目的利用近交系大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驮u(píng)價(jià)同基因細(xì)胞源組織工程皮膚修復(fù)大鼠全層皮膚缺損的效果，為其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法取近交系F344大鼠乳鼠皮膚，采用Dispase-胰蛋白酶兩步消化法分離培養(yǎng)表皮細(xì)胞；取SD大鼠皮膚，按照高滲鹽-SDS-胰蛋白酶化學(xué)處理法制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)；依次利用浸沒(méi)式培養(yǎng)和氣液分離培養(yǎng)法將第2代表皮細(xì)胞與脫細(xì)胞真皮基質(zhì)復(fù)合體外培養(yǎng)構(gòu)建組織工程皮膚。取4～5周齡近交系F344大鼠36只，于大鼠背部?jī)蓚?cè)對(duì)稱制備全層皮膚缺損，缺損面積為預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的1.5 cm × 1.5 cm。將72個(gè)創(chuàng)面隨機(jī)分為3組（n=24），兩側(cè)移植不同修復(fù)材料：實(shí)驗(yàn)組移植組織工程皮膚、陰性對(duì)照組移植同種異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、陽(yáng)性對(duì)照組移植自體全層皮膚（非原位移植）。術(shù)后行大體觀察、皮片成活率、創(chuàng)面收縮率測(cè)量及組織學(xué)觀察，評(píng)價(jià)修復(fù)效果。 結(jié)果實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周創(chuàng)面可達(dá)到Ⅰ期愈合，與周圍組織緊密連接，外觀接近周圍正常皮膚。術(shù)后4周，陰性對(duì)照組皮片成活率為0；實(shí)驗(yàn)組為62.5%（15/24），與陽(yáng)性對(duì)照組91.7%（22/24）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 =5.779，P=0.016）。術(shù)后4周，實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組創(chuàng)面收縮率顯著低于陰性對(duì)照組（P lt; 0.05），實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。組織學(xué)觀察示實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1周有輕微炎性反應(yīng)；術(shù)后2周真皮層小血管和成纖維細(xì)胞大量增生，表皮層逐漸分化成熟；術(shù)后4周時(shí)伴隨新生膠原纖維沉積，移植物真皮層出現(xiàn)膠原改建。 結(jié)論同基因細(xì)胞源組織工程皮膚能夠有效修復(fù)大鼠全層皮膚缺損，在防止創(chuàng)面收縮和促進(jìn)創(chuàng)面愈合等方面均可達(dá)到類似于自體全層皮膚移植的效果。
目的 了解近年來(lái)同種闊筋膜臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展。 方法 查閱國(guó)內(nèi)外同種闊筋膜應(yīng)用基礎(chǔ)、處理技術(shù)和臨床應(yīng)用的相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行總結(jié)分析。 結(jié)果 同種闊筋膜具有細(xì)胞成分少、膠原纖維平行致密的組織學(xué)特點(diǎn)和免疫原性低的特點(diǎn)，經(jīng)過(guò)不同方式處理和保存后，以細(xì)胞外基質(zhì)為主要成分的支架形式供臨床應(yīng)用，并成功應(yīng)用于眼科、泌尿外科、骨科和整形外科等領(lǐng)域，并已取得較為理想的治療效果。 結(jié)論 同種闊筋膜作為一種天然的生物材料在臨床修復(fù)缺損和功能重建中有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有望應(yīng)用于更多領(lǐng)域。
目的 研究豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)兔腹壁缺損的效果，探討異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)應(yīng)用的可行性。 方 法 健康小白豬1 頭，取背部及兩側(cè)皮膚制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)。26 只日本大耳白兔，雌雄不限，體重2.2 ～ 2.3 kg，隨機(jī)分為對(duì)照組（n=6）和實(shí)驗(yàn)組（n=20）。對(duì)照組制備5.0 cm × 0.5 cm 腹壁缺損，單純縫合關(guān)閉缺損。實(shí)驗(yàn)組制備5.0 cm × 2.5 cm 腹壁缺損，用同樣大小的豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)補(bǔ)片（簡(jiǎn)稱“補(bǔ)片”）修復(fù)，補(bǔ)片基底膜面朝向腸管。術(shù)后觀察是否有疝形成，比較兩組腹腔內(nèi)臟器粘連情況，以及對(duì)照組腹壁肌筋膜單純縫合處和實(shí)驗(yàn)組補(bǔ)片- 腹壁肌筋膜吻合處的最大張力，組織學(xué)觀察補(bǔ)片是否有纖維血管組織長(zhǎng)入及其在體內(nèi)的生物學(xué)轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均無(wú)疝形成。術(shù)后5 周，實(shí)驗(yàn)組補(bǔ)片和腹壁融為一體，補(bǔ)片皮膚面和臟器面均有纖維血管組織長(zhǎng)入，補(bǔ)片處于新生組織摻入重建過(guò)程。實(shí)驗(yàn)組1 只動(dòng)物補(bǔ)片和腹腔內(nèi)臟器粘連較重（2 級(jí)），5 只發(fā)生了輕微粘連（1 級(jí)），12 只無(wú)粘連（0 級(jí)）；對(duì)照組1 只輕微粘連（1 級(jí)），5 只無(wú)粘連（0 級(jí)）；兩組粘連分級(jí)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z= —0.798，P=0.425）。術(shù)后5 周，實(shí)驗(yàn)組補(bǔ)片- 腹壁肌筋膜吻合處的最大張力為（13.0 ± 5.5）N，對(duì)照組腹壁肌筋膜單純縫合處為（13.6 ± 4.0）N，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= —0.410，P=0.683）。組織學(xué)觀察顯示，術(shù)后5 周，實(shí)驗(yàn)組補(bǔ)片中有大量小血管，并有中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞為主的炎性浸潤(rùn)，補(bǔ)片邊緣偶見(jiàn)巨噬細(xì)胞，補(bǔ)片- 腹壁肌筋膜吻合處由纖維結(jié)締組織連接；術(shù)后6 個(gè)月，補(bǔ)片及周圍炎性反應(yīng)消退，膠原纖維結(jié)構(gòu)發(fā)生了改建，補(bǔ)片和肌筋膜層由有纖維結(jié)締組織愈合。 結(jié)論 補(bǔ)片修復(fù)兔腹壁缺損取得了較好效果，補(bǔ)片- 腹壁肌筋膜層愈合，其吻合處的力學(xué)強(qiáng)度達(dá)到了自體腹壁單純縫合吻合的力學(xué)強(qiáng)度，補(bǔ)片膠原纖維結(jié)構(gòu)發(fā)生了改建。
目的? 比較豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（porcine acellular dermal matrix，PADM）加大鼠自體刃厚皮與單純大鼠自體刃厚皮修復(fù)全層皮膚缺損的效果，組織學(xué)觀察 PADM 在大鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸。? 方法 健康雌性 SD 大鼠 20 只，體重 200 ～ 225 g。于每只大鼠背部左側(cè)翻起 4.0 cm × 2.5 cm 皮瓣，達(dá)深筋膜，皮下植入 4.0 cm × 2.5 cm 拉網(wǎng)的 PADM，10 ～ 14 d 待植入的 PADM 血管化后，沿原切口處將左側(cè) 4.0 cm × 2.5 cm 皮瓣切下，右側(cè)背部也制作 4.0 cm × 2.5 cm 全層皮膚缺損創(chuàng)面，兩側(cè)切除的全層皮膚用鼓式取皮機(jī)反取為 0.2 mm 厚刃厚皮片，分別植入左側(cè) PADM 上（實(shí)驗(yàn)組）和右側(cè)皮膚缺損（對(duì)照組）。術(shù)后 2、4、8、20 周，觀察創(chuàng)面愈合情況，計(jì)算創(chuàng)面愈合率和創(chuàng)面收縮率，并對(duì)創(chuàng)面行組織學(xué)觀察。? 結(jié)?果 術(shù)后2周大體觀察，實(shí)驗(yàn)組自體刃厚皮與PADM貼合良好，大部分復(fù)合皮泛紅成活；對(duì)照組自體刃厚皮創(chuàng)面絕大部分泛紅成活。組織學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)組 PADM 內(nèi)有大量成纖維細(xì)胞長(zhǎng)入，少量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，周圍可見(jiàn)巨噬細(xì)胞；對(duì)照組自體刃厚皮下纖維結(jié)締組織充填。術(shù)后4～8周大體觀察，實(shí)驗(yàn)組大部分創(chuàng)面愈合，復(fù)合皮挾起時(shí)皮片厚，柔軟、豐滿，有彈性；對(duì)照組創(chuàng)面基本愈合，但挾起時(shí)皮片薄弱。組織學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)組 PADM 內(nèi)炎性浸潤(rùn)逐步消退；對(duì)照組自體刃厚皮下層狀排列的膠原纖維束平行于表面。術(shù)后 20 周大體觀察，實(shí)驗(yàn)組復(fù)合皮與周圍皮膚結(jié)合部平坦，復(fù)合皮柔軟、豐滿；對(duì)照組皮片薄，彈性較差。組織學(xué)觀察， PADM 內(nèi)及周圍未見(jiàn)炎性浸潤(rùn)，膠原纖維組織結(jié)構(gòu)與自體皮接近；對(duì)照組自體刃厚皮皮片薄，內(nèi)見(jiàn)殘存皮膚附件結(jié)構(gòu)，皮下被平行于表面的瘢痕組織充填。實(shí)驗(yàn)組 4、8 周創(chuàng)面愈合率低于對(duì)照組（P lt; 0.05）；創(chuàng)面收縮率有較對(duì)照組低的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。? 結(jié)論 大鼠自體刃厚皮與 PADM 支架復(fù)合移植修復(fù)全層皮膚缺損，復(fù)合皮片厚，彈性好， PADM 在體內(nèi)逐步被自體膠原所替代。
目的 探討熒光染料PKH26 在構(gòu)建組織工程骨中作為細(xì)胞示蹤劑的可行性。 方法 取1 周齡新西蘭大白兔骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，以PKH26 標(biāo)記第3 代BMSCs，熒光顯微鏡觀察并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)標(biāo)記率；以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)標(biāo)記后BMSCs 向成骨細(xì)胞分化，倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)后7、14 d 細(xì)胞形態(tài)變化，并于14 d 采用鈣鈷法檢測(cè)ALP 活性，茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色觀察誘導(dǎo)結(jié)果。將PKH26 標(biāo)記的BMSCs 接種于生物衍生骨材料，48 h 后熒光顯微鏡觀察細(xì)胞與材料的復(fù)合情況；將細(xì)胞- 材料復(fù)合物植入成年新西蘭大白兔雙后肢肌袋，14、28 d 后熒光顯微鏡觀察標(biāo)記細(xì)胞的轉(zhuǎn)歸。 結(jié)果 熒光顯微鏡觀察PKH26 標(biāo)記的BM SCs 呈球形，呈現(xiàn)均勻分布的紅色熒光；培養(yǎng)24 h 后細(xì)胞貼壁伸展，輪廓清晰可見(jiàn)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞染色陽(yáng)性率達(dá)97.2%。經(jīng)成骨誘導(dǎo)后，細(xì)胞由長(zhǎng)梭形變?yōu)槎噙呅位蛄⒎叫?，ECM 分泌增多，ALP 及茜素紅染色均呈陽(yáng)性反應(yīng)。PKH26 標(biāo)記細(xì)胞與生物衍生骨材料復(fù)合培養(yǎng)48 h 后，熒光顯微鏡觀察可見(jiàn)材料表面及內(nèi)部發(fā)出紅色熒光。標(biāo)記細(xì)胞- 支架材料復(fù)合物植入肌袋后14 d，在植入?yún)^(qū)可見(jiàn)發(fā)出紅色明亮熒光的標(biāo)記細(xì)胞； 術(shù)后28 d，在植入?yún)^(qū)仍可見(jiàn)發(fā)出紅色熒光的細(xì)胞，但數(shù)量較14 d 時(shí)少，熒光強(qiáng)度也較弱。 結(jié)論 PKH26 標(biāo)記BMSCs 可作為一種體外構(gòu)建組織工程骨及短期體內(nèi)示蹤的有效手段。