目的 探討預存糖原對肝部分切除術(shù)中熱缺血再灌注損傷的保護作用。方法 將38 例Child A-B 級擬行肝部分切除的原發(fā)性肝癌患者按入院順序分為試驗組及對照組，每組19 例。試驗組于術(shù)前24 h 內(nèi)靜脈滴注高濃度葡萄糖，對照組不做特殊處理。兩組患者均采用阻斷第一肝門方法行病變肝臟切除術(shù)。抽血檢驗所有患者術(shù)前及術(shù)后第1、5 天的肝功能情況。分別于缺血前、缺血后及再灌注2 h 獲取正常肝組織，檢測所有患者肝組織糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用實時定量PCR 方法檢測肝門阻斷前及再灌注2 h 后肝組織Bcl- 2 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 試驗組肝組織糖原含量明顯高于對照組（Plt;0.01），術(shù)后第1、5 天肝臟功能優(yōu)于對照組（Plt;0.05），在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于對照組（Plt;0.05），再灌注2 h 后試驗組Bcl-2 mRNA 表達上調(diào)高于對照組。結(jié)論 術(shù)前預存糖原可顯著減輕患者肝切除術(shù)中因?qū)嵤└伍T阻斷所導致的缺血再灌注損傷，其機制可能與預存糖原上調(diào)肝臟Bcl-2 mRNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)。
目的研究肝臟低溫保存再灌注期間肝細胞糖原含量與肝細胞凋亡之間的關(guān)系及bax基因在其中的作用。方法制備糖原含量顯著不同的4組兔肝臟模型，根據(jù)給食方法的不同分為A組（禁食24 h，但自由飲水）、B組（標準實驗室飲食）、C組（標準實驗室飲食＋每6 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml）及D組（標準實驗室飲食＋每4 h靜脈滴注25%葡萄糖30 ml），檢測各組肝臟低溫保存再灌注期間肝細胞凋亡及bax基因蛋白的表達情況。結(jié)果各組肝臟于低溫保存9 h后再灌注60 min時,肝組織內(nèi)可見明顯的肝實質(zhì)細胞凋亡現(xiàn)象，A、B、C、D 4組的凋亡細胞數(shù)量依次減少, 4組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義，各組肝細胞bax基因蛋白的表達程度與肝細胞糖原含量有密切的相關(guān)性。 結(jié)論肝臟低溫保存再灌注過程中,肝細胞內(nèi)糖原能明顯拮抗肝實質(zhì)細胞凋亡的發(fā)生，其內(nèi)在機理可能為肝細胞糖原通過抑制bax基因蛋白的表達從而達到拮抗肝實質(zhì)細胞凋亡的發(fā)生。
為了探討增加細胞內(nèi)糖原含量能否改善肝臟缺血再灌注損傷程度，本實驗對3組糖原含量顯著不同的兔肝臟缺血再灌注過程中的組織形態(tài)學、肝臟酶學、組織ATP含量、細胞膜Ca2+-ATP酶活性及胞漿內(nèi)游離Ca2+濃度進行了觀察。結(jié)果： 糖原含量高的肝臟，其細胞能量代謝旺盛，細胞膜Ca2+-ATP酶活性強，胞漿內(nèi)游離Ca2+濃度相對穩(wěn)定，組織結(jié)構(gòu)及功能損傷輕。本實驗結(jié)果提示： 缺血前增加肝臟糖原含量可顯著地拮抗肝臟缺血再灌注損傷。
目的 研究microRNA-129 （mir-129）對骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）向心肌分化過程中的促進作用及其機制。 方法 分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，通過慢病毒轉(zhuǎn)染使細胞獲得過表達基因分為4組：對照組（MSCs）；慢病毒空轉(zhuǎn)組（Lentiviral vectors＋MSCs，Lv-MSCs）；mir-129單轉(zhuǎn)染組（mir-129-MSCs）；mir-129＋糖原合成酶激酶（GSK-3β）雙轉(zhuǎn)染組（mir-129＋GSK-3β-MSCs）。以10 μmol/L濃度的5-氮雜胞苷（5-Aza）誘導MSCs向心肌細胞分化后，分別以第1 d、5 d、10 d、15 d和20 d為時間點，采用realtime-PCR檢測 GATA-4、NKx2.5、MEF-2C的mRNA水平，以第10 d、15 d、20 d為時間點，用蛋白質(zhì)印跡法（Westernblotting）檢測肌鈣蛋白I （cTnI）、結(jié)蛋白（Desmin）、GSK-3β以及磷酸化β-catenin與非磷酸化β-catenin的表達量。結(jié)果 與對照組比較，隨著研究時間點的推移，mir-129單轉(zhuǎn)染組反映心肌分化的相關(guān)標記物基因和蛋白水平明顯升高，GSK-3β的表達水平則顯著降低，非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值升高；當MSCs同時過表達mir-129和GSK-3β時，相關(guān)的心肌標記物基因和蛋白均低于mir-129單轉(zhuǎn)染組，非磷酸化β-catenin/磷酸化β-catenin比值明顯降低。 結(jié)論 過表達mir-129能夠促進MSCs向心肌細胞分化，可能的機制是通過抑制GSK-3β的生成，從而削弱了對β-catenin的磷酸化抑制，后者游離入核開啟調(diào)控干細胞下游的心肌分化途徑。
目的 總結(jié)神經(jīng)元細胞骨架的結(jié)構(gòu)特點、與軸突生長的關(guān)系及細胞內(nèi)細胞骨架的信號調(diào)控機制。 方 法 查閱近年有關(guān)神經(jīng)元細胞骨架與軸突生長的文獻，并進行綜述。 結(jié)果 神經(jīng)元主要的細胞骨架微絲與微管具有高度極性與動態(tài)性，二者之間存在相互作用。無論是軸突吸引分子還是軸突排斥分子，均是通過膜內(nèi)傳導，最終作用于細胞骨架來實現(xiàn)對神經(jīng)元軸突生長的影響。改變生長錐內(nèi)細胞骨架的動態(tài)性及它們相互作用的動態(tài)性將影響軸突的生長。神經(jīng)元內(nèi)的 Rho-GTP 酶及糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β）這兩個關(guān)鍵分子主要參與了細胞骨架動態(tài)性的調(diào)節(jié)。 結(jié)論 神經(jīng)元軸突生長的實質(zhì)是協(xié)調(diào)肌動蛋白絲與微管以及它們之間相互作用的動態(tài)性和軸突再生。調(diào)控Rho-GTP 酶及GSK-3β 的活性是調(diào)控細胞骨架動態(tài)性、促進軸突再生的關(guān)鍵。相同的機制也介導了脊髓損傷后的軸突再生
目的 分析急性淋巴細胞白血?。?ALL） 糖原染色（ PAS） 的陽性率，與細胞免疫分型、融合基因分析結(jié)果進行比較，探索PAS在ALL診斷中的應用價值。 方法 回顧性分析我院自2010年1月－2012年5月初發(fā)ALL患者124例，統(tǒng)計分析其PAS染色、細胞免疫分型、斷裂點叢集區(qū)基因-abesine鼠白血病基因（BCR-ABL）融合基因、外周血象及相關(guān)臨床資料。 結(jié)果 50 例經(jīng)細胞免疫分型診斷為早期前B型急性淋巴細胞白血?。≒ro-B ALL）的患者，PAS反應陽性者30例（60%）；42例經(jīng)細胞免疫分型診斷為普通型急B性淋巴細胞白血?。–ommon-B ALL）的患者，PAS反應陽性者23例（55%）；32例經(jīng)細胞免疫分型診斷為急性T淋巴細胞白血（T-ALL）的患者，PAS陽性者12例（37%）。分析顯示T-ALL患者PAS的陽性率明顯低于Common-B ALL和Pro-B ALL的患者（P＜ 0.05），Common-B ALL和Pro-B ALL之間PAS陽性率差異無顯著的統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。38 例BCR-ABL融合基因陽性的ALL患者，PAS反應陽性者18例（47%）；86例BCR-ABL融合基因陰性的ALL患者，PAS反應陽性者47例（55%），BCR-ABL融合基因陽性和陰性兩組比較，PAS陽性率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 結(jié)論 PAS 在ALL患者有較高的陽性率，B-ALL中PAS陽性率顯著高于T-ALL，PAS可作為一種經(jīng)濟快速的ALL診斷及免疫亞型初步診斷的輔助手段。
目的檢測大腸癌組織中尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA）和糖原合成酶激酶-3β磷酸化（P-GSK3β）的表達并探討其意義。 方法選取2006年1月－2010年12月大腸癌手術(shù)切除標本78例，采用微波EliVisionTM免疫組織化學法檢測78例大腸癌、30例大腸腺瘤和20例正常大腸黏膜中uPA和P-GSK3β的表達。 結(jié)果大腸癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達定位于細胞質(zhì)，其表達明顯高于正常大腸黏膜組織和大腸腺瘤組織（P＜0.05）。uPA和P-GSK3β陽性表達與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期有關(guān)（P＜0.05）；兩者間表達呈正相關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論uPA和P-GSK3β在大腸癌中呈高表達，且與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
目的研究Ghrelin對L6大鼠成肌細胞在棕櫚酸誘導下的葡萄糖代謝和胰島素敏感性的影響，并探討其可能的機理。 方法培養(yǎng)L6大鼠成肌細胞，誘導分化后利用0.3 mmol/L的棕櫚酸作用16 h，實驗組加入不同劑量的Ghrelin（1、10和100 nmol/L）作用8 h，采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法（GOD-POD）檢測骨骼肌細胞對葡萄糖的攝取，并在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細胞膜葡萄糖轉(zhuǎn)運因子-4（GLUT-4）蛋白染色；采用免疫印跡（Western blot）法檢測骨骼肌細胞中總蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、總糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）蛋白的表達。 結(jié)果Ghrelin使胰島素抵抗之L6大鼠成肌細胞葡萄糖攝取量增加，細胞膜GLUT-4染色加深，pAkt及pGSK-3β蛋白表達增加（磷酸化表達增加），而總Akt和總GSK-3β蛋白無明顯變化，這種作用可被PI3K阻斷劑（LY294002）消除。 結(jié)論Ghrelin通過磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β（PI3K/Akt/GSK-3β）信號途徑促進L6大鼠成肌細胞葡萄糖攝取量，從而提高L6大鼠成肌細胞胰島素的敏感性。
目的 探討沉默解聚素-金屬蛋白酶 17（ADAM17）基因的表達對 HT29 結(jié)腸癌細胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能機制。 方法 將 HT29 結(jié)腸癌細胞分為干擾組、陰性對照組和空白對照組，干擾組細胞轉(zhuǎn)染重組慢病毒載體以沉默 ADAM17 基因的表達，陰性對照組細胞轉(zhuǎn)染陰性對照重組慢病毒載體，空白對照組細胞加入等量的 PBS 溶液。采用實時熒光定量 PCR 法（real-time PCR）檢測 ADAM17 mRNA 的表達，采用 Western blot 法檢測 ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、磷酸化蛋白激酶 B（P-Akt）、蛋白激酶 B（Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（P-GSK3β）及糖原合成酶激酶-3β（GSK3β）蛋白的表達，采用 3-（4, 5-二甲基噻唑-2）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）法檢測細胞增殖能力的變化，采用 Annexin-V-FITC/PI 試劑盒檢測細胞凋亡情況。 結(jié)果 與陰性對照組和空白對照組比較，干擾組細胞中 ADAM17 mRNA 及其蛋白的表達水平均較低，同時點（培養(yǎng) 24、48 及 72 h）的吸光度值（A 值）也較低，細胞凋亡率較高，caspase3 蛋白的表達水平較高，P-Akt 和P-GSK3β 蛋白的表達水平均較低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結(jié)論 ADAM17 基因沉默可能通過抑制 Akt/GSK3β 通路的激活，發(fā)揮抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡的作用。