目的 系統(tǒng)評(píng)價(jià)我國(guó)銅綠假單胞菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的相關(guān)耐藥機(jī)制。方法 計(jì)算機(jī)檢索CNKI、WanFang Data、CBM、VIP、PubMed、EMbase和The Cochrane Library數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)限均從建庫(kù)至2012年12月，查找來(lái)自中國(guó)的有關(guān)銅綠假單胞菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥機(jī)制研究的相關(guān)文獻(xiàn)。按照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)后，采用RevMan 5.0軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果 共納入19篇文獻(xiàn)，合計(jì)723株耐喹諾酮類(lèi)銅綠假單胞菌。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：gyrA、gyrB、parC和parE基因檢出率在淮河以北地區(qū)分別為88.0%、13.3%、31.4%和16.7%；在淮河以南地區(qū)分別為64.6%、50.0%、35.4%和11.5%。質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥基因aac（6’）-Ib-cr淮河以北地區(qū)檢出率為0（0/66），淮河以南地區(qū)檢出率則為39%（25/64），主動(dòng)泵出系統(tǒng)表達(dá)率為68.1%。結(jié)論 在我國(guó)，銅綠假單胞菌耐喹諾酮類(lèi)藥物的機(jī)制以gyrA基因突變?yōu)橹鳎渲鲃?dòng)泵出系統(tǒng)是重要的耐藥機(jī)制，而DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ的異常及質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥是次要機(jī)制。
目的 探討聯(lián)合使用DNA甲基化酶抑制劑（DNA methyltransferase inhibitor, DNMTi）和組蛋白脫乙?；敢种苿╤istone deacetylase inhibitor, HDACi）干預(yù)膽管癌細(xì)胞后，對(duì)E-cadherin 基因的表達(dá)和細(xì)胞侵襲力的影響。方法 根據(jù)給予膽管癌細(xì)胞不同的處理方法分為4組： 空白對(duì)照組、肼屈嗪組、丙戊酸組和肼屈嗪+丙戊酸組，用RT-PCR、Western blot檢測(cè)E-cadherin基因和蛋白的表達(dá)，用Transwell法檢測(cè)細(xì)胞體外侵襲、轉(zhuǎn)移力。結(jié)果 空白對(duì)照組和丙戊酸組E-cadherin 基因和蛋白均無(wú)表達(dá)，肼屈嗪+丙戊酸組E-cadherin基因和蛋白表達(dá)量均明顯高于肼屈嗪組（ P ＜ 0.01）； 同時(shí)肼屈嗪+丙戊酸組細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移力較空白對(duì)照組、丙戊酸組和肼屈嗪組明顯下降（ P ＜ 0.01）。結(jié)論 DNMTi與HDACi協(xié)同恢復(fù)E-cadherin基因的表達(dá)，降低細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移力，對(duì)于膽管癌的治療有著重要的作用
【摘要】目的以人甲狀腺未分化癌細(xì)胞系TAK建立的人甲狀腺未分化癌裸鼠皮下移植模型為對(duì)象，研究裸鼠肌肉內(nèi)電轉(zhuǎn)染對(duì)移植瘤的作用。方法將皮下移植腫瘤的裸鼠分為5組： 空白對(duì)照組、pcDNA-3質(zhì)粒肌肉電轉(zhuǎn)染組、TIMP-3質(zhì)粒肌肉注射組、TIMP-3質(zhì)粒肌肉電轉(zhuǎn)染組及TIMP-3質(zhì)粒腫瘤電轉(zhuǎn)染組。肌肉電轉(zhuǎn)染采用的參數(shù)是電場(chǎng)強(qiáng)度為200 V/cm，脈沖時(shí)值為20 ms，8次，1 Hz； 腫瘤內(nèi)電轉(zhuǎn)染采用的參數(shù)是電場(chǎng)強(qiáng)度為600 V/cm，脈沖時(shí)值為20 ms，1次，1 Hz。結(jié)果TIMP-3質(zhì)粒肌肉內(nèi)電轉(zhuǎn)染組和TIMP-3質(zhì)粒腫瘤內(nèi)電轉(zhuǎn)染組腫瘤生長(zhǎng)受到抑制，與另外3組相比腫瘤生長(zhǎng)速度明顯減緩(P＜0.05)，且兩組腫瘤組織中TIMP-3蛋白量過(guò)度表達(dá)。結(jié)論抑癌基因可通過(guò)肌肉內(nèi)DNA電轉(zhuǎn)染起到抗腫瘤效果。
目的觀察反義DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b（DNMT3b）基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染對(duì)人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因表達(dá)的影響。方法構(gòu)建反義DNMT3b基因真核表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到人膽管癌細(xì)胞株QBC-939中，G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，PCR鑒定外源性neoR基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)以確定轉(zhuǎn)染是否成功。半定量RT-PCR觀察轉(zhuǎn)染前后DNMT3b基因mRNA水平的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后DNMT3b蛋白的變化。 結(jié)果反義DNMT3b基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染能使人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因的mRNA水平從0.956±0.053降低至0.209±0.023，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）； 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，DNMT3b蛋白水平從(75.38±3.22)%降低到(29.87±3.46)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論反義DNMT3b基因轉(zhuǎn)染能降低人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因的表達(dá)水平，為研究DNMT3b基因功能及其在膽管癌細(xì)胞中的作用提供了方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的 評(píng)價(jià)DNA含量和肝細(xì)胞肝癌臨床生物學(xué)特性的關(guān)系以及在提示復(fù)發(fā)中的價(jià)值。方法 對(duì)140例肝癌新鮮肝切除標(biāo)本DNA含量用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行分析，同時(shí)收集患者的臨床生物學(xué)特性資料，并且隨訪(fǎng)患者腫瘤復(fù)發(fā)情況。結(jié)果 DNA倍體類(lèi)型和患者年齡相關(guān)（Ｐ＜0.05），和血清AFP水平、腫瘤的大小密切相關(guān)（Ｐ＜0.01）。二倍體肝癌術(shù)后平均隨訪(fǎng)31.2個(gè)月，其術(shù)后復(fù)發(fā)率為23.1%，1年復(fù)發(fā)率為4.3%； 異倍體肝癌平均隨訪(fǎng)時(shí)間為22.6個(gè)月，術(shù)后復(fù)發(fā)率為50.0%，術(shù)后1年復(fù)發(fā)率為37.9%。兩者復(fù)發(fā)差異的Ｐ=0.013，術(shù)后1年復(fù)發(fā)差異的Ｐ=0.002。多因素回歸分析表明，患者肝硬變程度、腫瘤大小及DNA含量為提示肝癌復(fù)發(fā)獨(dú)立因素。結(jié)論 DNA含量增加可以作為提示肝癌高復(fù)發(fā)的獨(dú)立因素。
目的 探討維生素C對(duì)低硒高鎘飼料飼養(yǎng)大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞（AT-Ⅱ）的影響。方法 將72只Wistar大鼠隨機(jī)分為8組（每組9只）：普通飼料對(duì)照組（C1），實(shí)驗(yàn)構(gòu)成飼料對(duì)照組（C2），低硒+高鎘組（第1組），低硒+高鎘+維生素C組（第2組），適量硒+高鎘組（第3組），適量硒+高鎘+維生素C組（第4組），高硒+高鎘組（第5組），高硒+高鎘+維生素C組（第6組）。采用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)分別觀察各組動(dòng)物飼養(yǎng)14周后Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞DNA的改變。結(jié)果 大鼠AT-Ⅱ細(xì)胞DNA損傷率分別為：C1組9.00%，C2組9.20%，第1組34.20%，第2組18.60%，第3組19.00%，第4組14.40%，第5組13.80%，第6組9.40%。第6組大鼠AT-Ⅱ細(xì)胞DNA損傷率與C1組和C2組無(wú)顯著差異（P均gt;0.05）。第4組和第5組AT-Ⅱ細(xì)胞DNA損傷程度較輕。第2組和第3組大鼠AT-Ⅱ細(xì)胞的DNA損傷較重；第1組大鼠肺細(xì)胞的DNA損傷最為嚴(yán)重（Plt;0.01）。結(jié)論 低硒并高鎘可在一定程度上改變Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的DNA生物學(xué)特性，維生素C可以對(duì)抗低硒并高鎘對(duì)Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞所致的這種變化。
目的 探討引起醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌( MRSA) 的基因多態(tài)性。方法 2007 年1 月至2008 年1 月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院住院診斷為醫(yī)院獲得性MRSA 肺炎患者74 例, 對(duì)所得82 株菌株進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增DNA 的多態(tài)性( RAPD) 基因分型。結(jié)果 82 株MRSA經(jīng)電泳得到2 ～15 條片段, 經(jīng)聚類(lèi)分析可分為11 個(gè)基因型。從重癥監(jiān)護(hù)室( ICU) 病例中分離所得的菌株, 主要為Ⅲ、Ⅵ型和Ⅶ型( 32. 56% 、30. 23% 和13. 95% ) 。從老年科、急診科和呼吸科病例中分離所得的菌株, 除有各自相對(duì)獨(dú)立的基因型外, 同時(shí)還有與ICU所得菌株重疊的基因型存在。其余臨床科室病例所分離的MRSA 菌株數(shù)量較少, 分布也較分散與獨(dú)立。暴發(fā)和聚集性病例共占48. 65% ( 36/ 74) , 所有暴發(fā)病例均發(fā)生于ICU 病區(qū)內(nèi)。結(jié)論 院內(nèi)獲得性MRSA 肺炎易于播散,特別是在ICU可發(fā)生小范圍的暴發(fā)。隨機(jī)擴(kuò)增DNA 的多態(tài)性分型對(duì)及早識(shí)別高?；颊?、預(yù)防MRSA在院內(nèi)的播散具有價(jià)值。
目的 了解產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶( ESBLs) 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥情況和基因型, 探討產(chǎn)ESBLs 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌醫(yī)院獲得性肺炎( HAP) 的危險(xiǎn)因素。方法 對(duì)140 例大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌HAP患者( 其中產(chǎn)ESBLs 菌者88 例為陽(yáng)性組, 非產(chǎn)ESBLs 菌者52例為陰性組) 細(xì)菌耐藥情況進(jìn)行分析。通過(guò)病例對(duì)照研究和多因素Logistic 回歸分析產(chǎn)ESBLs 細(xì)菌HAP的危險(xiǎn)因素。對(duì)保留的53 株產(chǎn)ESBLs 菌株以隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA( RAPD) 分型法進(jìn)行基因分型。結(jié)果 產(chǎn)ESBLs 肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs 菌。Logistic 多因素回歸分析結(jié)果表明, 入住ICU天數(shù)延長(zhǎng)、使用三/ 四代頭孢菌素是獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。通過(guò)RAPD 分型, 37株產(chǎn)ESBLs 大腸埃希菌分為27 型, 16 株產(chǎn)ESBLs 肺炎克雷伯菌分為13 型。結(jié)論 入住ICU 時(shí)間、三/ 四代頭孢菌素使用是產(chǎn)ESBLs 細(xì)菌HAP 的主要危險(xiǎn)因素; RAPD 是從分子水平對(duì)耐藥細(xì)菌進(jìn)行流行病學(xué)研究的一種經(jīng)濟(jì)、快速、可靠的基因分型方法。
【摘要】 目的 研究在漢族人群中, 線(xiàn)粒體DNA ( mtDNA) 的單倍群M中mt5351G 和mt6680C基因型與高原肺水腫( HAPE) 易感的相關(guān)性。方法 收集漢族HAPE 患者標(biāo)本206 例, 以及與其匹配的漢族健康對(duì)照標(biāo)本144 例。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性( PCR-RFLP) 的方法確定mtDNA 的單倍群M和N, 通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-高溫連接酶檢測(cè)反應(yīng)( PCR-LDR) 的方法研究在mtDNA 單倍群M中mt5351G、mt6680C 基因型與HAPE 易感的相關(guān)性。結(jié)果 mtDNA 單倍群M和N在HAPE 病例組的頻率分別為49. 0% 和51. 0% , 在對(duì)照組中的頻率分別為47. 2% 和52. 8% , 兩組mtDNA 單倍群M和N的頻率無(wú)顯著差異( P gt;0. 05) 。在mtDNA 單倍群M中, mt5351G 和mt6680C基因型在HAPE 病例組頻率顯著高于其在對(duì)照組中的頻率( 均為12. 0% 比1. 5% , P =0. 016) 。結(jié)論 在單倍群M中mt5351G 和mt 6680C 基因型是漢族人群HAPE 發(fā)病的危險(xiǎn)因素, 是漢族人群HAPE 易感的遺傳標(biāo)記之一。
目的 研究支氣管哮喘模型大鼠肺CD4 + T 細(xì)胞中的Notch1 基因mRNA 表達(dá)水平、Notch1 基因啟動(dòng)子區(qū)DNA 甲基化水平及其甲基化改變的位點(diǎn)。方法 20 只Wistar 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和哮喘組( 每組10 只) , 哮喘組用卵白蛋白( OVA) 致敏并激發(fā)的方法建立哮喘大鼠模型。免疫磁珠分離肺CD4 + T細(xì)胞并進(jìn)行純度鑒定。Real-time PCR 檢測(cè)肺CD4 + T 細(xì)胞Notch1 基因mRNA 表達(dá)水平, 重亞硫酸鹽測(cè)序檢測(cè)Notch1 基因啟動(dòng)子區(qū)DNA 甲基化水平。結(jié)果 哮喘組大鼠肺CD4 + T細(xì)胞中Notch1 基因mRNA 表達(dá)水平為對(duì)照組的( 2. 254 ±0. 403) 倍( P lt; 0. 01) 。哮喘組大鼠肺CD4 + T淋巴細(xì)胞Notch1 基因啟動(dòng)子區(qū)DNA 10 個(gè)位點(diǎn)整體甲基化水平低于對(duì)照組( 0. 150 ±0. 108 比0. 300 ±0. 667, P lt;0. 01) 。結(jié)論 哮喘大鼠肺CD4 + T 細(xì)胞Notch1 基因DNA 低甲基化可能參與了Notch1 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控, 增高了Notch1 基因的表達(dá)量, 從而參與了哮喘的發(fā)病。