目的 探討一種快速、簡便、經(jīng)濟(jì)的骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis，OP）體外模型制備方法。 方法 18個月健康雌性山羊80只，取雙側(cè)新鮮股骨80對，根據(jù)脫鈣時間不同，隨機(jī)分為4組，每組20對：對照組（A組）、1～5 d組（B組）、6～10 d組（C組）和11～15 d組（D組）。B、C、D組股骨標(biāo)本用18%EDTA脫鈣液浸泡，A組不作處理。每組于對應(yīng)浸泡時間段內(nèi)每天取4對股骨，采用定量CT對股骨內(nèi)、外側(cè)髁進(jìn)行掃描并計算骨密度（bone mineral density，BMD）；采用電子萬能試驗機(jī)進(jìn)行三點彎曲試驗和拉伸、壓縮極限強(qiáng)度試驗，測量相應(yīng)力學(xué)參數(shù)。 結(jié)果 隨脫鈣時間延長，A、B、C、D組股骨內(nèi)、外側(cè)髁BMD均呈下降趨勢，組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；各組股骨外側(cè)髁BMD均顯著高于股骨內(nèi)側(cè)髁，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。三點彎曲試驗顯示，A、B組破壞荷載、極限強(qiáng)度及彈性模量均顯著高于C、D組（P lt; 0.05）；A、B組間及C、D組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。壓縮和拉伸極限強(qiáng)度試驗顯示，A組壓縮和拉伸極限強(qiáng)度顯著高于C、D組（P lt; 0.05），與B組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；B組兩指標(biāo)顯著高于D組（P lt; 0.05），與C組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；C、D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 以18% EDTA浸泡山羊股骨6～15 d是一種快速、簡便、經(jīng)濟(jì)的OP體外模型制備方法。
目的體外評估PKH26標(biāo)記對山羊髓核細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，并結(jié)合活體熒光成像系統(tǒng)評價種子細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)行為。 方法取1歲齡山羊椎間盤分離髓核組織，通過酶消化法獲取原代細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察，傳代獲取第1代髓核細(xì)胞，行PKH26熒光標(biāo)記，熒光顯微鏡下觀察標(biāo)記后的細(xì)胞熒光強(qiáng)度，并行甲苯胺藍(lán)和Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察，錐蟲藍(lán)染色比較標(biāo)記前后細(xì)胞活性，MTT法檢測標(biāo)記前后細(xì)胞增殖特性，實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型膠原及蛋白聚糖基因表達(dá)。將標(biāo)記后的髓核細(xì)胞接種至一體化纖維化-髓核支架的髓核部分，纖維環(huán)部分作為陰性對照，體外培養(yǎng)3 d后植入5只6周齡雄性裸鼠體內(nèi)，培養(yǎng)6周后活體成像技術(shù)檢測髓核細(xì)胞-支架復(fù)合物在體內(nèi)的熒光強(qiáng)度及范圍。結(jié)果 倒置相差顯微鏡觀察示原代髓核細(xì)胞簇狀生長，呈卵圓形，第1代髓核細(xì)胞呈類軟骨樣細(xì)胞形態(tài)；標(biāo)記后的第1代髓核細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色和Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽性；標(biāo)記后熒光強(qiáng)度均勻，標(biāo)記前后細(xì)胞活性均在95%以上；標(biāo)記前后細(xì)胞生長曲線比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；實時熒光定量PCR檢測示標(biāo)記前后細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ型膠原和蛋白聚糖基因相對表達(dá)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）?；铙w成像技術(shù)顯示體內(nèi)髓核支架有強(qiáng)烈熒光，纖維環(huán)支架未見熒光。結(jié)論 PKH26標(biāo)記對髓核細(xì)胞的活性、增殖及細(xì)胞表型的表達(dá)無明顯影響，結(jié)合體內(nèi)活體熒光成像系統(tǒng)可以追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的生物學(xué)行為。
目的 探討靜水壓聯(lián)合IGF-1對體外單層培養(yǎng)的山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞絲狀肌動蛋白（filamentous actin，F(xiàn)-actin）的影響，分析靜水壓、IGF-1與F-actin的關(guān)系變化對細(xì)胞生物學(xué)行為改變的影響。 方法取4只1月齡山羊雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)盤，采用酶消化法分離培養(yǎng)顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞，以Ⅰ、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色鑒定。取第2、3代細(xì)胞根據(jù)干預(yù)方法不同分為4組：A組以完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，作為對照；B組以強(qiáng)度0.2 MPa、頻率1 Hz的靜水壓作用3 h；C組以含10 ng/mL IGF-1的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；D組采用靜水壓與IGF-1聯(lián)合培養(yǎng)，方法同B、C組。于干預(yù)后24、72 h行免疫熒光染色觀察F-actin變化，測定單個細(xì)胞熒光強(qiáng)度。 結(jié)果經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察及免疫組織化學(xué)染色鑒定，所培養(yǎng)細(xì)胞為顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞。干預(yù)24 h時A、C組細(xì)胞熒光染色強(qiáng)，保持了細(xì)胞正常形態(tài)，且分布清晰；B組F-actin排列紊亂；D組F-actin變細(xì)，排列混亂。72 h時A、C組F-actin排列整齊；B組F-actin排列紊亂、模糊不清，部分F-actin斷裂，形成偽足；D組F-actin變細(xì)，排列紊亂、斷裂。隨時間延長，A、B、D組熒光強(qiáng)度均呈增強(qiáng)趨勢，兩時間點間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；C組兩時間點間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.284，P=0.781）。干預(yù)24 h，C組熒光強(qiáng)度最高，B組最低，與A、D組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。72 h時，B、D組熒光強(qiáng)度顯著低于A、C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；B、D組間及A、C組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論靜水壓可以引起山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細(xì)胞F-actin發(fā)生斷裂及重排，IGF-1上調(diào)F-actin的表達(dá)；靜水壓聯(lián)合IGF-1誘導(dǎo)產(chǎn)生的F-actin斷裂、重排可能引起細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。
目的評價使用新型氨基酸聚合物（multi-amino-acid copolymer，MAACP）復(fù)合納米羥基磷灰石（nano-hydroxyapatite，n-HA）人工椎板在山羊頸椎椎板切除術(shù)后阻隔硬膜外瘢痕粘連、壓迫的應(yīng)用價值。 方法2歲齡雄性山羊15只，體重（30 ± 2）kg，隨機(jī)分為實驗組（n=9）和對照組（n=6）。實驗組行C4椎板切除，MAACP/n-HA人工椎板植入；對照組僅行C4椎板切除。術(shù)后4、12、24周分別取實驗組2、2、5只，對照組2、2、2只山羊，行大體觀察傷口感染、人工椎板有無移位碎裂、椎管形狀等，并根據(jù)大體觀察Rydell瘢痕粘連程度評級標(biāo)準(zhǔn)評價兩組手術(shù)節(jié)段粘連程度；行X線片、CT影像學(xué)觀察，24周時測量C3、C4、C5椎管面積及椎管矢狀徑，以正常山羊（n=2）作為正常組；24周MRI觀察脊髓神經(jīng)是否受壓；然后處死取材，行組織學(xué)觀察。 結(jié)果術(shù)后所有動物切口愈合良好，未見毒性及免疫排斥反應(yīng)。術(shù)后實驗組手術(shù)節(jié)段粘連程度明顯優(yōu)于對照組（Z= —2.52，P=0.00）。術(shù)后各時間點X線片及CT觀察示實驗組人工椎板位置無移位，外形完整，骨性椎管逐漸得到重建；對照組C4椎板及棘突缺損，軟組織影突入椎管。術(shù)后24周，C4椎管面積和椎管矢狀徑實驗組和正常組均顯著高于對照組（P lt; 0.05），實驗組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。實驗組MRI示C4平面腦脊液信號通暢，無軟組織突入椎管，硬膜無粘連受壓；對照組椎板缺損處瘢痕組織突入椎管與硬膜粘連， 硬膜輕度受壓。組織切片HE染色及Masson三色染色示實驗組人工椎板完整無明顯降解，人工椎板與自體骨結(jié)合界面周圍少量成骨；對照組椎板缺損處纖維組織長入。 結(jié)論新型MAACP/n-HA人工椎板可在體內(nèi)長久維持生物力學(xué)穩(wěn)定，對周圍瘢痕向椎板缺損處生長有良好機(jī)械阻隔作用。
目的 探討采用毒藜堿肌肉注射形成先天性腭裂山羊模型的方法以及先天性腭裂畸形對山羊面中部發(fā)育的影響。 方法 取40 只8 ～ 12 月齡雜交波爾雌性山羊，體重35 ～ 55 kg，以配種日期定為孕0 d，于孕30 d 經(jīng)B超確認(rèn)懷孕后隨機(jī)將實驗動物分為4 組。取30 只實驗動物按照注射劑量分為實驗組1、實驗組2、實驗組3（n=10），分別于孕31 ～ 42 d 肌肉注射毒藜堿10、15、20 mg/d；余10 只作為對照組不作處理。每組于孕120 d 及出生后1 個月，各取5 只胎羊或小羊行頭顱三維CT 重建，測量上頜最前磨牙前方的兩側(cè)凹陷處間距（PPMM），及以此線為基準(zhǔn)測量上頜骨最前點至此線的垂直距離（APMM）；完成三維CT 重建后行硬腭大體觀察，并制備干顱行上頜骨前后向及寬度發(fā)育情況觀察。 結(jié)果 實驗組3 母羊注射藥物后全部流產(chǎn)；實驗組2 母羊注射藥物后2 只流產(chǎn)，余8 只維持妊娠。孕120 d 取材時，實驗組1 取出5 只胎羊，均無腭裂；實驗組2 取出5 只胎羊，其中3 只腭裂，上頜發(fā)育不足；對照組取出5 只胎羊，均無腭裂。出生后1 個月，實驗組1 有11 只小羊娩出，均無腭裂；實驗組2 有7 只小羊娩出，其中5 只腭裂，上頜骨明顯發(fā)育不足，飼養(yǎng)及進(jìn)食困難；對照組有8 只小羊娩出，均無腭裂。硬腭及干顱大體觀察見實驗組2 上頜骨明顯發(fā)育不足。實驗組2 的孕120 d 胎羊及出生后1 個月小羊PPMM 及APMM 與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。實驗組2 的5 只腭裂小羊存活1 ～ 2 個月。 結(jié)論 采用孕31 ～ 42 d 肌肉注射毒藜堿15 mg/d，可以制備先天性山羊腭裂模型，形成的腭裂山羊面型特征基本符合人類腭裂畸形面中部發(fā)育特征。
目的 通過建立山羊全顳下頜關(guān)節(jié)置換模型，探討采用人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體進(jìn)行關(guān)節(jié)置換的穩(wěn)定性及可行性。 方法 取健康成年山羊6 只，雌雄各半，體重35.3 ～ 37.0 kg。根據(jù)山羊顳下頜關(guān)節(jié)正側(cè)位X 線片測量所得參數(shù)，結(jié)合同種山羊頭骨形狀制備人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體；隨機(jī)取山羊一側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)進(jìn)行全關(guān)節(jié)置換，作為實驗組（n=6）；并根據(jù)假體放置部位不同（關(guān)節(jié)窩及髁突）進(jìn)行觀察。另一側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)植入鈦板，作為對照組（n=6）。術(shù)后觀察實驗動物一般情況，并于4、8、12 周取材行大體、組織學(xué)及掃描電鏡觀察釘- 骨界面結(jié)構(gòu)變化；并行剪切力及ALP 活性檢測，觀察釘- 骨界面的結(jié)合程度及成骨細(xì)胞活性。 結(jié)果 實驗動物均存活至實驗完成，開口度正常，咀嚼功能恢復(fù)良好，能夠正常進(jìn)食。術(shù)后4、8、12 周，實驗組假體與對照組鈦板均固位良好，固位鈦釘無松動脫落。組織學(xué)及掃描電鏡觀察提示隨著時間延長兩組釘- 骨界面成骨細(xì)胞逐漸增多。除術(shù)后4 周實驗組關(guān)節(jié)窩部位固位鈦釘剪切力及ALP 活性與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）外；其余各時間點組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 采用人工全顳下頜關(guān)節(jié)假體對山羊行關(guān)節(jié)置換后能獲得較好的穩(wěn)定性。
目的 目前對脊柱側(cè)凸伴發(fā)的脊柱前凸研究較少。通過觀察鎳鈦記憶合金加壓釘（Staple 釘）所致的脊柱前凸骨骺組織學(xué)變化，探討Staple 釘對胸椎前凸生長的影響。 方法 2 ～ 3 月齡雌性山羊18 只，體重8 ～ 12 kg，隨機(jī)分為長釘組、短釘組、空白對照組，每組6 只。長釘組和短釘組分別于山羊T6 ～ 11 節(jié)段植入Staple 長釘（7 mm 齒深）、Staple 短釘（4 mm 齒深），空白對照組不進(jìn)行干預(yù)。術(shù)前及術(shù)后3 個月行X 線片觀察Cobb 角變化，然后處死山羊取脊柱頂椎生長板和下關(guān)節(jié)突組織進(jìn)行HE 染色觀察骨骺軟骨細(xì)胞，并行免疫組織化學(xué)聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-p85 片段和細(xì)胞核增殖抗原雙重染色法對軟骨細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，并計算各組軟骨細(xì)胞增殖活躍度。 結(jié)果 術(shù)后3 個月，長釘組和短釘組Cobb 角均顯著高于術(shù)前，且顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；長釘組及短釘組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。HE 染色和免疫組織化學(xué)雙重染色顯示：與空白對照組相比，長釘組和短釘組生長板及下關(guān)節(jié)突軟骨骨骺的增殖層和肥大層的軟骨細(xì)胞數(shù)均明顯減少，軟骨細(xì)胞柱狀排列更不規(guī)則，細(xì)胞外基質(zhì)所占體積比增高；長釘組的這種趨勢較短釘組更為明顯。長釘組和短釘組HE 染色組織學(xué)分級與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），長釘組與短釘組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。長釘組和短釘組椎體生長板及下關(guān)節(jié)突軟骨增殖活躍度與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），長釘組和短釘組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 Staple 釘通過影響山羊胸椎的遠(yuǎn)端生長板及其下關(guān)節(jié)突的骨骺軟骨細(xì)胞增殖活躍度，從而影響骨生長，導(dǎo)致脊柱后凸增加。
目的 探討孕晚期行宮內(nèi)手術(shù)修補(bǔ)胎羊腹壁缺損的可行性。 方法 取8 只孕110 ～ 115 d 的健康山羊，體重14 ～ 22 kg，隨機(jī)分為兩組，分別為可吸收縫線組（A 組，3 只）及生物型補(bǔ)片組（B 組，5 只）。兩組首先切除胎羊全層腹壁分別制備大小約5 cm × 1 cm 及5 cm × 2 cm 的腹壁缺損模型后，分別采用可吸收縫線縫合及兩層生物型補(bǔ)片修補(bǔ)腹壁缺損。觀察術(shù)后母羊及出生后小羊一般情況；于出生后第10 天處死小羊觀察腹腔內(nèi)粘連情況，并取切口瘢痕組織行生物力學(xué)測定和組織學(xué)觀察。 結(jié)果 術(shù)后共3 只母羊流產(chǎn)，其中A 組1 只，B 組2 只；其余母羊均順利娩出小羊。A組小羊腹壁切口愈合好，瘢痕呈線形，腹腔內(nèi)粘連輕；瘢痕厚度為4 ～ 5 mm。B 組小羊腹壁切口均未完全愈合，腹腔內(nèi)粘連輕；瘢痕厚度為3 ～ 4 mm。生物力學(xué)測定A 組瘢痕組織皮條斷裂力為16 、20 N，B 組為10、14、18 N。組織學(xué)觀察示，A 組瘢痕組織范圍??；B 組見皮膚潰瘍面和其下的纖維結(jié)締組織，伴炎性細(xì)胞浸潤。 結(jié)論 孕晚期行宮內(nèi)手術(shù)修補(bǔ)胎羊腹壁缺損可行；對于腹壁缺損較小者可直接縫合修補(bǔ)，缺損較大者可采用生物型補(bǔ)片修補(bǔ)。
目的 研究脫細(xì)胞血管基質(zhì)快速高效的制備方法并對其進(jìn)行生物相容性評價，為組織工程血管的研究尋找合適的支架材料。 方法 取20 根長50 mm 新鮮山羊頸動脈經(jīng)—80℃冷凍、37℃水浴復(fù)溫，反復(fù)凍融3 次，在506 MPa、4℃條件下超高壓處理20 min，0.125%SDS 中37℃振搖（100 r/min）12 h，徹底去除細(xì)胞后，行HE 染色、Masson染色、掃描電鏡觀察及生物力學(xué)測定研究其組織結(jié)構(gòu)的變化；Hoechst33258 熒光染色和細(xì)胞DNA 殘留量分析評價脫細(xì)胞效果；通過接觸細(xì)胞毒性實驗、MTT 活性測試及皮下埋植實驗對制備的脫細(xì)胞血管基質(zhì)進(jìn)行生物相容性分析。皮下埋植實驗取清潔級SD 大鼠10 只，體重200 ～ 230 g，分為2 組（n=5），實驗組于大鼠背部皮下埋植結(jié)合物理化學(xué)方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì)，對照組埋植單純物理方法處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì)，分別于術(shù)后1、2、3、4、8 周取出行HE 染色觀察。 結(jié) 果 HE 染色及Masson 染色顯示脫細(xì)胞血管基質(zhì)無細(xì)胞成分殘留，保持較完整的膠原成分；掃描電鏡觀察血管表面以膠原為主，適合細(xì)胞黏附；Hoechst33258 熒光染色脫細(xì)胞血管基質(zhì)材料未見明顯陽性核染色；苯酚- 氯仿提取脫細(xì)胞血管基質(zhì)殘留DNA 含量，電泳檢測分析顯示其中DNA 含量較正常血管顯著降低；生物力學(xué)檢測示脫細(xì)胞血管基質(zhì)最大荷載時的應(yīng)力及應(yīng)變與正常血管比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，保持了正常血管的力學(xué)特征；接觸細(xì)胞毒性實驗與MTT 法測定示脫細(xì)胞血管基質(zhì)與細(xì)胞有良好的黏附性，細(xì)胞毒性為0 ～ 1 級；實驗組皮下埋植術(shù)后8 周材料周圍基本未見炎性細(xì)胞，對照組仍有明顯淋巴細(xì)胞浸潤。 結(jié)論 經(jīng)反復(fù)凍融、超高壓及小劑量SDS 處理的脫細(xì)胞血管基質(zhì)是一種構(gòu)建組織工程血管的理想支架材料。
目的 以雜交波爾山羊為實驗對象，進(jìn)行宮內(nèi)手術(shù)制備先天性腭裂動物模型，為研究先天性腭裂畸形對面中部發(fā)育的影響及早期宮內(nèi)修復(fù)提供適合的動物模型。 方法 取20 只8 ～ 12 月齡雌性雜交波爾山羊，體重35 ～ 55 kg，以配種日期定為孕0 d，于孕30 d 經(jīng)B 超確認(rèn)懷孕后隨機(jī)分為兩組。實驗組14 只于孕65 d 行宮內(nèi)手術(shù)，形成胎羊口鼻腔穿通腭裂；對照組6 只不作處理，作為正常對照。于孕120 d 及出生后1、3 個月，行大體觀察以及頭顱CT 三維重建，測量上頜最前磨牙前方的兩側(cè)凹陷處間距（PPMM），并以此線為基準(zhǔn)測量上頜骨最前點至此線的垂直距離（APMM）。 結(jié)果 術(shù)后實驗組山羊因并發(fā)癥死亡2 只，流產(chǎn)3 只，最終造模成功9 只；手術(shù)成功率為64.3%。除孕120 d 取出胎羊外，兩組均順利產(chǎn)下小羊。實驗組在孕120 d 時即出現(xiàn)上頜發(fā)育不足，出生后1、3 個月更明顯不足；對照組上頜骨發(fā)育正常。兩組各時間點PPMM及APMM比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。實驗組6 只小羊存活1 ～ 4 個月；均因小羊咀嚼功能差，不能正常吮吸母乳，常發(fā)生誤吸，導(dǎo)致肺部感染死亡。 結(jié)論 采用宮內(nèi)手術(shù)方法切除部分次生腭中線處組織造成口鼻腔穿通，可制備先天性腭裂山羊模型。