目的 研究支氣管哮喘豚鼠α防御素（RNP）的表達(dá)及P2Y2受體對(duì)其的影響。方法 72只成年雄性豚鼠隨機(jī)分為正常組（A組）和哮喘組（B組），以腹腔內(nèi)注射聯(lián)合霧化吸入卵白蛋白（OVA）復(fù)制哮喘模型。將A組及B組分為生理鹽水組（A1/B1組）、ATP干預(yù)組（A2/B2組）、蘇拉明干預(yù)組（A3/B3組），分別對(duì)豚鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水、ATP及蘇拉明。檢測(cè)豚鼠氣道外周阻力（RL）、肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞總數(shù)及對(duì)中性粒細(xì)胞（PMN）計(jì)數(shù)；HE染色顯示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況；ELISA法檢測(cè)血漿RNP和白細(xì)胞介素8（IL-8）表達(dá)含量；免疫組化和RT-PCR方法檢測(cè)肺組織中RNP蛋白和mRNA以及P2Y2 mRNA水平的表達(dá)情況。結(jié)果 哮喘組及其干預(yù)組豚鼠RL上升幅度較A組及其干預(yù)組增加10%（Plt;0.05）。HE染色證實(shí)哮喘組豚鼠支氣管管腔變窄，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。B1組BALF中細(xì)胞總數(shù)及PMN計(jì)數(shù)高于A1組和B3組，低于B2組（Plt;0.05）；A組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B1組血漿和肺組織中RNP表達(dá)較A1組和B3組增高，較B2組表達(dá)減低（Plt;0.05）；A1組較A2組表達(dá)減低，與A3組比較增高（Plt;0.05）。B1組血漿中IL-8表達(dá)較A1組和B3組增高，較B2組減低（Plt;0.05）；A組及其干預(yù)組比較，無明顯差別（Pgt;0.05）。RNP主要表達(dá)于細(xì)支氣管中，尤其PMN浸潤(rùn)部位。RNP mRNA表達(dá)結(jié)果與肺組織中RNP表達(dá)趨勢(shì)一致。A1組P2Y2 mRNA較A2組表達(dá)降低，與A3組比較增高（Plt;0.05）；B1組P2Y2 mRNA表達(dá)較B2組降低，與B3組比較增高（Plt;0.05）。直線相關(guān)分析顯示A組及其干預(yù)組RNP與PMN、IL-8無明顯相關(guān)性，RNP與P2Y2 mRNA呈正相關(guān)；B組及其干預(yù)組RNP與PMN、IL-8、P2Y2 mRNA呈正相關(guān)。結(jié)論 α防御素在支氣管哮喘豚鼠中表達(dá)增高；豚鼠α防御素表達(dá)可能與P2Y2受體有關(guān)。
目的 研究KLF2是否通過調(diào)控S1P1～S1P5影響類中性粒細(xì)胞遷移。方法 構(gòu)建攜帶有siRNA的慢病毒載體，特異性沉默KLF2基因，利用細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)類中性粒細(xì)胞遷移情況，利用蛋白印跡法、實(shí)時(shí)PCR分別檢測(cè)KLF2、S1P1～S1P5蛋白和mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 ① KLF2病毒干擾組較空白組、空載病毒組，遷移率明顯減少（P<0.05），S1P從0 μmol/L至0.1 μmol/L，隨著濃度的增加，各組類中性粒細(xì)胞遷移率都明顯增加（P<0.05），S1P從0.1 μmol/L至0.4 μmol/L ，隨著濃度的增加，各組類中性粒細(xì)胞遷移率基本相同（P>0.05）；② KLF2病毒干擾組與空白組、空載病毒組比較，S1P1蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量減少（P<0.05）；③ KLF2病毒干擾組與空白組、空載病毒組比較，S1P2 、S1P3、S1P4、S1P5 mRNA表達(dá)量無差異（P>0.05）。結(jié)論 S1P對(duì)類中性粒細(xì)胞遷移的最佳濃度為0.1 μmol/L； KLF2通過正調(diào)控S1P1表達(dá)，促進(jìn)類中性粒細(xì)胞遷移； 在類中性粒細(xì)胞中KLF2不調(diào)控S1P2～S1P5表達(dá)。
目的 探討哮喘患者γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶( γ-GCS)、還原型谷胱甘肽(GSH)的活性變化。方法 選取哮喘急性發(fā)作期患者10例，按哮喘防治指南常規(guī)分級(jí)治療6周，比較哮喘患者治療前后誘導(dǎo)痰中γ-GCS、GSH、丙二醛(MDA)及血清中GSH、MDA和活性氧(ROS)的變化，同時(shí)進(jìn)行肺功能檢測(cè)和哮喘癥狀評(píng)分。選取10例健康志愿者作為正常對(duì)照。結(jié)果 哮喘患者治療前血清及誘導(dǎo)痰中GSH低于對(duì)照組(Plt;0.01)、MDA高于對(duì)照組(Plt;0.01)，誘導(dǎo)痰中γ-GCS高于對(duì)照組(Plt;0.01)。治療6周后，哮喘患者血清及誘導(dǎo)痰中GSH均較治療前增高(P均lt;0.01)，但仍低于對(duì)照組(Plt;0.05)；血清及誘導(dǎo)痰中MDA、誘導(dǎo)痰中γ-GCS均較治療前下降(P均lt;0.01)，但仍高于對(duì)照組(Plt;0.05)。哮喘患者血清中GSH水平與哮喘癥狀評(píng)分、MDA、ROS水平呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.701、-0.901和-0.878，P值分別lt;0.05、lt;0.01和lt;0.01)，與FEV1 ％pred呈正相關(guān)(r：0.854，Plt;0.01)。哮喘患者誘導(dǎo)痰中γ-GCS活性與哮喘癥狀記分、MDA濃度呈正相關(guān)(r值分別為0.804和0.926，P值分別lt;0.05和lt;0.01)。結(jié)論 γ-GCS、GSH參與哮喘患者的氧化／抗氧化反應(yīng)。
目的明確支氣管哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞內(nèi)是否存在 KLF2/RelA 比例失衡，并探討 KLF2/RelA 比例失衡與中性粒細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法收集 2011 年 4 月至 2012 年 4 月在湖南省人民醫(yī)院及長(zhǎng)沙市第三人民醫(yī)院住院的 39 例哮喘急性發(fā)作期患者，其中輕度哮喘組 13 例，中度哮喘組 17 例，重度哮喘組 9 例；另收集 15 例健康人為對(duì)照組。抽取受試者外周靜脈血，分離純化中性粒細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)中性粒細(xì)胞凋亡率，Western blot 檢測(cè) KLF2 和 RelA 在中性粒細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。采用 Pearson 相關(guān)檢驗(yàn)分析 KLF2/RelA 比值與中性粒細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。結(jié)果輕、中、重度哮喘組中性粒細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組降低［（4.45±0.76）%、（2.10±0.25）%、（1.81±0.67）% 比（5.36±0.57）%，均 P<0.01］，中、重度哮喘組中性粒細(xì)胞凋亡率較輕度哮喘組降低（P<0.01），但中度哮喘組與重度哮喘組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。輕、中、重度哮喘組中性粒細(xì)胞內(nèi) KLF2/RelA 比值較對(duì)照組顯著降低（0.667±0.351、0.384±0.203、0.536±0.293 比 4.038±2.011，均P<0.01），輕、中、重度哮喘組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。中性粒細(xì)胞凋亡率與 KLF2/RelA 比值呈正相關(guān)（r=0.592 0，P<0.000 1）。結(jié)論哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞內(nèi)存在 KLF2/RelA 比例失衡，并且 KLF2/RelA 比例失衡可能是導(dǎo)致哮喘患者外周血中性粒細(xì)胞凋亡減少的機(jī)制。
目的 探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α( PGC-1α) 和紅系衍生的核因子相關(guān)因子2( Nrf2) 對(duì)γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 表達(dá)的調(diào)控及其在COPD中的作用和意義。方法 24 只大鼠隨機(jī)分為COPD 組和對(duì)照組。COPD 組用每日熏香煙和兩次氣管內(nèi)滴入脂多糖( LPS) 的方法制作COPD 模型。觀察大鼠的肺組織病理學(xué)改變, 檢測(cè)肺功能指標(biāo); 應(yīng)用免疫組化、Western blot、原位雜交和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)肺組織中PGC-1α、Nrf2 和γ-GCS 的蛋白及mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 COPD 組的肺功能指標(biāo)( FEV0. 3、FEV0. 3 /FVC、PEF) 和光鏡下COPD 組肺組織病理變化符合COPD 的特征性改變。PGC-1α、Nrf2 mRNA 在兩組大鼠肺組織中均有表達(dá), 且與γ-GCS mRNA 的表達(dá)部位基本一致; PGC-1α、γ-GCS 蛋白及mRNA 表達(dá)在COPD 組均顯著高于對(duì)照組( P 均lt;0. 05) ; Nrf2 蛋白表達(dá)在COPD 組較對(duì)照組顯著增高( P lt;0. 01) , 而Nrf2 mRNA 在兩組表達(dá)無明顯差異( P lt;0. 05) 。相關(guān)性分析顯示PGC-1α蛋白與Nrf2 蛋白及mRNA 表達(dá)均呈正相關(guān)( r 值分別為0. 775 和0. 515, P 均lt; 0. 01) , PGC-1α、Nrf2 蛋白與γ-GCS 蛋白( r 值分別為0. 531 和0. 575,P 均lt;0. 01) 及mRNA 表達(dá)( r 值分別為0. 616 和0. 634, P lt; 均0. 01) 均呈正相關(guān)。結(jié)論 PGC-1α可能作為Nrf2 的輔激活因子, 通過輔助激活Nrf2, 上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá); PGC-1α和Nrf2 可能通過一個(gè)共同通路協(xié)同上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá), 從而改善COPD 的氧化/ 抗氧化失衡。
目的 探討大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓( HPH) 形成過程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內(nèi)表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及在HPH 發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機(jī)分為常氧對(duì)照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復(fù)制HPH大鼠模型。檢測(cè)各組大鼠的平均肺動(dòng)脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數(shù)( RVHI) 、血管形態(tài)學(xué)指標(biāo)[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測(cè)肺內(nèi)SUMO-1 mRNA 表達(dá), 免疫組化、Western blot 檢測(cè)其蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動(dòng)脈開始出現(xiàn)明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時(shí)WA% 和mPAP 顯著高于對(duì)照組; 低氧14 d 時(shí)WA% 、mPAP 較7 d 時(shí)進(jìn)一步增加, RVHI顯著高于對(duì)照組; 低氧21 d 時(shí)WA% 、RVHI 較14 d 時(shí)進(jìn)一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對(duì)照組肺小動(dòng)脈壁呈弱陽性表達(dá); 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達(dá)高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達(dá)減弱但仍然高于對(duì)照組, 蛋白表達(dá)繼續(xù)保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達(dá)與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關(guān)( P 均lt;0. 01) 。結(jié)論 慢性低氧誘導(dǎo)肺內(nèi)SUMO-1 表達(dá)增加在HPH 的發(fā)病過程中發(fā)揮一定的作用。