摘要： 目的 探討溴代呋喃酮對(duì)胸心外科聚氯乙烯(PVC)材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成的影響，為生物材料表面改性研究及臨床生物材料植入感染的防治提供新思路。 方法 選用化學(xué)結(jié)構(gòu)具有代表性的三種溴代呋喃酮分為3組，呋喃酮1組：3,4-二溴基-5-羥基呋喃酮；呋喃酮2組：4-溴-5-(4-甲氧基苯基)-3-(甲氨基) 呋喃酮；呋喃酮3組：3,4-二溴基-5,5-二甲苯基2(5H)呋喃酮；對(duì)照組：PVC材料用酒精浸泡5 min；分別對(duì)4組PVC材料進(jìn)行表面涂層改性，將改性過(guò)的PVC材料與表皮葡萄球菌共同培育；分別于培養(yǎng)6 h、12 h、18 h和24 h時(shí)用激光共聚焦顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察PVC材料表面細(xì)菌群落及細(xì)菌生物膜厚度的形成，掃描電子顯微鏡觀察PVC材料表面細(xì)菌生物膜表面結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)結(jié)果顯示：呋喃酮2組各時(shí)間點(diǎn)PVC材料表面表皮葡萄球菌群落數(shù)量和細(xì)菌生物膜厚度明顯小于對(duì)照組(Plt;0.05)，呋喃酮1組、呋喃酮3組表皮葡萄球菌群落數(shù)量和細(xì)菌生物膜厚度與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。掃描電子顯微鏡觀察顯示: 與對(duì)照組比較，呋喃酮2組6 h時(shí)PVC材料表面細(xì)菌群落附著數(shù)量較少；18 h時(shí)對(duì)照組PVC材料表面細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)初步形成，而呋喃酮2組無(wú)明顯細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)形成。 結(jié)論 不同溴代呋喃酮對(duì)PVC材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成的影響不同，呋喃酮2可以抑制PVC材料表面表皮葡萄球菌群落數(shù)量和細(xì)菌生物膜厚度的形成。
目的 表皮葡萄球菌胞間黏附素基因（intercellar adhesion，ica）是細(xì)菌聚集的關(guān)鍵因子，通過(guò)分析醫(yī)源性表皮葡萄球菌生物膜基因型，探討ica 操縱子在聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面細(xì)菌生物膜形成中的作用。 方法 取56 株醫(yī)源性表皮葡萄球菌臨床分離株，應(yīng)用PCR 法、基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)細(xì)菌生物膜形成相關(guān)基因，包括16S rRNA、自溶素（autolysin，atlE）、纖維蛋白原結(jié)合蛋白（fibrinogen binding protein，fbe）以及ica。取醫(yī)源性表皮葡萄球菌制備濃度為1 × 105 cfu/mL 的細(xì)菌懸液，并根據(jù)目的基因檢測(cè)結(jié)果，分別以icaADB、atlE、fbe 陽(yáng)性基因型（ica 操縱子陽(yáng)性組）以及icaADB 陰性而atlE、fbe 陽(yáng)性基因型（ica 操縱子陰性組）與PVC 材料培養(yǎng)。于6、12、18、24、30 h 各取2 個(gè)PVC 材料，進(jìn)行激光共聚焦顯微鏡及掃描電鏡觀察，測(cè)量單位視野細(xì)菌群落數(shù)量及形成的細(xì)菌生物膜厚度。 結(jié) 果 目 的 基因檢測(cè)示，醫(yī)源性表皮葡萄球菌16S rRNA 陽(yáng)性率為100%（56/56）；icaADB、atlE、fbe 陽(yáng)性基因型菌株占57.1%（32/56）；icaADB 陰性而atlE、fbe 陽(yáng)性基因型菌株占37.5%（21/56）。測(cè)序結(jié)果示，目的基因16S rRNA、atlE、fbe、icaADB 擴(kuò)增產(chǎn)物序列分別與GenBank 中基因序列相符。隨時(shí)間延長(zhǎng)，ica 操縱子陰性組的PVC 材料表面無(wú)明顯細(xì)菌生物膜形成；ica 操縱子陽(yáng)性組的PVC 材料表面細(xì)菌群落數(shù)量逐漸增多，細(xì)菌生物膜體積逐漸增大，24 h 時(shí)可見(jiàn)成熟的細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)，30 h 時(shí)細(xì)菌生物膜體積趨于穩(wěn)定。培養(yǎng)各時(shí)間點(diǎn)ica 操縱子陽(yáng)性組PVC 材料表面單位視野細(xì)菌群落數(shù)量（F=435.987，P=0.000）及細(xì)菌生物膜厚度（F=6 714.395，P=0.000）明顯高于ica 操縱子陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 醫(yī)源性表皮葡萄球菌可以分為ica 操縱子陰性和ica 操縱子陽(yáng)性?xún)深?lèi)細(xì)菌；ica 操縱子可以增加PVC 材料表面細(xì)菌生物膜的形成能力、細(xì)菌群落數(shù)量及細(xì)菌生物膜厚度，在PVC 材料表面細(xì)菌生物膜形成中具有重要作用。
目的 探討不同溴代呋喃酮對(duì)聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面大腸桿菌生物膜形成的影響，為生物材料表面改性研究及臨床生物材料植入感染的防治提供新思路。 方法 選用具有化學(xué)結(jié)構(gòu)代表性的3 種溴代呋喃酮，溴代呋喃酮1：3，4- 二溴基-5- 羥基- 呋喃酮，溴代呋喃酮2：4- 溴-5-（4- 甲氧基苯基）-3-（甲氨基）- 呋喃酮，溴代呋喃酮3：3，4- 二溴基-5，5- 二甲苯基-2（5H）- 呋喃酮，分別對(duì)PVC 材料片（1 cm × 1 cm）進(jìn)行表面涂層改性，將改性后的PVC 材料片與大腸桿菌共同培養(yǎng)；將PVC 材料片用75% 乙醇浸泡5 min 后與大腸桿菌共同培養(yǎng)作為對(duì)照組。分別于培養(yǎng)6、12、18、24 h，采用激光共聚焦顯微鏡動(dòng)態(tài)觀測(cè)PVC 材料表面單位面積細(xì)菌群落數(shù)及細(xì)菌群落厚度，掃描電鏡觀察PVC 材料表面細(xì)菌生物膜表面結(jié)構(gòu)。 結(jié)果 激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)顯示，各時(shí)間點(diǎn)溴代呋喃酮3 組PVC 材料表面單位面積細(xì)菌群落數(shù)以及細(xì)菌群落厚度均小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；而溴代呋喃酮1 組和溴代呋喃酮2 組與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡觀察示，與對(duì)照組比較，溴代呋喃酮3 組培養(yǎng)后6 h PVC 材料表面細(xì)菌群落附著數(shù)量較少；18 h 時(shí)對(duì)照組及溴代呋喃酮1 組和溴代呋喃酮2 組PVC 材料表面細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)已初步形成，而溴代呋喃酮3 組PVC 材料表面無(wú)明顯細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)形成。 結(jié)論 不同溴代呋喃酮對(duì)PVC 材料表面大腸桿菌生物膜形成的影響不同，3，4- 二溴基-5，5- 二甲苯基-2（5H）- 呋喃酮可抑制PVC 材料表面單位面積大腸桿菌群落數(shù)和細(xì)菌群落厚度形成。
目的建立聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面白色念珠菌-表皮葡萄球菌混合生物膜體外模型，觀察混合生物膜的形成與微觀結(jié)構(gòu)。 方法取表皮葡萄球菌（ATCC35984）與白色念珠菌（ATCC10231），分別制備濃度為1×106 CFU/mL的懸液并混合后，與直徑0.5 cm PVC膜在胰蛋白胨大豆肉湯（tryptic soy broth,TSB）培養(yǎng)基中共培養(yǎng)形成混合生物膜（實(shí)驗(yàn)組）。培養(yǎng)2、6、12、24、48、72 h時(shí)取PVC膜，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)生物膜厚度、單位視野菌落數(shù)，并于48 h時(shí)測(cè)量生物膜內(nèi)活菌百分比、三維重建PVC膜表面生物膜圖像；掃描電鏡觀察各時(shí)間點(diǎn)混合生物膜結(jié)構(gòu)。以單純PVC膜置于TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)作為對(duì)照組。 結(jié)果對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)PVC材料表面無(wú)病原菌黏附。實(shí)驗(yàn)組激光共聚焦顯微鏡觀察示，培養(yǎng)6 h時(shí)可見(jiàn)菌落及生物膜形成，隨時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸增加，24 h時(shí)菌落達(dá)高峰，48 h時(shí)生物膜厚度達(dá)峰值。實(shí)驗(yàn)組PVC膜表面菌落數(shù)比較，2、6、24 h間以及2、6 h與48、72 h間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），24、48、72 h間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；生物膜厚度除48、72 h間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P＞0.05），其余各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。培養(yǎng)48 h時(shí)，混合生物膜外層活菌百分比明顯高于內(nèi)層及中間層（P＜0.05）。三維重建顯示混合生物膜表面凹凸不平，突起部分活菌數(shù)量較多。掃描電鏡觀察示，實(shí)驗(yàn)組隨培養(yǎng)時(shí)間增加，PVC膜表面白色念珠菌由孢子狀逐漸伸長(zhǎng)出現(xiàn)假絲狀及菌絲狀，表皮葡萄球菌黏附于白色念珠菌周?chē)?，逐漸形成復(fù)雜的多層次網(wǎng)狀混合生物膜。 結(jié)論白色念珠菌-葡萄球菌混合培養(yǎng)可在PVC材料表面形成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的混合生物膜，激光共聚焦顯微鏡、掃描電鏡與三維圖像重建技術(shù)的結(jié)合是研究混合生物膜的理想方法。
目的探討表皮葡萄球菌附屬基因調(diào)節(jié)子 C（accessory gene regulator C，agr C）特異結(jié)合多肽（簡(jiǎn)稱(chēng)為 N1）對(duì)聚氯乙烯（polyvinyl chloride，PVC）材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成作用的體外研究。方法以表皮葡萄球菌 ATCC35984（生物膜表型陽(yáng)性）和 ATCC12228（生物膜表型陰性）作為研究對(duì)象。首先將兩菌株分別加入濃度為 100、200、400、800、1 600 μg/mL 的 N1 培養(yǎng)，以相同濃度 agrC 特異結(jié)合無(wú)關(guān)肽（簡(jiǎn)稱(chēng)為 N0）培養(yǎng)作為對(duì)照；24 h 后測(cè)定吸光度（A）值，確定 N1 最佳抑菌濃度。兩菌株與最佳抑菌濃度的 N1 及 N0 分別培養(yǎng)，6、12、18、24、30、48 h 測(cè)定 A 值，觀察 N1 對(duì)表皮葡萄球菌生物膜形成能力的影響；在此基礎(chǔ)上與 PVC 材料片培養(yǎng) 6、12、18、24、30 h，掃描電鏡觀察 PVC 材料表面生物膜的表面結(jié)構(gòu)；另取與 ATCC35984 菌株培養(yǎng) 6、12、18、24 h 的 PVC 材料片，激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜厚度。結(jié)果A 值測(cè)定顯示，N1 對(duì) ATCC35984 菌株最佳抑菌濃度為 800 μg/mL。ATCC12228 菌株與 N1 及 N0 培養(yǎng)后均未形成明顯生物膜；ATCC35984 菌株與 N1 及 N0 培養(yǎng) 12 h 時(shí)，生物膜形成能力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），6、18、24、30、48 h 時(shí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。掃描電鏡觀察，ATCC35984 菌株與 N1 及 N0 培養(yǎng)后，隨時(shí)間延長(zhǎng)均見(jiàn)成熟生物膜結(jié)構(gòu)；而 ATCC12228 菌株培養(yǎng)后均未見(jiàn)生物膜形成。激光共聚焦顯微鏡觀察，ATCC35984 菌株與 N1 培養(yǎng) 12 h 時(shí)細(xì)菌量明顯少于與 N0 培養(yǎng)，且以死細(xì)菌居多；6、18、24 h 時(shí)兩種培養(yǎng)條件下細(xì)菌數(shù)量未見(jiàn)明顯差別，均以活細(xì)菌居多；同時(shí)，N1 培養(yǎng) 12、18 h 時(shí)生物膜厚度明顯小于 N0 培養(yǎng)（P<0.05）。結(jié)論N1 抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的強(qiáng)度有量效關(guān)系；其在聚集期阻礙細(xì)菌的增殖和聚集，抑制生物膜形成，對(duì)成熟生物膜抑制作用不明顯。