磷酸化HP1α條帶，與對(duì)照組相比DNA損傷后磷酸化HP1α含量一過(guò)性增多。 結(jié)論 HP1α被DNA損傷誘導(dǎo)為磷酸化狀態(tài)，提示其可能在DNA修復(fù)過(guò)程中扮演重要角色。 Phos-tag 蛋白質(zhì)印跡法可采用普通抗體檢測(cè)磷酸化的蛋白，是一種簡(jiǎn)便易行的檢測(cè)未知磷酸化蛋白質(zhì)的新方法。
目的探討B(tài)MSCs移植治療大鼠脊髓損傷的效果及局部細(xì)胞因子的變化、作用。 方法取SD大鼠采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)BMSCs并傳代，取第5代細(xì)胞采用腺病毒rAd-EGFP進(jìn)行轉(zhuǎn)染標(biāo)記。取12只SD大鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組（n=6）。兩組大鼠采用改良Allen撞擊裝置制備T10脊髓損傷模型后，分別于脊髓損傷處注射10μL 1×106個(gè)標(biāo)記的BMSCs（實(shí)驗(yàn)組）及PBS（對(duì)照組）。術(shù)后觀察大鼠一般情況，于術(shù)后即刻及1、2、3、4、5周采用BBB評(píng)分法進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分；術(shù)后5周處死大鼠取脊髓樣本進(jìn)行HE染色及神經(jīng)巢蛋白（Nestin）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、神經(jīng)元特異性核蛋白（neuron-specific nuclear protein，NeuN）免疫熒光染色觀測(cè)，以及細(xì)胞因子抗體芯片檢測(cè)。 結(jié)果術(shù)后5周實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各2只大鼠因尿路感染死亡，其余大鼠均存活至實(shí)驗(yàn)完成。除術(shù)后即刻兩組BBB評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）外，1、2、3、4、5周實(shí)驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。術(shù)后5周，組織學(xué)觀察示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞較對(duì)照組多且排列整齊；實(shí)驗(yàn)組Nestin、NeuN表達(dá)較對(duì)照組顯著增加、GFAP表達(dá)較對(duì)照組顯著降低，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。細(xì)胞因子檢測(cè)示，兩組6個(gè)細(xì)胞因子表達(dá)存在差異；其中，實(shí)驗(yàn)組瘦素、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子高于對(duì)照組，粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞集落刺激因子、TNF-α、IL-1β與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑1低于對(duì)照組。結(jié)論BMSCs移植可促進(jìn)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞的存活與再生，并調(diào)控細(xì)胞因子影響脊髓組織功能的恢復(fù)。
目的 制備原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，并初步評(píng)價(jià)其體外生物相容性。 方法 采用醇鈉-酰氯法將丙烯酰氯與聚乙二醇反應(yīng)，制得交聯(lián)劑聚乙二醇二丙烯酸酯（polyethylene glycol acrylate，PEGDA）；采用傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振光譜儀檢測(cè)其分子結(jié)構(gòu)。取透明質(zhì)酸經(jīng)化學(xué)修飾制備巰基化透明質(zhì)酸（hyaluronic acid thiolation，HA-SH），采用Ellman法檢測(cè)其巰基含量并計(jì)算巰基化產(chǎn)率。采用PBS將HA-SH和PEGDA分別配制成一定濃度（W/V）溶液，其中HA-SH濃度為0.5%、1.0%及1.5%，PEGDA為2%、4%及6%，按照不同比例混合，獲得原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，記錄交聯(lián)反應(yīng)時(shí)間。取1.5%HA-SH、4%PEGDA制備的原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠，以浸提法檢測(cè)其細(xì)胞毒性；然后接種人BMSCs并培養(yǎng)72?h，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況，并行活/死細(xì)胞染色觀察，評(píng)價(jià)材料生物相容性。 結(jié)果 傅里葉變換紅外光譜儀分析顯示，PEGDA中大多數(shù)羥基被丙烯酸酯基取代；核磁共振光譜儀分析顯示，PEGDA在5～7 ppm出現(xiàn)3組表征丙烯酸酯基的特征峰。HA-SH的巰基化產(chǎn)率為65.4%。2%～6%PEGDA與0.5%～1.5%HA-SH經(jīng)不同比例混合后，交聯(lián)反應(yīng)在2～70?min內(nèi)完成；不同濃度及比例交聯(lián)形成的水凝膠均呈透明狀。透明質(zhì)酸水凝膠浸提液細(xì)胞毒性分級(jí)為1級(jí)，滿足生物醫(yī)用材料的要求。培養(yǎng)72 h后，BMSCs在透明質(zhì)酸水凝膠中分布均勻、生長(zhǎng)良好，活/死細(xì)胞染色顯示以綠染活細(xì)胞為主。 結(jié)論 原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠具有細(xì)胞毒性低、體外生物相容性好、交聯(lián)時(shí)間可控的優(yōu)點(diǎn)，有望成為組織工程種子細(xì)胞載體或組織缺損填充材料。