目的 研究支氣管哮喘模型小鼠肺組織及肺T 細胞中三種β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) RFNG、LFNG、MFNG 的基因和蛋白表達的特點, 探討Fringe 是否與哮喘發(fā)病有關(guān)。方法 使用卵白蛋白腹腔注射后霧化吸入法制備BALB/ c 小鼠哮喘模型, 并設(shè)置生理鹽水對照組。經(jīng)Perco1 及尼龍毛法分離獲取肺T 細胞。采用半定量RT-PCR 檢測兩組小鼠肺組織及肺T 細胞中RFNG、LFNG、MFNG mRNA 表達;Western blot 檢測兩組小鼠肺組織中RFNG、LFNG、MFNG 蛋白表達。結(jié)果 兩組小鼠肺組織及肺T 細胞中均存在三種Fringe 表達。哮喘組肺組織及肺T 細胞的RFNGmRNA 表達較對照組增加( 肺組織: 0. 92 ±0. 35 比0. 51 ±0. 13, Plt;0. 01; 肺T 細胞: 0. 33 ±0. 06 比0. 18 ±0. 07, Plt; 0. 01) ; LFNG mRNA 表達較對照組減少( 肺組織: 0. 77 ±0. 32 比1. 61 ±0. 31, Plt;0. 01; 肺T細胞: 0. 49 ±0. 19 比0. 71 ±0. 03, P lt;0. 01) 。MFNG 在肺組織中的表達無明顯差異( 肺組織: 1. 44 ±0. 29 比1. 70 ±0. 44, P gt; 0. 05) , 但MFNG 在肺T 細胞中的表達明顯減少( 0. 11 ±0. 03 比0. 52 ±0. 18, P lt; 0. 01) 。肺組織中三種Fringe 蛋白表達與肺組織的mRNA 結(jié)果相似。哮喘組的RFNG 蛋白表達高于對照組( 1. 17 ±0. 04 比0. 68 ±0. 07, P lt; 0. 05) , MFNG 蛋白表達在兩者之間沒有明顯的差異( 8. 10 ±0. 60 比9. 12 ±0. 07, P gt; 0. 05) , 而LFNG 的蛋白表達則低于對照組( 4. 11 ±0. 38比6. 41 ±0. 11, P lt;0. 05) 。結(jié)論 三種Fringe 的異常表達可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。
目的 利用CT 肺動脈造影( CTPA) 的CT 肺動脈阻塞指數(shù)( CTI) 定量化分析肺栓塞( PE) 患者肺動脈阻塞的嚴重程度。方法 以CTPA 發(fā)現(xiàn)肺動脈內(nèi)栓子確診PE 患者。采用CTI 評價肺動脈阻塞程度。采用Spearman 等級相關(guān)評價CTI 與動脈血氣和休克指數(shù)( SI) 的相關(guān)性。采用Mann-Whitney U檢驗來評價不同CTI( 30% 、40%、50% 及60% ) 截斷值上下PE 患者的動脈血氣及SI的差異。結(jié)果 共納入臨床懷疑PE 的患者84 例, 經(jīng)CTPA 檢查確診PE 患者27 例。PE 患者CTI 與PaO2 ( r = - 0. 416, P =0. 031) 、P( A-a) O2 ( r =0. 468, P =0. 014) 有顯著相關(guān)性, 與PaCO2 、SI 無明顯相關(guān)性。取CTI 60% 為截斷值時, 不同CTI 值PE 患者的PaO2、P( A-a) O2 差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P lt; 0. 05) 。結(jié)論 CTI 與PaO2、P( A-a) O2水平呈顯著相關(guān)性, 可用于肺栓塞嚴重度的評估。CTI 超過60% 表示肺通氣及換氣功能受損更為嚴重。
目的 探討引起醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( MRSA) 的基因多態(tài)性。方法 2007 年1 月至2008 年1 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院住院診斷為醫(yī)院獲得性MRSA 肺炎患者74 例, 對所得82 株菌株進行隨機擴增DNA 的多態(tài)性( RAPD) 基因分型。結(jié)果 82 株MRSA經(jīng)電泳得到2 ~15 條片段, 經(jīng)聚類分析可分為11 個基因型。從重癥監(jiān)護室( ICU) 病例中分離所得的菌株, 主要為Ⅲ、Ⅵ型和Ⅶ型( 32. 56% 、30. 23% 和13. 95% ) 。從老年科、急診科和呼吸科病例中分離所得的菌株, 除有各自相對獨立的基因型外, 同時還有與ICU所得菌株重疊的基因型存在。其余臨床科室病例所分離的MRSA 菌株數(shù)量較少, 分布也較分散與獨立。暴發(fā)和聚集性病例共占48. 65% ( 36/ 74) , 所有暴發(fā)病例均發(fā)生于ICU 病區(qū)內(nèi)。結(jié)論 院內(nèi)獲得性MRSA 肺炎易于播散,特別是在ICU可發(fā)生小范圍的暴發(fā)。隨機擴增DNA 的多態(tài)性分型對及早識別高危患者、預(yù)防MRSA在院內(nèi)的播散具有價值。
目的 探討醫(yī)院獲得性肺炎的銅綠假單胞菌氟喹諾酮耐藥決定域( QRDR) 基因突變及其與臨床用藥的關(guān)系。方法 對2006 年1 月至2007 年12 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院醫(yī)院獲得性肺炎患者痰中分離得到的銅綠假單胞菌84 株, 采用限制性長度多態(tài)性分析( RFLP) 結(jié)合基因測序檢測所得菌株QRDR 的基因突變, 并結(jié)合臨床用藥情況進行分析。結(jié)果 50 株耐藥菌經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)QRDR 區(qū)存在突變42 株, 占84. 0% 。GyrB Ser464 發(fā)生突變34 株, 占68. 0% 。GyrB Ser464 突變組與非突變組比較, 對應(yīng)的患者分離菌株之前使用β-內(nèi)酰胺類的情況存在差異( OR =11. 3, P = 0. 003及OR=3. 5, P = 0. 023) 。喹諾酮類藥物在采集前30 d 內(nèi)的使用時間也存在差異( P = 0. 038) 。結(jié)論 銅綠假單胞菌對喹諾酮的耐藥性與QRDR 區(qū)突變的發(fā)生相一致, 耐藥菌株突變類型以GyrB Ser464突變?yōu)橹? 可能與喹諾酮類和β-內(nèi)酰胺類的使用有關(guān)。
目的 探討COPD 大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞( AECⅡ) 炎癥因子表達是否與組蛋白修飾有關(guān)。方法 熏煙法建立大鼠COPD 模型。取大鼠肺組織進行病理觀察, 提取AECⅡ 進行堿性磷酸酶染色鑒定和電鏡鑒定; 實時定量PCR 檢測AECⅡ 三種趨化因子: 單核細胞趨化蛋白1( MCP-1) 、IL-8及巨噬細胞炎性蛋白2α( MIP-2α) 的mRNA 表達; Western blot 檢測組蛋白去乙酰化酶2( HDAC2) 蛋白表達; 染色質(zhì)免疫共沉淀( ChIP) 檢測趨化因子啟動子區(qū)組蛋白H3、H4 乙?;虷4K9甲基化修飾情況。結(jié)果 COPD 組IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達較正常對照組分別增加4. 48 倍、3. 14 倍、2. 83 倍; COPD組AECⅡ細胞HDAC2 蛋白表達較正常對照組降低( 0. 25 ±0. 15 比0. 66 ±0. 15,P lt;0. 05) , 且HDAC2 的下降程度與IL-8、MCP-1、MIP-2αmRNA 表達增高程度呈負相關(guān)( r 值分別為- 0. 960、- 0. 914、- 0. 928, P 均lt;0. 05) 。COPD 組趨化因子基因啟動子區(qū)H3、H4 乙酰化水平較正常對照組均升高, H4K9 甲基化水平則降低( P 均lt; 0. 05) 。結(jié)論 COPD 模型大鼠AECⅡ的IL-8、MCP-1、MIP-2α三種趨化因子基因表達增加, HDAC2 介導(dǎo)的組蛋白修飾在COPD炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。
目的 在支氣管哮喘大鼠模型中采用siRNA 干擾肺CD4 + T 細胞β1, 3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶( Fringe) 亞型Rfng 基因的表達, 探討Rfng 對哮喘T細胞分化的影響。方法 用卵白蛋白( OVA)致敏并激發(fā)建立哮喘大鼠模型。提取哮喘大鼠肺T 細胞, 并用免疫磁珠分離純化CD4 + T淋巴細胞。用Rfng 特異的siRNA 片段干擾哮喘大鼠CD4 + T 淋巴細胞高表達的Rfng 基因。定量PCR 和Westernblot 檢測Rfng 的表達。定量PCR 檢測Th1/Th2 型細胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5, 以及核轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3。ELISA 檢測細胞培養(yǎng)上清液中的Th1 /Th2 型細胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-5。結(jié)果 siRNA干擾哮喘大鼠肺CD4 + T 淋巴細胞后, 定量PCR 和Western blot 檢測發(fā)現(xiàn)siRNA 干預(yù)組中RfngmRNA 和蛋白表達明顯降低。在siRNA 干預(yù)組中, Th1 型細胞因子IFN-γ、IL-12 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子T-bet 的mRNA 表達明顯升高, Th2 型細胞因子IL-4、IL-5 以及上游核轉(zhuǎn)錄因子GATA3 的mRNA 表達明顯降低。ELISA 檢測細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ、IL-12 明顯升高, IL-4、IL-5 明顯降低。結(jié)論 Rfng基因表達的改變影響了T細胞的分化, 可能與支氣管哮喘的發(fā)病有關(guān)。
目的 探討移植骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)對肺氣腫大鼠慢性炎癥的調(diào)控作用。方法 煙熏法復(fù)制大鼠肺氣腫模型。攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的慢病毒轉(zhuǎn)染MSC,煙熏大鼠肺內(nèi)輸入轉(zhuǎn)染的MSC(n=4),小動物活體成像系統(tǒng)觀察MSC的分布。36只SD大鼠隨機分為對照組、肺氣腫組及MSC干預(yù)組,評估支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)和分類計數(shù),雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測BALF、血清中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素1β(IL-1β)水平,比色法檢測肺組織丙二醛(MDA)含量,測量平均內(nèi)襯間隔(MLI)評估肺氣腫改變。結(jié)果 肺內(nèi)輸入MSC 4周后,不同肺葉仍可見存活的MSC。與肺氣腫組相比,MSC干預(yù)組BALF中細胞總數(shù)、血清和BALF中TNF-α及IL-1β水平、肺組織中MDA含量和MLI均明顯減低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Plt;0.01)。結(jié)論 MSC降低肺氣腫大鼠氣道及全身炎癥介質(zhì)TNF-α和IL-1β的表達,減輕氣道炎癥和氧化應(yīng)激水平,對肺氣腫有明顯的治療作用。
目的制備以單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)為載體的姜黃素納米粒(CUR-NPs), 探討姜黃素(CUR)和CUR-NPs逆轉(zhuǎn)香煙提取物(CSE)暴露所致的激素抵抗現(xiàn)象, 比較CUR-NPs和CUR生物學(xué)作用的差異。 方法采用乳化溶劑揮發(fā)法制備CUR-NPs, 激光粒度測定儀和透射電子顯微鏡分別對CUR-NPs的粒徑分布和形貌進行表征。脂多糖(LPS)刺激巨噬細胞RAW264.7, 布地奈德(BUD)(10-10~10-5 mol/L)干預(yù)。LPS+CSE刺激巨噬細胞RAW264.7, BUD(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9~10-5 mol/L)、CUR(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)、CUR-NPs(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)干預(yù), 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測巨噬細胞RAW264.7所分泌的IL-8。CES刺激巨噬細胞RAW264.7, BUD(10-7 mol/L)、CUR(10-7、10-6 mol/L)和CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)干預(yù), 實時定量PCR檢測細胞中組蛋白去乙?;?(HDAC2) mRNA的表達, 蛋白免疫印跡(Western blot)檢測細胞中HDAC2蛋白的表達。共聚焦顯微鏡檢測巨噬細胞RAW264.7對CUR和CUR-NPs內(nèi)CUR的攝取量。 結(jié)果CUR-NPs外觀呈圓形或類圓形, 平均粒徑為(356.4±146.6)nm。與LPS刺激相比, LPS+CSE共刺激時BUD(10-10~10-5 mol/L)對IL-8分泌的最大抑制率顯著降低(P < 0.05), 半數(shù)抑制濃度(IC50)顯著增高(P < 0.05)。LPS+CSE共刺激時, 與BUD(10-10~10-5 mol/L)組相比, CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9-10-5 mol/L)組BUD對IL-8分泌的最大抑制率顯著增高(P < 0.05), IC50顯著降低(P < 0.05)。在LPS+CSE共刺激, CUR和CUR-NPs濃度梯度同為10-9、10-8和10-7 mol/L時, CUR-NPs+BUD(10-7 mol/L)組對IL-8分泌的抑制率顯著高于CUR+BUD(10-7 mol/L)組(P < 0.05)。CSE刺激后細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量顯著降低(P < 0.05);與CSE組相比, CUR(10-7、10-6 mol/L)組及CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)組細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量顯著增高(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時, CUR-NPs組細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量高于CUR組(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時, 巨噬細胞RAW264.7對CUR-NPs內(nèi)CUR的攝取量顯著高于CUR(P < 0.05)。 結(jié)論CUR及CUR-NPs能夠逆轉(zhuǎn)CSE暴露所致的激素抵抗, CUR-NPs能夠提高細胞對CUR的攝取量, 在低濃度梯度情況下, CUR-NPs具有更強的逆轉(zhuǎn)激素抵抗的作用。
目的 評價持續(xù)氣道正壓通氣(CPAP)治療阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)患者的主觀嗜睡程度和心理變化。方法 計算機檢索截止至2007年發(fā)表的文獻(MEDLINE、EMBASE、CBMdisk等),分析符合條件的9項隨機對照試驗(RCT)中的Epworth嗜睡量表及有關(guān)心理評估量表的結(jié)果。由2名評價者獨立對納入文獻進行質(zhì)量評價,并提取資料,如有分歧,通過討論解決。采用RevMan4.2進行Meta分析。結(jié)果 9項RCT共納入665例患者。Meta分析顯示,CPAP治療后的Epworth嗜睡量表評分分值降低[-2.94,95%CI(-4.68,-1.20),隨機效應(yīng)模型],一般健康狀況量表-28的分值降低[-2.26,95%CI(-3.79,-0.72),固定效應(yīng)模型],而合并分析醫(yī)院焦慮抑郁量表的分值變化無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 依據(jù)現(xiàn)有的臨床證據(jù),應(yīng)用CPAP后OSAS患者的日間主觀嗜睡程度和整體的精神健康狀況得以改善,但對緩解患者焦慮和抑郁情緒則無明顯效果。