目的 研究支氣管哮喘模型小鼠肺組織及肺T 細(xì)胞中三種β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) RFNG、LFNG、MFNG 的基因和蛋白表達(dá)的特點(diǎn), 探討Fringe 是否與哮喘發(fā)病有關(guān)。方法 使用卵白蛋白腹腔注射后霧化吸入法制備BALB/ c 小鼠哮喘模型, 并設(shè)置生理鹽水對(duì)照組。經(jīng)Perco1 及尼龍毛法分離獲取肺T 細(xì)胞。采用半定量RT-PCR 檢測(cè)兩組小鼠肺組織及肺T 細(xì)胞中RFNG、LFNG、MFNG mRNA 表達(dá);Western blot 檢測(cè)兩組小鼠肺組織中RFNG、LFNG、MFNG 蛋白表達(dá)。結(jié)果 兩組小鼠肺組織及肺T 細(xì)胞中均存在三種Fringe 表達(dá)。哮喘組肺組織及肺T 細(xì)胞的RFNGmRNA 表達(dá)較對(duì)照組增加( 肺組織: 0. 92 ±0. 35 比0. 51 ±0. 13, Plt;0. 01; 肺T 細(xì)胞: 0. 33 ±0. 06 比0. 18 ±0. 07, Plt; 0. 01) ; LFNG mRNA 表達(dá)較對(duì)照組減少( 肺組織: 0. 77 ±0. 32 比1. 61 ±0. 31, Plt;0. 01; 肺T細(xì)胞: 0. 49 ±0. 19 比0. 71 ±0. 03, P lt;0. 01) 。MFNG 在肺組織中的表達(dá)無(wú)明顯差異( 肺組織: 1. 44 ±0. 29 比1. 70 ±0. 44, P gt; 0. 05) , 但MFNG 在肺T 細(xì)胞中的表達(dá)明顯減少( 0. 11 ±0. 03 比0. 52 ±0. 18, P lt; 0. 01) 。肺組織中三種Fringe 蛋白表達(dá)與肺組織的mRNA 結(jié)果相似。哮喘組的RFNG 蛋白表達(dá)高于對(duì)照組( 1. 17 ±0. 04 比0. 68 ±0. 07, P lt; 0. 05) , MFNG 蛋白表達(dá)在兩者之間沒(méi)有明顯的差異( 8. 10 ±0. 60 比9. 12 ±0. 07, P gt; 0. 05) , 而LFNG 的蛋白表達(dá)則低于對(duì)照組( 4. 11 ±0. 38比6. 41 ±0. 11, P lt;0. 05) 。結(jié)論 三種Fringe 的異常表達(dá)可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。
目的 利用CT 肺動(dòng)脈造影( CTPA) 的CT 肺動(dòng)脈阻塞指數(shù)( CTI) 定量化分析肺栓塞( PE) 患者肺動(dòng)脈阻塞的嚴(yán)重程度。方法 以CTPA 發(fā)現(xiàn)肺動(dòng)脈內(nèi)栓子確診PE 患者。采用CTI 評(píng)價(jià)肺動(dòng)脈阻塞程度。采用Spearman 等級(jí)相關(guān)評(píng)價(jià)CTI 與動(dòng)脈血?dú)夂托菘酥笖?shù)( SI) 的相關(guān)性。采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)不同CTI( 30% 、40%、50% 及60% ) 截?cái)嘀瞪舷翽E 患者的動(dòng)脈血?dú)饧癝I的差異。結(jié)果 共納入臨床懷疑PE 的患者84 例, 經(jīng)CTPA 檢查確診PE 患者27 例。PE 患者CTI 與PaO2 ( r = - 0. 416, P =0. 031) 、P( A-a) O2 ( r =0. 468, P =0. 014) 有顯著相關(guān)性, 與PaCO2 、SI 無(wú)明顯相關(guān)性。取CTI 60% 為截?cái)嘀禃r(shí), 不同CTI 值PE 患者的PaO2、P( A-a) O2 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P lt; 0. 05) 。結(jié)論 CTI 與PaO2、P( A-a) O2水平呈顯著相關(guān)性, 可用于肺栓塞嚴(yán)重度的評(píng)估。CTI 超過(guò)60% 表示肺通氣及換氣功能受損更為嚴(yán)重。
目的 探討引起醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( MRSA) 的基因多態(tài)性。方法 2007 年1 月至2008 年1 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院住院診斷為醫(yī)院獲得性MRSA 肺炎患者74 例, 對(duì)所得82 株菌株進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增DNA 的多態(tài)性( RAPD) 基因分型。結(jié)果 82 株MRSA經(jīng)電泳得到2 ～15 條片段, 經(jīng)聚類分析可分為11 個(gè)基因型。從重癥監(jiān)護(hù)室( ICU) 病例中分離所得的菌株, 主要為Ⅲ、Ⅵ型和Ⅶ型( 32. 56% 、30. 23% 和13. 95% ) 。從老年科、急診科和呼吸科病例中分離所得的菌株, 除有各自相對(duì)獨(dú)立的基因型外, 同時(shí)還有與ICU所得菌株重疊的基因型存在。其余臨床科室病例所分離的MRSA 菌株數(shù)量較少, 分布也較分散與獨(dú)立。暴發(fā)和聚集性病例共占48. 65% ( 36/ 74) , 所有暴發(fā)病例均發(fā)生于ICU 病區(qū)內(nèi)。結(jié)論 院內(nèi)獲得性MRSA 肺炎易于播散,特別是在ICU可發(fā)生小范圍的暴發(fā)。隨機(jī)擴(kuò)增DNA 的多態(tài)性分型對(duì)及早識(shí)別高?；颊摺㈩A(yù)防MRSA在院內(nèi)的播散具有價(jià)值。
目的 探討醫(yī)院獲得性肺炎的銅綠假單胞菌氟喹諾酮耐藥決定域( QRDR) 基因突變及其與臨床用藥的關(guān)系。方法 對(duì)2006 年1 月至2007 年12 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院醫(yī)院獲得性肺炎患者痰中分離得到的銅綠假單胞菌84 株, 采用限制性長(zhǎng)度多態(tài)性分析( RFLP) 結(jié)合基因測(cè)序檢測(cè)所得菌株QRDR 的基因突變, 并結(jié)合臨床用藥情況進(jìn)行分析。結(jié)果 50 株耐藥菌經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)QRDR 區(qū)存在突變42 株, 占84. 0% 。GyrB Ser464 發(fā)生突變34 株, 占68. 0% 。GyrB Ser464 突變組與非突變組比較, 對(duì)應(yīng)的患者分離菌株之前使用β-內(nèi)酰胺類的情況存在差異( OR =11. 3, P = 0. 003及OR=3. 5, P = 0. 023) 。喹諾酮類藥物在采集前30 d 內(nèi)的使用時(shí)間也存在差異( P = 0. 038) 。結(jié)論 銅綠假單胞菌對(duì)喹諾酮的耐藥性與QRDR 區(qū)突變的發(fā)生相一致, 耐藥菌株突變類型以GyrB Ser464突變?yōu)橹? 可能與喹諾酮類和β-內(nèi)酰胺類的使用有關(guān)。
目的 探討COPD 大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞( AECⅡ) 炎癥因子表達(dá)是否與組蛋白修飾有關(guān)。方法 熏煙法建立大鼠COPD 模型。取大鼠肺組織進(jìn)行病理觀察, 提取AECⅡ 進(jìn)行堿性磷酸酶染色鑒定和電鏡鑒定; 實(shí)時(shí)定量PCR 檢測(cè)AECⅡ 三種趨化因子: 單核細(xì)胞趨化蛋白1( MCP-1) 、IL-8及巨噬細(xì)胞炎性蛋白2α( MIP-2α) 的mRNA 表達(dá); Western blot 檢測(cè)組蛋白去乙酰化酶2( HDAC2) 蛋白表達(dá); 染色質(zhì)免疫共沉淀( ChIP) 檢測(cè)趨化因子啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H3、H4 乙?；虷4K9甲基化修飾情況。結(jié)果 COPD 組IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達(dá)較正常對(duì)照組分別增加4. 48 倍、3. 14 倍、2. 83 倍; COPD組AECⅡ細(xì)胞HDAC2 蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組降低( 0. 25 ±0. 15 比0. 66 ±0. 15,P lt;0. 05) , 且HDAC2 的下降程度與IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達(dá)增高程度呈負(fù)相關(guān)( r 值分別為- 0. 960、- 0. 914、- 0. 928, P 均lt;0. 05) 。COPD 組趨化因子基因啟動(dòng)子區(qū)H3、H4 乙?；捷^正常對(duì)照組均升高, H4K9 甲基化水平則降低( P 均lt; 0. 05) 。結(jié)論 COPD 模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三種趨化因子基因表達(dá)增加, HDAC2 介導(dǎo)的組蛋白修飾在COPD炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。
目的 在支氣管哮喘大鼠模型中采用siRNA 干擾肺CD4 + T 細(xì)胞β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) 亞型Rfng 基因的表達(dá), 探討Rfng 對(duì)哮喘T細(xì)胞分化的影響。方法 用卵白蛋白( OVA)致敏并激發(fā)建立哮喘大鼠模型。提取哮喘大鼠肺T 細(xì)胞, 并用免疫磁珠分離純化CD4 + T淋巴細(xì)胞。用Rfng 特異的siRNA 片段干擾哮喘大鼠CD4 + T 淋巴細(xì)胞高表達(dá)的Rfng 基因。定量PCR 和Westernblot 檢測(cè)Rfng 的表達(dá)。定量PCR 檢測(cè)Th1/Th2 型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5, 以及核轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3。ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Th1 /Th2 型細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5。結(jié)果 siRNA干擾哮喘大鼠肺CD4 + T 淋巴細(xì)胞后, 定量PCR 和Western blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)siRNA 干預(yù)組中RfngmRNA 和蛋白表達(dá)明顯降低。在siRNA 干預(yù)組中, Th1 型細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子T-bet 的mRNA 表達(dá)明顯升高, Th2 型細(xì)胞因子IL-4、IL-5 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子GATA3 的mRNA 表達(dá)明顯降低。ELISA 檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-12 明顯升高, IL-4、IL-5 明顯降低。結(jié)論 Rfng基因表達(dá)的改變影響了T細(xì)胞的分化, 可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。
目的 探討移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）對(duì)肺氣腫大鼠慢性炎癥的調(diào)控作用。方法 煙熏法復(fù)制大鼠肺氣腫模型。攜帶綠色熒光蛋白（GFP）的慢病毒轉(zhuǎn)染MSC，煙熏大鼠肺內(nèi)輸入轉(zhuǎn)染的MSC（n=4），小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)觀察MSC的分布。36只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、肺氣腫組及MSC干預(yù)組，評(píng)估支氣管肺泡灌洗液（BALF）中細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）檢測(cè)BALF、血清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）水平，比色法檢測(cè)肺組織丙二醛（MDA）含量，測(cè)量平均內(nèi)襯間隔（MLI）評(píng)估肺氣腫改變。結(jié)果 肺內(nèi)輸入MSC 4周后，不同肺葉仍可見(jiàn)存活的MSC。與肺氣腫組相比，MSC干預(yù)組BALF中細(xì)胞總數(shù)、血清和BALF中TNF-α及IL-1β水平、肺組織中MDA含量和MLI均明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.01）。結(jié)論 MSC降低肺氣腫大鼠氣道及全身炎癥介質(zhì)TNF-α和IL-1β的表達(dá)，減輕氣道炎癥和氧化應(yīng)激水平，對(duì)肺氣腫有明顯的治療作用。
目的制備以單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)為載體的姜黃素納米粒(CUR-NPs), 探討姜黃素(CUR)和CUR-NPs逆轉(zhuǎn)香煙提取物(CSE)暴露所致的激素抵抗現(xiàn)象, 比較CUR-NPs和CUR生物學(xué)作用的差異。 方法采用乳化溶劑揮發(fā)法制備CUR-NPs, 激光粒度測(cè)定儀和透射電子顯微鏡分別對(duì)CUR-NPs的粒徑分布和形貌進(jìn)行表征。脂多糖(LPS)刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7, 布地奈德(BUD)(10-10~10-5 mol/L)干預(yù)。LPS+CSE刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7, BUD(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9~10-5 mol/L)、CUR(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)、CUR-NPs(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)干預(yù), 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)巨噬細(xì)胞RAW264.7所分泌的IL-8。CES刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7, BUD(10-7 mol/L)、CUR(10-7、10-6 mol/L)和CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)干預(yù), 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中組蛋白去乙?；?(HDAC2) mRNA的表達(dá), 蛋白免疫印跡(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞中HDAC2蛋白的表達(dá)。共聚焦顯微鏡檢測(cè)巨噬細(xì)胞RAW264.7對(duì)CUR和CUR-NPs內(nèi)CUR的攝取量。 結(jié)果CUR-NPs外觀呈圓形或類圓形, 平均粒徑為(356.4±146.6)nm。與LPS刺激相比, LPS+CSE共刺激時(shí)BUD(10-10~10-5 mol/L)對(duì)IL-8分泌的最大抑制率顯著降低(P < 0.05), 半數(shù)抑制濃度(IC50)顯著增高(P < 0.05)。LPS+CSE共刺激時(shí), 與BUD(10-10~10-5 mol/L)組相比, CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9-10-5 mol/L)組BUD對(duì)IL-8分泌的最大抑制率顯著增高(P < 0.05), IC50顯著降低(P < 0.05)。在LPS+CSE共刺激, CUR和CUR-NPs濃度梯度同為10-9、10-8和10-7 mol/L時(shí), CUR-NPs+BUD(10-7 mol/L)組對(duì)IL-8分泌的抑制率顯著高于CUR+BUD(10-7 mol/L)組(P < 0.05)。CSE刺激后細(xì)胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著降低(P < 0.05);與CSE組相比, CUR(10-7、10-6 mol/L)組及CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)組細(xì)胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達(dá)量顯著增高(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時(shí), CUR-NPs組細(xì)胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達(dá)量高于CUR組(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時(shí), 巨噬細(xì)胞RAW264.7對(duì)CUR-NPs內(nèi)CUR的攝取量顯著高于CUR(P < 0.05)。 結(jié)論CUR及CUR-NPs能夠逆轉(zhuǎn)CSE暴露所致的激素抵抗, CUR-NPs能夠提高細(xì)胞對(duì)CUR的攝取量, 在低濃度梯度情況下, CUR-NPs具有更強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)激素抵抗的作用。
目的 評(píng)價(jià)持續(xù)氣道正壓通氣（CPAP）治療阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（OSAS）患者的主觀嗜睡程度和心理變化。方法 計(jì)算機(jī)檢索截止至2007年發(fā)表的文獻(xiàn)（MEDLINE、EMBASE、CBMdisk等），分析符合條件的9項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）中的Epworth嗜睡量表及有關(guān)心理評(píng)估量表的結(jié)果。由2名評(píng)價(jià)者獨(dú)立對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，并提取資料，如有分歧，通過(guò)討論解決。采用RevMan4.2進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 9項(xiàng)RCT共納入665例患者。Meta分析顯示，CPAP治療后的Epworth嗜睡量表評(píng)分分值降低[－2.94，95%CI（－4.68，－1.20），隨機(jī)效應(yīng)模型]，一般健康狀況量表-28的分值降低[－2.26，95%CI（－3.79，－0.72），固定效應(yīng)模型]，而合并分析醫(yī)院焦慮抑郁量表的分值變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 依據(jù)現(xiàn)有的臨床證據(jù)，應(yīng)用CPAP后OSAS患者的日間主觀嗜睡程度和整體的精神健康狀況得以改善，但對(duì)緩解患者焦慮和抑郁情緒則無(wú)明顯效果。