汶川地震醫(yī)療救援中，四川大學(xué)華西第二醫(yī)院科學(xué)指揮，迅速確定在此次地震醫(yī)療救援中的定位，確立并提出“保證院內(nèi)病人安全，配合華西醫(yī)院主戰(zhàn)場，集合主力資源主動奔赴災(zāi)區(qū)救援”的總方針。醫(yī)院管理模式迅速從常態(tài)進入雙軌制應(yīng)急狀態(tài)，科學(xué)合理配置和調(diào)動資源，保證抗震救災(zāi)高效、有力地進行。截至6 月2 日，醫(yī)院先后派出12批醫(yī)療隊、共148人赴北川、什邡、都江堰等重災(zāi)區(qū)參與現(xiàn)場救治；共接診地震傷員329例，其中住院132例，無一例傷病員死亡。
在兒童過敏性哮喘治療方法中，特異性免疫治療是目前唯一針對支氣管哮喘的對因治療，舌下特異性免疫療法（sublingual immunotherapy，SLIT）是近年來提倡的針對過敏性哮喘的新療法，與傳統(tǒng)的皮下特異性免疫療法相比，SLIT 對兒童過敏性哮喘患者具有更高的安全性且易于管理，SLIT 日益受到關(guān)注，并引發(fā)了大量的研究。SLIT 的作用機制雖已有一些研究，但尚不十分明確，大多數(shù)的研究是以臨床研究為主。近年來，大量國內(nèi)外研究表明，SLIT 對兒童過敏性哮喘治療安全、有效，無嚴(yán)重不良事件發(fā)生，且可以減少過敏的發(fā)生頻率。但 SLIT 臨床應(yīng)用中仍有很多問題需進一步研究解決，如其確切的作用機制、準(zhǔn)確的劑量、是否應(yīng)該減少 SLIT 藥物的用量以及可否用來進行預(yù)防等。該文就其研究進展進行了綜述。
目的 探討在體神經(jīng)元缺氧缺血條件下缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）蛋白的表達及三磷酸肌醇激酶（phosphoinositid 3-kinase/Akt，PI3K/Akt）信號通路的激活，推測PI3K/Akt 信號通路與神經(jīng)元HIF-1α 表達調(diào)節(jié)的關(guān)系，以期更確切地闡明PI3K/Akt 在發(fā)育期腦缺氧缺血性損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）神經(jīng)元HIF-1α 表達中的作用。 方法 10 d 齡SD 大鼠56 只，分為正常對照組（n=12）、假手術(shù)組（n=12）、實驗組（n=24）、wortmannin 干預(yù)組（n=4）和溶劑干預(yù)組（n=4）。實驗組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎，氮氧混合氣（92% N2、8% O2）缺氧2.5 h，即為HIBD 模型；假手術(shù)組不結(jié)扎頸總動脈，不作缺氧處理；正常對照組不作任何處理。wortmannin 干預(yù)組和溶劑干預(yù)組分別在側(cè)腦室內(nèi)注射wortmannin 和DMSO、PBS 3 μL，30 min 后制備HIBD 模型。分別于建模后4、8 及24 h處死動物取腦組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α、Akt 蛋白的分布和表達，Western blot 檢測HIF-1α、Akt 及p-Akt 蛋白含量。 結(jié) 果 實驗組HIF-1α 蛋白表達在術(shù)后4 h 明顯升高，8 h 達高峰，24 h 后下降；p-Akt 蛋白于術(shù)后4 h 明顯升高，8 h 后下降。正常對照組各時間點HIF-1α 和p-Akt 均有極少量弱陽性表達。實驗組各時間點HIF-1α 蛋白表達明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01） ；實驗組p-Akt 于4 h 和8 h 明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。Akt 蛋白表達隨術(shù)后時間的延長無明顯變化，與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。術(shù)后4 h wortmannin 干預(yù)組的HIF-1α 蛋白的表達明顯下降，與溶劑干預(yù)組及實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。 結(jié)論 發(fā)育期HIBD 時，可激活PI3K/Akt 信號通路，并誘導(dǎo)HIF-1α 表達增加，可針對PI3K/Akt 信號通路和HIF-1α 尋找新生兒HIBD新的治療靶點。
目的 探討缺氧缺血性腦損傷(hypoxia ischemia brain damage, HIBD)時缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor 1α, HIF 1α）表達與神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性，探索HIF-1α在神經(jīng)元凋亡中的作用及對損傷神經(jīng)修復(fù)重建的意義。方法 新生10 d SD大鼠40只，隨機分為對照組和實驗組，每組20只。實驗組在乙醚麻醉下行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎，氮氧混合氣（92%氮氣、8%氧氣 ）缺氧2.5h，即為HIBD模型；對照組分離頸總動脈，不結(jié)扎，不作缺氧處理。分別于術(shù)后4、8、24、48及72h處死兩組動物取腦組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測HIF-1α、活化的半胱天冬氨酸酶3（cleaved caspase 3，CC3）的表達，應(yīng)用TUNEL檢測凋亡細(xì)胞。結(jié)果 實驗組HIF-1α蛋白表達在術(shù)后4h明顯升高，8 h達高峰，24h后下降；CC3蛋白于術(shù)后4 h開始表達，8 h有少量表達，24h明顯升高，48h及72h維持較高 水平。對照組各時間點HIF-1α和CC3均有極少量弱陽性表達。實驗組HIF-1α和CC3蛋白表達明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。TUNEL染色顯示實驗組術(shù)后隨時間延長陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，72h達高峰；但對照組TUNEL陽性細(xì)胞極少。兩組比較差 異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 HIF-1α與促凋亡蛋白CC3表 達趨勢相反， HIF-1α對新生兒HIBD神經(jīng)元可能具有保護作用，可望對缺氧缺血神經(jīng)的修復(fù)重建發(fā)揮一定作用。
目的探討不同營養(yǎng)模式對宮內(nèi)發(fā)育遲緩幼鼠胰島素樣生長因子及受體表達的影響。 方法用母鼠全程饑餓法建立宮內(nèi)發(fā)育遲緩（IUGR）動物模型，IUGR新生雌鼠隨機分為4組，新生幼鼠母乳喂養(yǎng)，各組分別給予母鼠下述相應(yīng)飲食飼料喂養(yǎng)3周至斷乳：①IUGR對照組給予常規(guī)飲食；② IUGR高糖飲食組（A組）；③ IUGR高蛋白飲食組（B組）；④ IUGR高脂飲食組（C組）。各組幼鼠在3周哺乳期間母鼠分別攝取上述飼料。各組幼鼠斷乳后同樣分別攝取上述飼料。另以正常母鼠所生正常新生雌鼠為正常對照組（C/N組）。生后母乳喂養(yǎng)至3周斷乳，母鼠及斷乳后幼鼠均給予常規(guī)飲食喂養(yǎng)。各組幼鼠分別取肝、肺進行免疫組織化學(xué)染色檢測和胰腺組織進行蘇木精-伊紅染色檢測。 結(jié)果幼鼠多肽糖金屬蛋白酶12（ADAM12）的測定結(jié)果各個月之間均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。幼鼠孕期相關(guān)血漿蛋白酶A（PAPP-A）的測定結(jié)果在各組幼鼠的第1個月有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但在第2、3、4個月無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。幼鼠Toll樣受體（TLR-4）的測定結(jié)果各個月之間均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。幼鼠胰腺組織結(jié)果在幼鼠的第1個月有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但在第2、3、4個月無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論ADAM12和PAPP-A的表達量或許與幼鼠的追趕生長密切相關(guān)；盡管TLR-4的檢測結(jié)果在統(tǒng)計學(xué)上無明顯意義，但高糖飲食組和高脂飲食組胰腺發(fā)生炎癥的可能性較大。
目的 探討缺氧缺血性腦損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）時端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）的表達及神經(jīng)元凋亡情況。 方法 42 只清潔級7 日齡SD 大鼠，雌雄不限，體重12 ～ 18 g，隨機分為假手術(shù)組（6 只）和缺氧缺血組（36 只）。缺氧缺血組實驗動物分離右側(cè)頸總動脈，雙線結(jié)扎，縫合皮下組織及皮膚，并低氧處理，制備HIBD 動物模型；假手術(shù)組僅將縫線從右側(cè)頸總動脈下穿過，不結(jié)扎，縫合切口，不作低氧處理。分別于術(shù)后4、8、12、24、48 及72 h 處死大鼠取腦組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測TERT 和CC3 蛋白表達，采用TUNEL 染色檢測細(xì)胞凋亡。 結(jié)果 缺氧缺血組TERT 蛋白表達于術(shù)后4 h 開始增加，24 ～ 48 h 達高峰，之后略有下降；CC3 蛋白表達于術(shù)后4 h 開始增加，24 h 明顯升高，48 h 及72 h 維持較高水平。假手術(shù)組TERT 和CC3 僅有少量弱陽性表達。缺氧缺血組術(shù)后各時間點TERT 及CC3 蛋白表達與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。TUNEL 染色顯示，缺氧缺血組術(shù)后4 ～ 8 h 神經(jīng)細(xì)胞凋亡開始增多，24 ～ 48 h 達高峰，72 h 仍維持在較高水平；假手術(shù)組偶見陽性細(xì)胞。缺氧缺血組術(shù)后各時間點陽性細(xì)胞計數(shù)與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 缺氧缺血能誘導(dǎo)腦組織中TERT 表達增加，TERT 可能對神經(jīng)細(xì)胞凋亡起一定保護作用。
目的 探討缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/2，ERK1/2）在體外培養(yǎng)的胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧缺血再灌注后變化的趨勢及其相互關(guān)系。 方法 取15 只16 ～ 18 d 孕齡SD 大鼠的大腦皮層，進行皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)5 d 的原代神經(jīng)元建立氧糖剝離（oxygen and glucose deprivation，OGD）模型。實驗分為實驗組1：OGD 模型制備后，更換培養(yǎng)液為含葡萄糖的神經(jīng)元完全培養(yǎng)基，以形成再灌注；取再灌注0、2、4、8、12、24 h 觀察；對照組1：正常培養(yǎng)液孵育的神經(jīng)元；實驗組2：U0126預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，于再灌注后4、8 h 觀察；對照組2：DMSO 預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，余同實驗組2。應(yīng)用Western blot 定量測定各組HIF-1α、VEGF 蛋白及ERK1/2、p-ERK1/2 的表達變化，SABC 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測p-ERK1/2、HIF-1α 蛋白表達及分布情況。 結(jié)果 培養(yǎng)5 d 的皮質(zhì)神經(jīng)元突起間互相連接成網(wǎng)狀。實驗組1 HIF-1α、VEGF 蛋白表達逐漸升高，8 h 表達量最高，12 h 后逐漸下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組1 與對照組1 ERK1/2 蛋白表達無明顯差異（P gt; 0.05）。實驗組1 p-ERK1/2 蛋白表達在2 h 時開始增加，4 h 達高峰，8 h 開始下降，與對照組1 比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；實驗組2 p-ERK1/2 蛋白表達下降，HIF-1α 及VEGF 蛋白表達也隨之下調(diào)，與對照組2 比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時間點實驗組2 和對照組2 ERK1/2 蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示神經(jīng)元黃棕色著色減弱，p-ERK1/2、HIF-1α 表達下降。 結(jié)論 HIF-1α及其靶基因VEGF 蛋白在OGD 再灌注后的皮質(zhì)神經(jīng)元表達具有一定時間規(guī)律性，抑制ERK1/2 信號通路后這兩個蛋白表達均下降，提示該通路在神經(jīng)元OGD 后誘導(dǎo)HIF-1α 及VEGF 的調(diào)控中起重要作用。
建立一種經(jīng)濟高效的大鼠胰島細(xì)胞分離純化方法，為胰腺的修復(fù)重建奠定實驗基礎(chǔ)。 方 法 成年雄性SD 大鼠25 只，體重230 ～ 380 g，共進行5 次實驗，每5 只大鼠一組進行消化和分離。采用醫(yī)用復(fù)方氯化鈉注射液（compound sodium chloride injection，CSCI）經(jīng)胰總管灌注大鼠胰腺，0.5 mg/mL Ⅴ型膠原酶消化后，分別采用濃度為27.0%、23.0%、20.5%和11.0%的 Ficoll 400 形成不連續(xù)密度梯度介質(zhì)，離心純化胰島細(xì)胞。雙硫腙（dithizon，DTZ）染色行純化前后胰島細(xì)胞計數(shù)和純度檢測；熒光染料碘化丙啶（propidium iodide，PI）和二乙酸熒光素（fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）儲存液雙染色鑒定胰島細(xì)胞活性；RPMI1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d 后，分別用濃度為2.8 mmol/L 的低糖和25.0 mmol/L 的高糖行葡萄糖刺激胰島素釋放實驗檢測胰島細(xì)胞功能。 結(jié)果 5 次實驗胰島細(xì)胞消化時間為（13.8 ± 1.6） min。DTZ 染色鑒定純化前胰島細(xì)胞數(shù)為（5 626 ± 422）個，純化后為（2 914 ± 485）個，純化后的胰島細(xì)胞數(shù)較純化前明顯減少（P lt; 0.01），回收率51.6% ± 6.0%，每個胰腺收獲胰島細(xì)胞數(shù)為（583 ± 97）個/ 只。5 次分離獲得的胰島細(xì)胞純度為90.2% ± 3.4%，活性為81.6% ± 7.0%。培養(yǎng)3 d 后，葡萄糖刺激胰島素釋放實驗顯示：低糖環(huán)境下胰島素水平為（39.7 ± 7.5）EU/L，高糖環(huán)境為（116.1 ± 17.4）EU/L，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）；刺激指數(shù)為3.0 ± 0.4。 結(jié) 論 采用CSCI 作為大鼠胰島細(xì)胞分離純化的主要液體試劑，并采用低濃度Ⅴ型膠原酶消化，不僅可降低實驗成本，同時可獲得高質(zhì)量的胰島細(xì)胞。