目的 研究新生豚鼠心肌缺血 -再灌注時興奮性鳥核苷耦聯(lián)蛋白 α亞基 (Gsα)和抑制性蛋白 α亞基 (Giα)含量的變化以及 St. Thomas 號液和冷血心臟停搏液對這種變化的不同影響。 方法 30只新生豚鼠隨機(jī)分為 3組 ,建立離體心臟左心做功模型 ,組 (n=10 ) :低溫對照 ;組 (n=10 ) :St.Thomas 號液灌注 ;組 (n=10 ) :冷血心臟停搏液灌注。采用 Western印跡雜交法研究 Gsα和 Giα蛋白含量的變化。 結(jié)果 缺血前 3組的 Gsα和 Giα蛋白含量差別均無統(tǒng)計學(xué)意義。缺血后 ,組 和組 Gsα蛋白水平顯著低于缺血前 (Plt;0 .0 1) ,組 較缺血前無明顯降低 (Pgt;0 .0 5 )。再灌注后 ,組 Gsα蛋白與缺血前水平相近 (Pgt;0 .0 5 ) ,且明顯高于組 和組 (Plt;0 .0 1)。缺血后和再灌注后 ,組 的 Giα蛋白含量與缺血前比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義 (Pgt;0 .0 5 ) ,明顯低于組 和組 (Plt;0 .0 1) ;組 和組 仍明顯高于缺血前 (Plt;0 .0 1)?！〗Y(jié)論 更多新生豚鼠心肌 2 0℃缺血 -再灌注時 Gsα蛋白含量明顯降低 ,而 Giα蛋白含量顯著升高。 St. Thomas 號液不能改變這種變化 ,而冷血心臟停搏液可使新生豚鼠心肌再灌注后的 Gsα和 Giα蛋白含量恢復(fù)至缺血前水平。Gsα和 Giα蛋白的平衡遭受破壞可能是未成熟心肌缺血 -再灌注損傷發(fā)生
目的 探索G蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白1(G protein coupledreceptor kinase interacting protein 1, GIT1)的RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)(hairpin)(GIT1-RNAh)對成骨細(xì)胞遷移的影響，并分析其機(jī)制。方法 取培養(yǎng)至第6代的鼠成骨細(xì)胞，隨機(jī)分成兩組，分別用包含GIT1-RNAh(實驗組)和綠色熒光蛋白(green fluoresenceprotein, GFP)的RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)(GFPRNAh)的腺病毒(對照組)感染12 h后，再將每組分成有、無血小板源性生長因子(platelet drived growth factor, PDGF)刺激的兩組。免疫熒光染色方法檢測成骨細(xì)胞內(nèi)源性GIT1蛋白表達(dá)和Paxillin的位置。 Western Blot檢測Paxillin的磷酸化。 構(gòu)建包含藍(lán)色熒光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)實驗組和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(對照組)， 免疫熒光雙染的方法檢測CFP-GIT1-RNAh和 CFP-GFP-RNAh對Paxillin位置的特異性作用。 用劃痕愈合法檢測GIT1-RNAh(實驗組)和GFP-RNAh(對照組) 腺病毒對成骨細(xì)胞在PDGF刺激下的遷移能力的影響。結(jié)果 免疫組織化學(xué)觀察，實驗組和對照組比較，明顯抑制成骨細(xì)胞內(nèi)源性的GIT1蛋白表達(dá)和擾亂Paxillin的分布。 Western Blot觀察，和對照組相比，實驗組明顯抑制了Paxiliin的磷酸化(P＜0.05)。劃痕愈合法檢測觀察，和對照組相比，實驗組明顯抑制成骨細(xì)胞的遷移。結(jié)論 GIT1-RNAh通過擾亂Paxillin的分布和其磷酸化從而抑制成骨細(xì)胞的遷移。
【摘要】 中介素（intermedin，IMD）又稱腎上腺髓質(zhì)素2，是降鈣素基因相關(guān)肽超家族的一員。IMD能夠無選擇性作用于降鈣素受體樣受體/受體活化修飾蛋白復(fù)合物，通過受體復(fù)合物上G蛋白的變構(gòu)，激活下游的效應(yīng)酶及離子通道，再進(jìn)一步發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。IMD的作用廣泛，其對血管的作用主要包括血管生成作用、外周血管擴(kuò)張作用、中樞升壓作用及抗血管鈣化作用；其對心臟的作用主要包括正性肌力作用、正性頻率作用、抗心肌肥厚的作用等。
全身麻醉的應(yīng)用已有170多年歷史,然而其機(jī)制仍不清楚。同樣不清楚的問題還有麻醉藥是否會對機(jī)體產(chǎn)生不利影響。目前有一些關(guān)于全麻藥對機(jī)體影響的報道,但有關(guān)G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)方面的研究較為少見。通過比對和種系發(fā)生分析,我們在水蚤中鑒定了18個GPCR基因,包括代謝型GABAB受體、代謝性谷氨酸受體、腎上腺素能受體、5-羥色胺受體、多巴胺受體和毒蕈堿型受體。我們成功檢測到這些基因的表達(dá),并通過熒光定量PCR技術(shù)觀察到了異丙酚、依托咪酯和酒精對這18個GPCR基因表達(dá)的影響。
Ras同源蛋白（Rho）/Rho激酶（ROCK）通路是廣泛存在于人和哺乳動物細(xì)胞內(nèi)的一種信號傳導(dǎo)通路，與視神經(jīng)損害后修復(fù)受抑制密切相關(guān)。視神經(jīng)損傷后，活化的Rho水平升高，ROCK表達(dá)上調(diào)，并激活其下游一系列串聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生抑制軸突延伸和神經(jīng)修復(fù)的效應(yīng)；而ROCK抑制劑可阻斷這一過程，促進(jìn)損傷視神經(jīng)的修復(fù)，保護(hù)受損視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并促進(jìn)軸突再生和延伸，還能抑制瘢痕形成、降低眼壓以及可能存在一定的抗炎作用。目前，部分種類的ROCK抑制劑已投入臨床使用，其應(yīng)用價值日益凸顯，有望成為視神經(jīng)疾病的新一代治療藥物。
目的檢測肝內(nèi)膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）患者癌組織中膽汁酸 G 蛋白偶聯(lián)受體 5（takeda G protein-coupled receptor 5，TGR5）和熱休克蛋白 75 的表達(dá)情況，探討二者與患者預(yù)后的關(guān)系。方法選取 2015 年 3 月至 2018 年 3 月期間濮陽市安陽地區(qū)醫(yī)院收治住院并行手術(shù)治療的 ICC 患者 94 例作為研究對象，采用免疫組織化學(xué)法及 Western blot（WB）法檢測 ICC 癌組織及其癌旁組織中 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 的表達(dá)情況，分析 ICC 癌組織中 TGR5 蛋白及熱休克蛋白 75 表達(dá)情況與 ICC 臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系；并采用多因素 Cox 比例風(fēng)險回歸分析 ICC 患者預(yù)后不良的危險因素，采用 ROC 曲線分析 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 表達(dá)水平對 ICC 患者預(yù)后不良的診斷價值。結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，ICC 癌組織中 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 表達(dá)陽性率均高于癌旁組織（P<0.05）。WB 結(jié)果顯示，ICC 癌組織中 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 相對表達(dá)量高于癌旁組織（P<0.05）。ICC 患者癌組織中 TGR5 蛋白的表達(dá)與患者性別、腫瘤直徑、分化程度、TNM 分期、衛(wèi)星灶和肝硬變相關(guān)（P<0.05）；熱休克蛋白 75 的表達(dá)與腫瘤直徑、TNM 分期、神經(jīng)受累、衛(wèi)星灶和肝硬變相關(guān)（P<0.05）。預(yù)后不良組和預(yù)后良好組患者在性別、腫瘤直徑、TNM 分期、微血管侵犯、衛(wèi)星灶、肝硬變以及 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 表達(dá)情況方面比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。TGR5 蛋白表達(dá)陽性患者的累積 3 年總生存率（32.00%）低于 TGR5 蛋白表達(dá)陰性患者（63.16%），χ2=6.228，P=0.013；熱休克蛋白 75 表達(dá)陽性患者的累積 3 年總生存率（32.91%）低于熱休克蛋白 75 表達(dá)陰性患者（66.67%），χ2=6.079，P=0.014。多因素 Cox 比例風(fēng)險回歸分析結(jié)果顯示，TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 表達(dá)陽性、TNM Ⅲ+Ⅳ期以及有衛(wèi)星灶和肝硬變?yōu)?ICC 患者預(yù)后不良的危險因素（P<0.05）。ROC 結(jié)果顯示，以 TGR5 蛋白表達(dá)水平 0.932 為截斷值，診斷 ICC 患者預(yù)后不良的AUC為 0.783，敏感度為 72.4%，特異度為 72.2%；以熱休克蛋白 75 表達(dá)水平 0.756 為截斷值，診斷 ICC 患者預(yù)后不良的AUC為 0.805，敏感度為 84.4%，特異度為 63.9%；二者聯(lián)合診斷 ICC 患者預(yù)后不良的AUC為 0.884，敏感度為 79.3%，特異度為 83.3%。結(jié)論ICC 患者癌組織中 TGR5 蛋白和熱休克蛋白 75 高表達(dá)均與患者預(yù)后不良有關(guān)，是患者預(yù)后不良的危險因素，二者聯(lián)合檢測對預(yù)測預(yù)后不良具有一定價值，可作為潛在的生物學(xué)指標(biāo)。
目的觀察G蛋白抑制性α亞單位（Gαi）1和Gαi3對神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子-1（NTN1）誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和血管生成的影響，探討其可能機(jī)制。方法采用隨機(jī)數(shù)字表法將20只6～8周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對照組、糖尿病組，每組各10只。糖尿病組通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型。造模12周后采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測各組小鼠視網(wǎng)膜中Ntn1、Gαi1、Gαi3的mRNA和蛋白相對表達(dá)量。采用隨機(jī)數(shù)字表法將35只2周齡雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為正常對照組、玻璃體腔注射NTN1組（NTN1組）、視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞Gαi1/Gαi3特異性敲低+玻璃體腔注射NTN1組（Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組），其中正常對照組、NTN1組每組各15只，Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組5只。采用同工凝集素B4染色法觀察各組小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成情況。將體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）分為陰性對照慢病毒組（shC組）、陰性對照慢病毒+NTN1處理組（shC+NTN1組）、Gαi1/Gαi3敲低組（shGαi1/Gαi3組）、Gαi1/Gαi3敲低+NTN1處理組（shGαi1/Gαi3+NTN1組）。采用EdU染色檢測NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC增殖的影響；Transwell實驗測定NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC遷移能力的影響；Matrigel實驗檢測NTN1、Gαi1、Gαi3對HUVEC管腔形成能力的影響。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測HUVEC中蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖體蛋白S6激酶（S6K）、磷酸化S6K（p-S6K）、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Erk1/2）、磷酸化Erk1/2（p-Erk1/2）蛋白表達(dá)量。兩組間比較采用t檢驗；三組間比較采用單因素方差分析；多因素比較采用事后Dunnett檢驗。結(jié)果與正常對照組比較，糖尿病組小鼠視網(wǎng)膜組織中Ntn1、Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=11.800、9.298、10.620、7.503、3.432、8.037，P＜0.000 1）。與shC組比較，shGαi1/Gαi3組HUVEC中Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.310、16.300、13.600、9.068，P＜0.000 1）。HUVEC增殖率、遷移數(shù)量、管腔形成數(shù)量：與shC組比較，shC+NTN1組顯著增加，而shGαi1/Gαi3組及shGαi1/Gαi3+NTN1組顯著減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=62.750、49.830、54.900，P＜0.000 1）。與正常對照組比較，Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組視網(wǎng)膜中Gαi1、Gαi3 mRNA和蛋白相對表達(dá)量顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=10.920、13.460、9.219、10.500，P＜0.000 1）。視網(wǎng)膜新生血管形成面積：與正常對照組相比，NTN1組顯著增加，而Gαi1/Gαi3 eKD+NTN1組顯著減小，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=24.010，P＜0.000 1）。p-Akt相對Akt、p-S6K相對S6K、p-Erk1/2相對Erk1/2蛋白相對表達(dá)量：與shC組相比，shC+NTN1組顯著增加，而shGαi1/Gαi3組及shGαi1/Gαi3+NTN1組顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=78.610、144.400、77.010，P＜0.000 1）。結(jié)論NTN1誘導(dǎo)Gαi1/Gαi3介導(dǎo)下游Akt-哺乳動物雷帕霉素靶蛋白和Erk1/2的激活，從而在體內(nèi)和體外環(huán)境中促進(jìn)血管生成。敲低Gαi1/Gαi3能夠顯著減少NTN1誘導(dǎo)的血管生成效應(yīng)。