目的 探討遵義市漢族Eales病與人類白細(xì)胞抗原（HLA）A/B、HLA-DRB/DQB基因多態(tài)性和結(jié)核感染的相關(guān)性。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)序列特異引物法（PCR-SSP）檢測Eales病組、肺結(jié)核組、正常對照組HLA-A/B、HLA-DRB/DQB共59個等位基因分布頻率，計算各組間優(yōu)勢比（OR）及95%可信區(qū)間（CI）；對Eales病組與肺結(jié)核組的HLA-A02基因分布頻率做相關(guān)分析。Eales病組為臨床確診的Eales病患者47例；肺結(jié)核組為痰結(jié)核菌培養(yǎng)確診肺結(jié)核并排除眼部疾病的患者36例；正常對照組為與研究組患者年齡、性別、民族等因素?zé)o差異的100名健康人。Easle病組中，資料完整的39例Eales病患者根據(jù)病史及純結(jié)核菌素試驗（PPD）檢查結(jié)果分為4組，a組為既往或現(xiàn)在患肺結(jié)核患者，12例；b組為無結(jié)核感染患者，27例；c組為PPD檢查陽性者，27例；d組為PPD陰性者，12例。結(jié)果 Eales病組HLA-A02（OR=9.719，OR95% CI為4.377～21.580，P=0.000）、HLA-B07（OR=11.605，OR95% CI為2397～56.191，P=0.001）基因分布頻率高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，HLA-A11基因分布頻率低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（OR=0.495，OR95% CI為0.245～1.000，P=0.048）。肺結(jié)核組HLA-DRB16（OR=5.215，P=0.049）、HLA-A02（OR=18.87，P=0.000）基因分布頻率高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，HLA-A24基因分布頻率低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（OR=5.690，P=0.015）。a組與b組，c組與d組比較：HLA-A02、HLA-A11、HLA-B07基因分布頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在Eales病組、肺結(jié)核組、正常對照組間，HLA-A02、HLA-A24、HLA-B07、HLA-DRB16基因總體分布頻率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，進(jìn)一步行chi;2分割法在Eales病組、肺結(jié)核組間兩兩比較，肺結(jié)核組HLA-A24基因分布頻率低于Eales病組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（chi;2=7.289，P=0.007），而HLA-A02基因分布頻率無統(tǒng)計學(xué)意義(OR=0.515，P=0.202)。Eales病組與肺結(jié)核組HLA-A02基因相關(guān)性比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（列聯(lián)系數(shù)0.412，P=0.064）。結(jié)論 Eales病可能存在遺傳易感性，HLA-A02和HLA-B07可能是遵義市漢族Eales病患者的遺傳易感基因，而HLA-A11可能是保護(hù)基因；HLA-DRB16和HLA-A02可能是遵義市漢族肺結(jié)核病的易感基因，而HLA-A24可能是保護(hù)基因。HLA-A02可能是遵義市漢族人群中Eales病和肺結(jié)核病共同的易感基因。
目的孟德爾隨機(jī)化（MR）分析血壓與增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）之間的潛在關(guān)系。方法采用全基因組關(guān)聯(lián)研究的匯總統(tǒng)計數(shù)據(jù)，進(jìn)行雙樣本MR分析。選擇收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）作為暴露；PDR作為結(jié)局。SBP、DBP的工具變量來自英國醫(yī)學(xué)研究委員會綜合流行病學(xué)單位和Neale實(shí)驗室的公開可用數(shù)據(jù)；結(jié)局?jǐn)?shù)據(jù)（病例組8 681例，對照組204 208例，歐洲人群）來自FinnGen數(shù)據(jù)庫。采用逆方差加權(quán)（IVW）、加權(quán)中位數(shù)（WM）分析SBP、DBP與PDR之間的潛在關(guān)系。結(jié)果MR分析發(fā)現(xiàn)，IVW[SBP：比值比（OR）=1.36，95%可信區(qū)間（CI）1.17～1.57，P=4.22E-05；DBP：OR=1.29，95%CI 1.11～1.51，P=8.6E-04]、WM（SBP：OR=1.33，95%CI 1.07～1.66，P=0.009；DBP：OR=1.28，95%CI=1.03～1.59，P=0.002）結(jié)果顯示，SBP、DBP升高均增加PDR的發(fā)病風(fēng)險。結(jié)論血壓變化（SBP、DBP）與PDR發(fā)生風(fēng)險呈正相關(guān)。
目的 觀察藍(lán)光照射對人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞L-型鈣通道m(xù)RNA表達(dá)的影響。方法 體外培養(yǎng)的第4代人RPE細(xì)胞按隨機(jī)數(shù)字表法分為無光照組、光照組、光照+硝苯地平組和光照+（-）BayK8644組。（2000plusmn;500）Lux藍(lán)光照射6 h，終止細(xì)胞培養(yǎng)24 h。光照前加入硝苯地平和（-）BayK8644，濃度均為1times;10-5 mmol/L。熒光定量聚合酶鏈（PCR）技術(shù)檢測各組人RPE細(xì)胞L-型鈣通道alpha;1C亞型、alpha;1D亞型和alpha;1F亞型mRNA的表達(dá)。結(jié)果 熒光定量PCR產(chǎn)物alpha;1C、alpha;1D、alpha;1F和內(nèi)參beta;-肌動蛋白的cDNA逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別為68、157、125、186堿基對，產(chǎn)物的凝膠電泳結(jié)果顯示擴(kuò)增條帶位置與以上片段相吻合。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)均高于光照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達(dá)高于光照+硝苯地平組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達(dá)與光照組和光照+硝苯地平組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組與光照組alpha;1D mRNA的表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達(dá)均高于無光照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達(dá)均高于光照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 藍(lán)光照射可引起人RPE細(xì)胞L-型鈣通道中alpha;1C、alpha;1D及alpha;1F亞型mRNA表達(dá)不同程度的增高；1times;10-5 mmol/L硝苯地平不能對抗藍(lán)光對RPE細(xì)胞L-型鈣通道作用，而1times;10-5 mmol/L（-）Bay K8644可以增加以上3個亞基的表達(dá)。
目的 觀察不同細(xì)胞密度的微囊化人內(nèi)皮抑素/293（hES/293）細(xì)胞生物學(xué)性狀及其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增生的抑制作用。方法 采用聚電解質(zhì)絡(luò)合法制作不同密度微囊化hES/293細(xì)胞，分為1×104個/ml組（A組）、1×106個/ml組（B組）、1×108個/ml組（C組）；同時將微囊內(nèi)不包裹hES/293細(xì)胞者設(shè)為對照組（D組）；每組6個樣本。培養(yǎng)后1、3、7、14、35 d，錐蟲藍(lán)染色計數(shù)微囊囊內(nèi)細(xì)胞總數(shù)、活細(xì)胞數(shù)和存活率；噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測各組微囊化hES/293細(xì)胞的生長情況；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測微囊化hES/293細(xì)胞囊外內(nèi)皮抑素（ES）蛋白釋放量。取生長狀態(tài)良好的HUVEC分別與A、B、C、D組微囊化hES/293細(xì)胞共同培養(yǎng)。于共同培養(yǎng)后24、72、120 h，MTT比色法檢測微囊化hES/293細(xì)胞對HUVEC增生的抑制作用。結(jié)果 A、B、C組微囊囊內(nèi)hES/293細(xì)胞總數(shù)和活細(xì)胞數(shù)均隨時間延長而增多，囊內(nèi)細(xì)胞存活率于培養(yǎng)后3 d最高。A、B、C組微囊化hES/293細(xì)胞生長速率比較，培養(yǎng)后1 d時組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；培養(yǎng)后3 d，A組較B、C組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；培養(yǎng)后7、14、35 d，B組較A、C組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。A、B、C組微囊化hES/293細(xì)胞囊外ES蛋白釋放量比較，培養(yǎng)后1、14 d時組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；培養(yǎng)后3 d，A組較B、C組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；培養(yǎng)后7、35 d，B組較A組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。共同培養(yǎng)后24 h，A、B、C組對HUVEC均未表現(xiàn)出抑制作用（P＞0.05）；共同培養(yǎng)后72、120 h，A、B、C組均明顯抑制HUVEC增生，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論細(xì)胞密度為1×106個/ml的微囊化hES/293細(xì)胞生長穩(wěn)定、存活率較高，可持續(xù)穩(wěn)定的釋放ES蛋白。不同密度的微囊化hES/293細(xì)胞均可抑制HUVEC增生。
目的 建立能穩(wěn)定分泌人內(nèi)皮抑素(hES)的基因工程細(xì)胞系，觀察內(nèi)皮抑素（ES）蛋白和hES的表達(dá)。方法 以hES重組質(zhì)粒pcDNA3.0（pcDNA3-Endo）為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增獲得hES基因片段，且在基因前加信號肽序列，將其定向插入真核表達(dá)載體綠色熒光蛋白（pEGFP-N1)）質(zhì)粒中，獲得重組質(zhì)粒pEGFP-N1-ES；利用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)將其轉(zhuǎn)染到人胚胎腎細(xì)胞(HeK-293)細(xì)胞中, G418 篩選后得到陽性克隆hES/293，采用蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清中ES蛋白的表達(dá)；用海澡酸鈉殼聚糖(ACA)微囊包裹hES/293細(xì)胞，分別收集培養(yǎng)3、7、21、35 d的ACA微囊化hES/293細(xì)胞的培養(yǎng)上清液，Western blot法檢測包裹后培養(yǎng)液上清中hES的表達(dá)。結(jié)果 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-ES經(jīng)限制性核對內(nèi)切酶HindⅢ和限制性核酸內(nèi)切酶BamHⅠ雙酶切得到4700堿基對(bp)和600 bp 2條帶；PCR擴(kuò)增出600 bp條帶；測序結(jié)果與NCBI上序列比對軟件（BLAST）比對，同源性達(dá)到100%。pEGFP-N1-ES轉(zhuǎn)染HeK-293細(xì)胞，經(jīng)G418 篩選后獲得陽性克隆，選取篩選的10株單克隆細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行Western blot分析，在相對分子質(zhì)量為20times;103 處出現(xiàn)蛋白條帶。在ACA微囊內(nèi)hES/293細(xì)胞隨著培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞團(tuán)逐漸長大，充滿整個囊內(nèi)空間。培養(yǎng)3、7、21、35 d時，在相對分子質(zhì)量為20times;103處出現(xiàn)蛋白條帶。結(jié)論 重組pEGFP-N1-ES真核表達(dá)載體構(gòu)建正確，轉(zhuǎn)染HeK-293細(xì)胞后可有效的表達(dá)hES蛋白，并能分泌到細(xì)胞外；微囊化hES/293細(xì)胞產(chǎn)生的ES蛋白可以自由擴(kuò)散出微囊膜外，并呈持續(xù)性表達(dá)。
目的觀察藍(lán)光照射對人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞鈣離子(Ca2+)-蛋白激酶C(PKC)信號通路的影響。 方法體外培養(yǎng)并鑒定人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞,取第4代人RPE細(xì)胞隨機(jī)分組進(jìn)行實(shí)驗。采用蛋白免疫印跡法測定培養(yǎng)細(xì)胞PKC蛋白表達(dá),檢測佛波酯(PMA)和鈣磷酸結(jié)合蛋白(calphostin C)對PKC活性的影響,確定PMA與calphostin C影響PKC活性的最適宜濃度。采用非放射性核素法測定藍(lán)光照射處理對培養(yǎng)細(xì)胞PKC活性的影響。采用20 W,波長450~500 nm醫(yī)用藍(lán)光燈作為光源,光照強(qiáng)度(2000±500) Lux,照射6 h,24 h后終止培養(yǎng),以此制造體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞光損傷。將培養(yǎng)細(xì)胞隨機(jī)分成5個組,即無光照、單純光照、光照聯(lián)合硝苯地平、光照聯(lián)合calphostin C、光照聯(lián)合PMA組。其中,無光照組不接受光照;單純光照組僅接受光照;光照聯(lián)合硝苯地平組接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照聯(lián)合calphostin C組接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照聯(lián)合PMA組接受光照和100.0 nmol/L的PMA。用乙酰氧基甲基酯Ca2+熒光探針標(biāo)記各組培養(yǎng)細(xì)胞,激光掃描共焦顯微鏡測定各組細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。比較各組細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度差異。 結(jié)果經(jīng)鑒定,體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞成功。100.0、200.0 nmol/L PMA處理的RPE細(xì)胞中PKC蛋白相對表達(dá)量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA處理的RPE細(xì)胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=217.537,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L PMA處理組間PKC蛋白相對表達(dá)量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.072)。100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細(xì)胞中PKC蛋白相對表達(dá)量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細(xì)胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=164.543,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理組間PKC蛋白相對表達(dá)量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.385)。藍(lán)光照射處理后,RPE細(xì)胞的PKC活性顯著升高,與未接受藍(lán)光照射處理的RPE細(xì)胞的PKC活性比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-9.869,P<0.05)。單純光照、光照聯(lián)合硝苯地平、光照聯(lián)合Calphostin C、光照聯(lián)合PMA組的RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度均高于無光照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=26 764.92,P<0.05);光照聯(lián)合PMA組RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度高于單純光照、光照聯(lián)合硝苯地平及光照聯(lián)合calphostin C組(P<0.05),單純光照組高于光照聯(lián)合硝苯地平和光照聯(lián)合calphostin C組(P<0.05)。 結(jié)論藍(lán)光照射后人RPE細(xì)胞內(nèi)PKC活性增高,Ca2+濃度增高。硝苯地平和calphostin C均能降低藍(lán)光照射后人RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,PMA增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。
目的長期觀察轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白（TTR）基因Gly83Arg突變致一家系玻璃體淀粉樣變性玻璃體切割手術(shù)繼發(fā)性青光眼的發(fā)生情況，探索其可能原因。方法回顧性病例研究。2008年1月至2020年1月于遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院眼科確診為TTR基因Gly83Arg突變致家族性玻璃體淀粉樣變性的一家系13例23只眼納入研究。其中，男性7例12只眼，女性6例11只眼；平均年齡（43.0±4.8）歲。患眼均行經(jīng)睫狀體平坦部標(biāo)準(zhǔn)三通道玻璃體切割手術(shù)。根據(jù)手術(shù)中是否形成完全玻璃體后脫離（PVD）分為完全PVD組和非完全PVD組；根據(jù)手術(shù)后繼發(fā)性青光眼發(fā)生及玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)時間分為1～12個月組、13～36個月組，＞37個月組。手術(shù)后平均隨訪時間（36.7±6.0）個月。組間繼發(fā)性青光眼發(fā)生率及玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)率比較采用χ2檢驗；手術(shù)后玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)和繼發(fā)性青光眼相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。結(jié)果23只眼中，完全PVD組、非完全PVD組分別為8、15只眼。手術(shù)后玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)15只眼（65.22%，15/23）。非完全PVD組、完全PVD組分別為14（93.30%，14/15）、1（6.70%，1/15）只眼；兩組玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.676，P＜0.01）。1～12個月組、13～36個月組、＞37個月組分別為1（4.35%，1/23）、12（52.17%，12/23）、2（8.70%，2/23）只眼。13～36個月組復(fù)發(fā)率顯著高于1～12個月組、＞37個月組。手術(shù)后發(fā)生繼發(fā)性青光眼11只眼（47.80%，11/23）。1～12個月組、13～36個月組、＞37個月組分別為1（4.35%，1/23）、8（34.78%，8/23）、2（8.70%，2/23）只眼。13～36個月組繼發(fā)性青光眼發(fā)生率高于1～12個月組、＞37個月組。繼發(fā)性青光眼11只眼中，手術(shù)后玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)眼10只，非復(fù)發(fā)眼1只。Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)與繼發(fā)性青光眼發(fā)生之間呈正相關(guān)（rs=0.516，P=0.012）。結(jié)論TTR基因Gly83Arg突變所致的玻璃體淀粉樣變性一家系玻璃體切割手術(shù)后繼發(fā)性青光眼發(fā)生率較高，其發(fā)生與玻璃體淀粉樣變性復(fù)發(fā)呈明顯正相關(guān)。