目的 觀察胰島素對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)的影響。方法 60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為檸檬酸鈉緩沖液對(duì)照組(CIT-CON)和STZ誘導(dǎo)糖尿病組(STZ-DM)，每組各30只。16周時(shí)，在 CIT-CON組中隨機(jī)抽取24只大鼠分為檸檬酸鈉緩沖液對(duì)照組（A組）和檸檬酸鈉緩沖液加胰島素作用組（B組），每組各12只，剩余6只作為陰性對(duì)照。同時(shí)，在STZ-DM組中也隨機(jī)抽取24只大鼠分為STZ誘導(dǎo)糖尿病組（C組）和STZ誘導(dǎo)糖尿病組加胰島素作用組（D組），每組也為12只，同樣剩余6只作為陰性對(duì)照。胰島素作用組皮下注射4 IU胰島素，24 h后處死各組大鼠，3只取眼球、4%多聚甲醛固定，供制備病理切片；9只取視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層，保存于液氮中。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（Rea l-time PCR）檢測(cè)視網(wǎng)膜VEGF mRNA表達(dá)，免疫組織化學(xué)、蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測(cè)VEGF蛋白表達(dá)。結(jié)果 胰島素作用于正常對(duì)照大鼠和STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠后，正常大鼠VEGF mRNA 表達(dá)為7.71plusmn;0.25，蛋白表達(dá)為0.492 5plusmn;0.012 2，分別與胰島素作用前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.32，3.97；Plt;0.05）；STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠VEGF mRNA表達(dá)為9.05plusmn;0.28，蛋白表達(dá)為0.515 2plusmn;0.010 9，分別與胰島素作用前比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.34，0.36；Pgt;0.05）。結(jié)論 胰島素作用于STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠不能顯著上調(diào)視網(wǎng)膜VEGF mRNA 和蛋白水平。
目的 觀察體外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）對(duì)牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（BREC）和周細(xì)胞（BRP）存活和形態(tài)的影響。 方法 取終濃度為50mg/ml的牛血清白蛋白（BSA）、500 mmol/L D-葡萄糖，于37℃孵箱內(nèi)避光孵育12周，制備外源性AGEs-BSA，經(jīng)Sephacryl S-300層析純化，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白電泳鑒定AGEs-BSA和coomassie 蛋白質(zhì)定量法測(cè)定蛋白濃度。分設(shè)不同濃度梯度的AGEs-BSA實(shí)驗(yàn)組和BSA對(duì)照組，以及空白對(duì)照組，分別觀察體外孵育的AGEs-BSA對(duì)體外培養(yǎng)的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置顯微鏡觀察500mu;g/ml AGEs-BSA和BSA作用48 h對(duì)BREC和BRP形態(tài)的影響。 結(jié)果 隨著AGEs-BSA劑量的增加，細(xì)胞被抑制呈上升趨勢(shì)。500mu;g/ml AGEs-BSA抑制BREC為空白對(duì)照組的（72.8plusmn;15.9）%，抑制周細(xì)胞為空白對(duì)照組的（64.8plusmn;9.0）%。低濃度AGEs-BSA對(duì)BREC有一定促增生作用，但與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.231）。相差倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示AGEs-BSA處理組細(xì)胞增殖受抑制，失去正常細(xì)胞形態(tài)，而B(niǎo)SA對(duì)照組細(xì)胞同空白對(duì)照組，細(xì)胞形態(tài)正常。 結(jié)論 AGEs-BSA在高濃度時(shí)，無(wú)論是對(duì)BREC還是BRP，都產(chǎn)生生長(zhǎng)抑制作用，從而導(dǎo)致BRP的丟失，損傷血管功能。進(jìn)一步證實(shí)了非酶糖化是糖尿病微血管并發(fā)癥的一個(gè)重要原因。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 11-15)
目的 探討牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（ bovine retinal endothelial cells, BREC ）和周細(xì)胞（bovine retinal pericytes, BRP）的體外選擇性培養(yǎng)方法。 方法 結(jié)合視網(wǎng)膜微血管的消化分離，采用含10％人血清、100 μg/ml 肝素（Heparin）的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium, DMEM)和含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基分別選擇性培養(yǎng)BREC和BRP。通過(guò)熒光顯微鏡觀察乙?；兔芏戎鞍?acetylated low density lipoprotein, Dil-Ac-LDL)吞噬情況并應(yīng)用Von Willebrand因子抗體通過(guò)免疫組織化學(xué)方法鑒定BREC；以及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體免疫組織化學(xué)鑒定BRP。 結(jié)果 通過(guò)選擇性培養(yǎng)獲得的BREC和BRP的純度達(dá)到98％以上，并能連續(xù)傳代。BREC早期似小鯉魚(yú)狀聚集在微血管碎片周圍，呈片狀鵝卵石樣單層生長(zhǎng)，存在接觸性抑制；周細(xì)胞多散布在距血管碎片稍遠(yuǎn)處，形狀不規(guī)則，呈無(wú)接觸性抑制的生長(zhǎng)。BREC可吞噬Dil-Ac-LDL，細(xì)胞漿內(nèi)有熒光表達(dá) ；消化傳代后BREC中Von Willebrand因子表達(dá)陽(yáng)性，而α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)陰性；BRP的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)陽(yáng)性，而Von Willebrand因子表達(dá)陰性。 結(jié)論 選擇性培養(yǎng)基的應(yīng)用和培養(yǎng)皿的處理，可分別獲得較高純度的BREC和BRP，簡(jiǎn)單且具有良好的重復(fù)性，無(wú)需額外步驟來(lái)去除BREC中混雜的BRP。 （中華眼底病雜志，2004，20：23-26）