目的 探討預(yù)存糖原對(duì)肝部分切除術(shù)中熱缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 將38 例Child A-B 級(jí)擬行肝部分切除的原發(fā)性肝癌患者按入院順序分為試驗(yàn)組及對(duì)照組，每組19 例。試驗(yàn)組于術(shù)前24 h 內(nèi)靜脈滴注高濃度葡萄糖，對(duì)照組不做特殊處理。兩組患者均采用阻斷第一肝門(mén)方法行病變肝臟切除術(shù)。抽血檢驗(yàn)所有患者術(shù)前及術(shù)后第1、5 天的肝功能情況。分別于缺血前、缺血后及再灌注2 h 獲取正常肝組織，檢測(cè)所有患者肝組織糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用實(shí)時(shí)定量PCR 方法檢測(cè)肝門(mén)阻斷前及再灌注2 h 后肝組織Bcl- 2 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 試驗(yàn)組肝組織糖原含量明顯高于對(duì)照組（Plt;0.01），術(shù)后第1、5 天肝臟功能優(yōu)于對(duì)照組（Plt;0.05），在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于對(duì)照組（Plt;0.05），再灌注2 h 后試驗(yàn)組Bcl-2 mRNA 表達(dá)上調(diào)高于對(duì)照組。結(jié)論 術(shù)前預(yù)存糖原可顯著減輕患者肝切除術(shù)中因?qū)嵤└伍T(mén)阻斷所導(dǎo)致的缺血再灌注損傷，其機(jī)制可能與預(yù)存糖原上調(diào)肝臟Bcl-2 mRNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)。
目的研究肝臟低溫保存再灌注期間肝細(xì)胞糖原含量與肝細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系及bax基因在其中的作用。方法制備糖原含量顯著不同的4組兔肝臟模型，根據(jù)給食方法的不同分為A組（禁食24 h，但自由飲水）、B組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食）、C組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食＋每6 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml）及D組（標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食＋每4 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml），檢測(cè)各組肝臟低溫保存再灌注期間肝細(xì)胞凋亡及bax基因蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果各組肝臟于低溫保存9 h后再灌注60 min時(shí),肝組織內(nèi)可見(jiàn)明顯的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，A、B、C、D 4組的凋亡細(xì)胞數(shù)量依次減少, 4組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組肝細(xì)胞bax基因蛋白的表達(dá)程度與肝細(xì)胞糖原含量有密切的相關(guān)性。 結(jié)論肝臟低溫保存再灌注過(guò)程中,肝細(xì)胞內(nèi)糖原能明顯拮抗肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，其內(nèi)在機(jī)理可能為肝細(xì)胞糖原通過(guò)抑制bax基因蛋白的表達(dá)從而達(dá)到拮抗肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
為了探討增加細(xì)胞內(nèi)糖原含量能否改善肝臟缺血再灌注損傷程度，本實(shí)驗(yàn)對(duì)3組糖原含量顯著不同的兔肝臟缺血再灌注過(guò)程中的組織形態(tài)學(xué)、肝臟酶學(xué)、組織ATP含量、細(xì)胞膜Ca2+-ATP酶活性及胞漿內(nèi)游離Ca2+濃度進(jìn)行了觀察。結(jié)果： 糖原含量高的肝臟，其細(xì)胞能量代謝旺盛，細(xì)胞膜Ca2+-ATP酶活性強(qiáng)，胞漿內(nèi)游離Ca2+濃度相對(duì)穩(wěn)定，組織結(jié)構(gòu)及功能損傷輕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示： 缺血前增加肝臟糖原含量可顯著地拮抗肝臟缺血再灌注損傷。
目的 研究microRNA-129 （mir-129）對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）向心肌分化過(guò)程中的促進(jìn)作用及其機(jī)制。 方法 分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染使細(xì)胞獲得過(guò)表達(dá)基因分為4組：對(duì)照組（MSCs）；慢病毒空轉(zhuǎn)組（Lentiviral vectors＋MSCs，Lv-MSCs）；mir-129單轉(zhuǎn)染組（mir-129-MSCs）；mir-129＋糖原合成酶激酶（GSK-3β）雙轉(zhuǎn)染組（mir-129＋GSK-3β-MSCs）。以10 μmol/L濃度的5-氮雜胞苷（5-Aza）誘導(dǎo)MSCs向心肌細(xì)胞分化后，分別以第1 d、5 d、10 d、15 d和20 d為時(shí)間點(diǎn)，采用realtime-PCR檢測(cè) GATA-4、NKx2.5、MEF-2C的mRNA水平，以第10 d、15 d、20 d為時(shí)間點(diǎn)，用蛋白質(zhì)印跡法（Westernblotting）檢測(cè)肌鈣蛋白I （cTnI）、結(jié)蛋白（Desmin）、GSK-3β以及磷酸化β-catenin與非磷酸化β-catenin的表達(dá)量。結(jié)果 與對(duì)照組比較，隨著研究時(shí)間點(diǎn)的推移，mir-129單轉(zhuǎn)染組反映心肌分化的相關(guān)標(biāo)記物基因和蛋白水平明顯升高，GSK-3β的表達(dá)水平則顯著降低，非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值升高；當(dāng)MSCs同時(shí)過(guò)表達(dá)mir-129和GSK-3β時(shí)，相關(guān)的心肌標(biāo)記物基因和蛋白均低于mir-129單轉(zhuǎn)染組，非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值明顯降低。 結(jié)論 過(guò)表達(dá)mir-129能夠促進(jìn)MSCs向心肌細(xì)胞分化，可能的機(jī)制是通過(guò)抑制GSK-3β的生成，從而削弱了對(duì)β-catenin的磷酸化抑制，后者游離入核開(kāi)啟調(diào)控干細(xì)胞下游的心肌分化途徑。
目的 總結(jié)神經(jīng)元細(xì)胞骨架的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、與軸突生長(zhǎng)的關(guān)系及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞骨架的信號(hào)調(diào)控機(jī)制。 方 法 查閱近年有關(guān)神經(jīng)元細(xì)胞骨架與軸突生長(zhǎng)的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 神經(jīng)元主要的細(xì)胞骨架微絲與微管具有高度極性與動(dòng)態(tài)性，二者之間存在相互作用。無(wú)論是軸突吸引分子還是軸突排斥分子，均是通過(guò)膜內(nèi)傳導(dǎo)，最終作用于細(xì)胞骨架來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的影響。改變生長(zhǎng)錐內(nèi)細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)性及它們相互作用的動(dòng)態(tài)性將影響軸突的生長(zhǎng)。神經(jīng)元內(nèi)的 Rho-GTP 酶及糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β）這兩個(gè)關(guān)鍵分子主要參與了細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)性的調(diào)節(jié)。 結(jié)論 神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的實(shí)質(zhì)是協(xié)調(diào)肌動(dòng)蛋白絲與微管以及它們之間相互作用的動(dòng)態(tài)性和軸突再生。調(diào)控Rho-GTP 酶及GSK-3β 的活性是調(diào)控細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)性、促進(jìn)軸突再生的關(guān)鍵。相同的機(jī)制也介導(dǎo)了脊髓損傷后的軸突再生
目的 分析急性淋巴細(xì)胞白血?。?ALL） 糖原染色（ PAS） 的陽(yáng)性率，與細(xì)胞免疫分型、融合基因分析結(jié)果進(jìn)行比較，探索PAS在ALL診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 方法 回顧性分析我院自2010年1月－2012年5月初發(fā)ALL患者124例，統(tǒng)計(jì)分析其PAS染色、細(xì)胞免疫分型、斷裂點(diǎn)叢集區(qū)基因-abesine鼠白血病基因（BCR-ABL）融合基因、外周血象及相關(guān)臨床資料。 結(jié)果 50 例經(jīng)細(xì)胞免疫分型診斷為早期前B型急性淋巴細(xì)胞白血病（Pro-B ALL）的患者，PAS反應(yīng)陽(yáng)性者30例（60%）；42例經(jīng)細(xì)胞免疫分型診斷為普通型急B性淋巴細(xì)胞白血?。–ommon-B ALL）的患者，PAS反應(yīng)陽(yáng)性者23例（55%）；32例經(jīng)細(xì)胞免疫分型診斷為急性T淋巴細(xì)胞白血（T-ALL）的患者，PAS陽(yáng)性者12例（37%）。分析顯示T-ALL患者PAS的陽(yáng)性率明顯低于Common-B ALL和Pro-B ALL的患者（P＜ 0.05），Common-B ALL和Pro-B ALL之間PAS陽(yáng)性率差異無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。38 例BCR-ABL融合基因陽(yáng)性的ALL患者，PAS反應(yīng)陽(yáng)性者18例（47%）；86例BCR-ABL融合基因陰性的ALL患者，PAS反應(yīng)陽(yáng)性者47例（55%），BCR-ABL融合基因陽(yáng)性和陰性?xún)山M比較，PAS陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 PAS 在ALL患者有較高的陽(yáng)性率，B-ALL中PAS陽(yáng)性率顯著高于T-ALL，PAS可作為一種經(jīng)濟(jì)快速的ALL診斷及免疫亞型初步診斷的輔助手段。
目的檢測(cè)大腸癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA）和糖原合成酶激酶-3β磷酸化（P-GSK3β）的表達(dá)并探討其意義。 方法選取2006年1月－2010年12月大腸癌手術(shù)切除標(biāo)本78例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學(xué)法檢測(cè)78例大腸癌、30例大腸腺瘤和20例正常大腸黏膜中uPA和P-GSK3β的表達(dá)。 結(jié)果大腸癌組織中uPA和P-GSK3β陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，其表達(dá)明顯高于正常大腸黏膜組織和大腸腺瘤組織（P＜0.05）。uPA和P-GSK3β陽(yáng)性表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)（P＜0.05）；兩者間表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論uPA和P-GSK3β在大腸癌中呈高表達(dá)，且與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
目的研究Ghrelin對(duì)L6大鼠成肌細(xì)胞在棕櫚酸誘導(dǎo)下的葡萄糖代謝和胰島素敏感性的影響，并探討其可能的機(jī)理。 方法培養(yǎng)L6大鼠成肌細(xì)胞，誘導(dǎo)分化后利用0.3 mmol/L的棕櫚酸作用16 h，實(shí)驗(yàn)組加入不同劑量的Ghrelin（1、10和100 nmol/L）作用8 h，采用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法（GOD-POD）檢測(cè)骨骼肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，并在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞膜葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)因子-4（GLUT-4）蛋白染色；采用免疫印跡（Western blot）法檢測(cè)骨骼肌細(xì)胞中總蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、總糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）蛋白的表達(dá)。 結(jié)果Ghrelin使胰島素抵抗之L6大鼠成肌細(xì)胞葡萄糖攝取量增加，細(xì)胞膜GLUT-4染色加深，pAkt及pGSK-3β蛋白表達(dá)增加（磷酸化表達(dá)增加），而總Akt和總GSK-3β蛋白無(wú)明顯變化，這種作用可被PI3K阻斷劑（LY294002）消除。 結(jié)論Ghrelin通過(guò)磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β（PI3K/Akt/GSK-3β）信號(hào)途徑促進(jìn)L6大鼠成肌細(xì)胞葡萄糖攝取量，從而提高L6大鼠成肌細(xì)胞胰島素的敏感性。
目的 探討沉默解聚素-金屬蛋白酶 17（ADAM17）基因的表達(dá)對(duì) HT29 結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能機(jī)制。 方法 將 HT29 結(jié)腸癌細(xì)胞分為干擾組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，干擾組細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組慢病毒載體以沉默 ADAM17 基因的表達(dá)，陰性對(duì)照組細(xì)胞轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照重組慢病毒載體，空白對(duì)照組細(xì)胞加入等量的 PBS 溶液。采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 法（real-time PCR）檢測(cè) ADAM17 mRNA 的表達(dá)，采用 Western blot 法檢測(cè) ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、磷酸化蛋白激酶 B（P-Akt）、蛋白激酶 B（Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（P-GSK3β）及糖原合成酶激酶-3β（GSK3β）蛋白的表達(dá)，采用 3-（4, 5-二甲基噻唑-2）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化，采用 Annexin-V-FITC/PI 試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果 與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，干擾組細(xì)胞中 ADAM17 mRNA 及其蛋白的表達(dá)水平均較低，同時(shí)點(diǎn)（培養(yǎng) 24、48 及 72 h）的吸光度值（A 值）也較低，細(xì)胞凋亡率較高，caspase3 蛋白的表達(dá)水平較高，P-Akt 和P-GSK3β 蛋白的表達(dá)水平均較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 ADAM17 基因沉默可能通過(guò)抑制 Akt/GSK3β 通路的激活，發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。