目的 研究體外擴(kuò)增過程中，CD34+細(xì)胞內(nèi)B細(xì)胞特異單克隆鼠白血病毒整合位點(diǎn)基因1（B-cell-specific monoclonal leukemia virus insert site 1，Bmi1）和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因的表達(dá)水平與其擴(kuò)增特性的相關(guān)性。 方法采用含F(xiàn)BS、干細(xì)胞生長因子、Flt-3配體和促血小板生成素的IMDM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞，在28 d培養(yǎng)過程中檢測CD34+細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、CD34+細(xì)胞比生長速率以及集落形成率的變化趨勢，并采用熒光定量PCR檢測體外擴(kuò)增過程中CD34+細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT基因表達(dá)水平變化，分析以上基因表達(dá)水平與CD34+細(xì)胞擴(kuò)增特性之間的關(guān)系。 結(jié)果經(jīng)過28 d的體外培養(yǎng)，CD34+細(xì)胞共擴(kuò)增了（20.1 ± 3.5）倍，其占擴(kuò)增后總細(xì)胞的比例由培養(yǎng)前的95.5% ± 2.6%下降至2.1% ± 0.4%；CD34+細(xì)胞的比生長速率和集落形成率均在培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)明顯下降，而細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT mRNA的表達(dá)水平在培養(yǎng)7 d時達(dá)最高，此后逐漸下降至培養(yǎng)前水平。 結(jié)論Bmi1和hTERT基因表達(dá)與CD34+細(xì)胞體外增殖能力可能存在一定相關(guān)性。
目的 研究CD34+ 細(xì)胞體外誘導(dǎo)的肝樣細(xì)胞在小鼠體內(nèi)修復(fù)受損肝組織的作用。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血中的單個核細(xì)胞并獲得富集CD34+ 細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1 × 105 個/mL，使用含干細(xì)胞生長因子（stem cell factor，SCF）、肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、EGF、抑瘤素M（oncostatin M，OSM）和bFGF的無血清培養(yǎng)基（5 種細(xì)胞因子濃度分別為50、20、20、10、10 ng/mL）體外誘導(dǎo)10 d。取6 周齡雌性ICR 小鼠48 只，以二乙酰氟氨和CCl4 注射制備肝損傷模型。將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組（n=24），實(shí)驗(yàn)組將誘導(dǎo)后細(xì)胞（1.6 × 105 個 / 只，含CD34+ 細(xì)胞1 × 104 個）通過尾靜脈注射入肝損傷小鼠體內(nèi)，對照組注射等量無血清培養(yǎng)基，術(shù)后7、14、21、28 d 兩組分別處死6 只小鼠，行HE 染色、PCR 凝膠電泳、免疫組織化學(xué)染色及肝功能檢測。 結(jié)果 HE 染色顯示，對照組術(shù)后28 d時肝組織形態(tài)恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后14 d 時即已恢復(fù)正常。PCR 凝膠電泳和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各個時間點(diǎn)在肝組織中均可檢測到表達(dá)人血清白蛋白的細(xì)胞，而對照組術(shù)后28 d 內(nèi)均未檢測到。肝功能檢測結(jié)果顯示，對照組術(shù)后14 d 時谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)組小鼠術(shù)后7 d 時即已恢復(fù)正常；但兩組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性在28 d 內(nèi)均未恢復(fù)。 結(jié)論 CD34+ 細(xì)胞經(jīng)體外向肝細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化后，能在肝損傷的小鼠體內(nèi)促進(jìn)受損肝組織形態(tài)和功能的恢復(fù)，并能在小鼠受損肝臟中轉(zhuǎn)化為人源肝細(xì)胞。
【摘 要】 目的 探討通過細(xì)胞因子及其組合體外誘導(dǎo)臍血CD34+ 細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成肝樣細(xì)胞的效果。 方法 采用密度梯度離心法分離臍血單個核細(xì)胞（mononuclear cell，MNC），從MNC 中獲得富集CD34+ 細(xì)胞。選用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝細(xì)胞生長因子、EGF 及干細(xì)胞生長因子7 種細(xì)胞因子，濃度分別為10、10、10、10、20、20和50 ng/mL，設(shè)計了 49 種細(xì)胞因子組合，分別采用這些細(xì)胞因子組合體外培養(yǎng)臍血CD34+ 細(xì)胞，培養(yǎng)周期為28 d。以新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞作為對照。每7 天檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞中細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin19，CK-19）、CK-18、谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）、人血清白蛋白（albumin，ALB）以及甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）的mRNA 轉(zhuǎn)錄情況，并應(yīng)用免疫熒光法、過碘酸- 雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色與吲哚菁綠（indocyanine green，ICG）染色法檢測細(xì)胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力，以此判斷是否存在臍血CD34+ 細(xì)胞體外向肝樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化。 結(jié)果 在經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的CD34+ 細(xì)胞中均可檢測到人肝細(xì)胞所能表達(dá)的CK-19 、CK-18 和GS 的mRNA 條帶，未能檢測出肝細(xì)胞特征性的ALB 與AFP 的mRNA 條帶；而新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞中以上5 種蛋白的mRNA 均未能檢出。免疫熒光染色觀察示誘導(dǎo)前后的細(xì)胞中均未能檢測到ALB 的表達(dá)，且均不能有效吞噬ICG 染料。PAS 反應(yīng)檢測結(jié)果顯示，經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)后的細(xì)胞紫紅色糖原沉積區(qū)域較新鮮臍血CD34+ 細(xì)胞增大，出現(xiàn)紫紅色區(qū)域的細(xì)胞增多。 結(jié)論 臍血CD34+ 細(xì)胞體外經(jīng)細(xì)胞因子組合誘導(dǎo)后，雖有肝細(xì)胞相關(guān)蛋白mRNA 表達(dá)，但未能轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞。
目的探討局部晚期食管鱗癌患者經(jīng)過程序性死亡受體-1（programmed cell death-1，PD-1）單抗聯(lián)合化療后是否需要進(jìn)一步手術(shù)治療，及其對生存的影響。 方法選取2020年1月—2022年6月在濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院行免疫聯(lián)合化療治療的ⅡA～ⅢB的食管鱗癌患者，根據(jù)免疫聯(lián)合化療后是否進(jìn)行手術(shù)分為手術(shù)組和非手術(shù)組。比較兩組患者的一般臨床資料、毒副反應(yīng)、臨床完全緩解率（CCR），無進(jìn)展生存期（PFS），并分析兩組PFS和總生存期（OS）的差異。結(jié)果 納入58例患者，其中男45例、女13例。手術(shù)組和非手術(shù)組在一般臨床資料及毒副反應(yīng)方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義。單因素分析結(jié)果顯示客觀緩解率、手術(shù)與PFS明顯相關(guān)（P<0.05）。二元 logistic回歸分析結(jié)果顯示，手術(shù)是唯一影響 PFS的獨(dú)立危險因素（P=0.003）。K-M生存分析顯示手術(shù)組的PFS和OS均明顯高于非手術(shù)組［HR=0.13，95%CI（0.036，0.52），P＜0.01；HR=0.17，95%CI（0.045，0.68），P＜0.01］。結(jié)論局部晚期食管鱗癌患者經(jīng)過PD-1聯(lián)合化療治療后，仍需要聯(lián)合手術(shù)治療，這樣才能獲得更好的PFS和OS。
目的探討完全電視胸腔鏡（VATS）肺葉切除術(shù)治療早期肺癌的可行性、安全性及近期療效。 方法回顧性分析2012年1月至2013年5月濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院連續(xù)138例早期肺癌施行肺葉切除術(shù)患者的臨床資料，其中完全電視胸腔鏡肺葉切除術(shù)組（VATS組）71例，男39例，女32例；年齡（57.9±10.6）歲；傳統(tǒng)開胸肺葉切除術(shù)組（開胸組）67例，男36例，女31例；年齡（60.3±8.2）歲。比較兩組患者手術(shù)時間、術(shù)中出血量、清掃淋巴結(jié)組數(shù)及個數(shù)、帶胸腔引流管時間、術(shù)后住院時間、術(shù)后第1 d、3 d、30 d疼痛視覺模擬評分（vision analogue score，VAS）以及術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生情況。 結(jié)果兩組患者均順利完成手術(shù)。VATS組患者術(shù)中出血量［（147±113）ml vs.（146±91）ml］、清掃淋巴結(jié)個數(shù)［（9.9±3.6）枚vs.（10.0±3.6）枚］及組數(shù)［（3.1±1.3）組vs.（3.4±1.3）組］、術(shù)后第1 d、第3 d VAS評分與開胸組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；VATS組手術(shù)時間［（119±27）min vs.（135±29）min］、術(shù)后帶胸腔引流管時間［（3.0±0.9）d vs.（3.8±1.2）d］、術(shù)后住院時間［（8.0±2.1）d vs.（10.2±5.4）d］、術(shù)后第30 d VAS評分［（2.6±0.7）分vs.（3.2±1.1）分］及術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率均短于或少于開胸組（P<0.05）。VATS組術(shù)后隨訪59例，開胸組術(shù)后隨訪58例，隨訪時間2～18個月，兩組均無死亡，其中腦轉(zhuǎn)移1例，肝轉(zhuǎn)移1例，骨轉(zhuǎn)移2例。 結(jié)論對于早期肺癌的治療，采用完全胸腔鏡肺葉切除術(shù)安全可行，它具有創(chuàng)傷小、并發(fā)癥少，術(shù)后恢復(fù)快、慢性胸痛輕微等優(yōu)勢。同時能夠達(dá)到與常規(guī)開胸手術(shù)相同的規(guī)范化淋巴結(jié)清掃。
手術(shù)是治療可切除食管癌的首選方案，但是在局部晚期食管癌中，單純手術(shù)治療效果并不理想，因此以手術(shù)為主的綜合治療是最佳方案。其中局部晚期可切除食管癌新輔助治療已成為一種標(biāo)準(zhǔn)治療手段，新輔助治療包括新輔助化療、放化療、免疫治療、靶向治療等。隨著免疫治療在晚期食管癌的一線、二線治療中都取得顯著的療效以及可接受的毒性，新輔助免疫治療成為當(dāng)下局部晚期可切除食管癌的研究熱點(diǎn)。本文就新輔助免疫治療在局部晚期可切除食管癌的最新研究進(jìn)展以及存在的一些局限性進(jìn)行闡述。
目的 觀察新輔助信迪利單抗聯(lián)合化療治療局部晚期可切除食管鱗癌（esophageal squamous carcinoma，ESCC）患者的近期療效及安全性。方法 回顧性分析2020年4月—2022年4月于濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院胸外科就診的經(jīng)新輔助免疫聯(lián)合化療后手術(shù)治療的局部晚期可切除ESCC患者的臨床資料。觀察主要病理緩解(Major pathological response，MPR)、病理完全緩解（pathological complete response，pCR）、R0切除率、安全性及術(shù)后生存情況等。結(jié)果 共納入43例術(shù)前接受至少1周期新輔助免疫治療的ESCC患者，其中男31例、女12例，年齡范圍為46～77歲，中位年齡為65歲。所有患者均順利完成手術(shù)，無手術(shù)延遲。pCR率為14.0%（6/43)，MPR率為58.1%（25/43），R0切除率為97.7% (42/43)?；颊咴谛螺o助治療期間及術(shù)后展現(xiàn)出可靠的安全性。2年總生存（overall survival，OS）率和無疾病生存（disease-free survival，DFS）率分別為90.7%，81.4%，Kaplan-Meier 生存分析及l(fā)og-rank檢驗(yàn)顯示MPR組相比于非MPR組有著更低的復(fù)發(fā)率和更好的生存。結(jié)論 新輔助信迪利單抗聯(lián)合化療治療局部晚期可切除ESCC患者具有較為顯著的臨床療效，并且安全可靠。
目的 探討新輔助免疫治療聯(lián)合化療在局部晚期可切除非小細(xì)胞肺癌患者的療效和安全性。方法 回顧性分析2021年4月—2024年1月在濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院接受新輔助免疫治療聯(lián)合化療或單獨(dú)化療后行手術(shù)治療的非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者的臨床資料。根據(jù)術(shù)前新輔助方案，將患者分為聯(lián)合組和化療組，比較兩組患者的臨床資料。結(jié)果 共納入66例患者，其中男61例、女5例。聯(lián)合組53例，平均年齡（63.40±6.80）歲；化療組13例，平均年齡（58.62±8.30）歲。兩組患者年齡差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.02），其他基線資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。聯(lián)合組和化療組的主要病理緩解率（MPR）分別為54.7% 及 23.1%（P=0.042），病理完全緩解率（pCR）分別為39.6%及0.0%（P=0.006）。聯(lián)合組手術(shù)時間更短（P=0.039）。兩組術(shù)中出血、術(shù)后帶管時間、術(shù)后并發(fā)癥及總生存期（OS）、無事件生存期（EFS）差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 新輔助免疫聯(lián)合化療后行手術(shù)治療安全可行，長期療效需進(jìn)一步隨訪證實(shí)。