目的 探討Ghrelin對大鼠離體胰腺組織胰島素分泌及葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-2 （Glut-2）表達(dá)的影響。方法 將25只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對照組（NC組）、高糖組（HCG組）、高糖＋高濃度Ghrelin （10-8mol/L）組（HCG＋HCGh組）、高糖＋中濃度Ghrelin （10-9mol/L）組（HCG＋MCGh組）及高糖＋低濃度Ghrelin （10-10mol/L）組（HCG＋LCGh組），每組5只。建立大鼠離體胰腺灌注模型，經(jīng)腹主動脈遠(yuǎn)端相應(yīng)灌注低糖 （5.5mmol/L）、單純高糖 （33.3mmol/L） 溶液或加入上述不同濃度Ghrelin的高糖 （33.3mmol/L） 溶液。采用ELISA法測定門靜脈流出液的胰島素水平，采用免疫組化染色方法半定量測定Glut-2蛋白在離體胰腺組織中的表達(dá)水平，采用透射電鏡觀察胰島β細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果 5組大鼠的空腹血漿葡萄糖 （FBG）、空腹血漿胰島素（FINS）、胰島素抵抗指數(shù) （HOMA-IR） 及胰島素分泌指數(shù) （HOMA-β） 比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）。用低糖溶液灌注時，5組大鼠門靜脈流出液的胰島素水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （P＞0.05）；而用高糖溶液灌注后，胰島素的分泌在3min和10～12min時出現(xiàn)了2個高峰 （以HCG＋HCGh組最高）。NC組大鼠胰島β細(xì)胞Glut-2蛋白的平均光密度值高于其余4組 （P＜0.05）。透射電鏡觀察結(jié)果顯示，高糖各組大鼠離體胰腺的凋亡征象較NC組嚴(yán)重，但HCG＋HCGh組的細(xì)胞器損害程度較HCG＋MCGh組及HCG＋LCGh組輕。結(jié)論 在大鼠離體胰腺中，Ghrelin可促進(jìn)高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌，對胰島β細(xì)胞起保護(hù)作用。
目的研究Ghrelin對L6大鼠成肌細(xì)胞在棕櫚酸誘導(dǎo)下的葡萄糖代謝和胰島素敏感性的影響，并探討其可能的機(jī)理。 方法培養(yǎng)L6大鼠成肌細(xì)胞，誘導(dǎo)分化后利用0.3 mmol/L的棕櫚酸作用16 h，實驗組加入不同劑量的Ghrelin（1、10和100 nmol/L）作用8 h，采用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法（GOD-POD）檢測骨骼肌細(xì)胞對葡萄糖的攝取，并在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞膜葡萄糖轉(zhuǎn)運因子-4（GLUT-4）蛋白染色；采用免疫印跡（Western blot）法檢測骨骼肌細(xì)胞中總蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（pAkt）、總糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）蛋白的表達(dá)。 結(jié)果Ghrelin使胰島素抵抗之L6大鼠成肌細(xì)胞葡萄糖攝取量增加，細(xì)胞膜GLUT-4染色加深，pAkt及pGSK-3β蛋白表達(dá)增加（磷酸化表達(dá)增加），而總Akt和總GSK-3β蛋白無明顯變化，這種作用可被PI3K阻斷劑（LY294002）消除。 結(jié)論Ghrelin通過磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β（PI3K/Akt/GSK-3β）信號途徑促進(jìn)L6大鼠成肌細(xì)胞葡萄糖攝取量，從而提高L6大鼠成肌細(xì)胞胰島素的敏感性。
急性肺損傷( ALI) /急性呼吸窘迫綜合征( ARDS) 是多種原因誘發(fā)的發(fā)病機(jī)制相同的綜合征。結(jié)合1994 年美國-歐洲共識會議[ 1 , 2] 及1999 年中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會[ 3 ] 對該綜合征制定的診斷標(biāo)準(zhǔn), 同時符合以下5 項者, 可診斷為ALI 或ARDS: ( 1) 有ALI/ARDS 的高危因素; ( 2) 急性起病、呼吸頻數(shù)和( 或) 呼吸窘迫; ( 3) 低氧血癥: 氧合指數(shù)( PaO2 /FiO2 ) : ALI lt; 300 mm Hg ( 1 mm Hg =0. 133 kPa) , ARDS lt;200 mm Hg; ( 4) 胸部X 線顯示兩肺浸潤陰影; ( 5) 肺動脈楔壓≤18 mm Hg或臨床上能除外心源性肺水腫
目的探討應(yīng)用外源性胃促生長素（ghrelin）對胃大部切除術(shù)后大鼠早期恢復(fù)的影響。方法將12只胃大部切除（畢Ⅰ式）大鼠隨機(jī)均分為2組，分別于腹腔內(nèi)注射生理鹽水或胃促生長素，稱量術(shù)前和術(shù)后1～7 d的大鼠體重和每日攝食量； 術(shù)后第7天處死大鼠，實時熒光定量PCR法測定大鼠胃底組織中胃促生長素mRNA表達(dá)相對量，并檢測吻合口爆破壓和吻合口組織中羥脯氨酸含量。結(jié)果2組大鼠之間術(shù)前及術(shù)后1～7 d體重的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。生理鹽水組大鼠體重術(shù)后逐漸降低，并均明顯低于術(shù)前（Plt;0.01），且在術(shù)后第5天達(dá)到最低（Plt;0.01），后逐漸增加，但仍均低于術(shù)前（Plt;0.01）； 胃促生長素組大鼠體重術(shù)后逐漸降低，除術(shù)后1 d與術(shù)前比較的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.693）外，均明顯低于術(shù)前（Plt;0.01）， 在術(shù)后第4天達(dá)到最低（Plt;0.01），后逐漸增加，但仍均低于術(shù)前（Plt;0.05或Plt;0.01）。胃促生長素組大鼠的累積攝食量為（52.50±6.77） g，明顯高于生理鹽水組大鼠的(45.67±7.47) g，Plt;0.05。術(shù)后第7天胃促生長素組大鼠胃底組織中胃促生長素mRNA表達(dá)相對量為0.08±0.04，明顯低于生理鹽水組大鼠的0.22±0.07（Plt;0.01）。胃促生長素組大鼠吻合口爆破壓為（172.33±10.44） mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）， 明顯高于生理鹽水組的(155.83±6.62) mm Hg，Plt;0.05。胃促生長素組大鼠吻合口組織中羥脯氨酸含量為（0.50±0.29）μg/mg wet tissue，明顯高于生理鹽水組大鼠的(0.43±0.05) μg/mg wet tissue，Plt;0.01。結(jié)論胃促生長素能有效促進(jìn)胃大部切除術(shù)后大鼠的早期恢復(fù)，而外源性胃促生長素的攝入可抑制機(jī)體術(shù)后早期的負(fù)反饋性代償作用。
目的 建立生長激素促分泌素受體(ghrelin receptor，GHS-R)基因敲除小鼠胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）雜合子模型，為研究GHS-R基因的功能奠定基礎(chǔ)。方法 用TK-neo置換原X-pPNT載體的PGK-neo構(gòu)建目標(biāo)載體。以小鼠基因組DNA為模板, 用PCR方法擴(kuò)增2條同源臂，將其按照一定方向裝入含有TK-neo的X-pPNT載體，并測序鑒定。載體線性化及純化后電穿孔轉(zhuǎn)染小鼠ES細(xì)胞，用G418和更昔洛韋(Gancyclovir)對電穿孔轉(zhuǎn)染后的ES細(xì)胞進(jìn)行正、負(fù)篩選培養(yǎng)，得到雙藥抗性ES細(xì)胞，克隆后抽提基因組DNA，分別用PCR方法鑒定2條同源臂，并測序確定成功同源重組的ES細(xì)胞克隆。結(jié)果 改建X-pPNT載體成功，PCR獲得2條同源臂片段，測序正確，并按一定方向裝入打靶載體，ES細(xì)胞轉(zhuǎn)染后經(jīng)雙藥篩選得到328個陽性ES細(xì)胞克隆，PCR及測序鑒定證實3個克隆發(fā)生同源重組。結(jié)論 本研究成功獲得了GHS-R(－/+)雜合子小鼠ES細(xì)胞克隆，為進(jìn)一步通過顯微注射及雜交育種獲得GHS-R基因敲除小鼠打下了基礎(chǔ)。
目的探討Roux-en-Y胃旁路術(shù)（RYGB）改善2型糖尿病大鼠（Goto-Kakizaki大鼠，GK大鼠）骨骼肌胰島素抵抗的可能機(jī)制。 方法30只GK大鼠隨機(jī)分為GK-RYGB組、GK-假手術(shù)組、GK-對照組，另取10只Wistar大鼠作為正常對照組。術(shù)后28 d時處死實驗動物。ELISA法檢測血漿ghrelin濃度，免疫印跡法檢測骨骼肌組織的磷酸化（p）-/總（t）-PI3Kp85α、p-/t-Akt/PKB及細(xì)胞膜（m）-/t-GLUT4蛋白的相對表達(dá)量，實時熒光定量PCR法檢測骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB及GLUT4 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果①血漿ghrelin濃度在正常對照組明顯高于GK-對照組（P＜0.01）和GK-假手術(shù)組（P＜0.01）；GK-RYGB組也明顯高于GK-對照組（P＜0.01）及GK-假手術(shù)組（P＜0.01），但與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。②p-/t-PI3Kp85α、p-/t-Akt/PKB及m-/t-GLUT4蛋白相對表達(dá)量在正常對照組均較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）和GK-假手術(shù)組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）明顯上升；GK-RYGB組亦較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）和GK-假手術(shù)組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）均分別明顯上升。③骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB及GLUT4 mRNA的表達(dá)在正常對照組均較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）和GK-假手術(shù)組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）明顯上升；GK-RYGB組較GK-對照組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）和GK-假手術(shù)組（分別P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）也均分別明顯上升。 結(jié)論①RYGB術(shù)后GK大鼠血漿ghrelin水平顯著升高。②RYGB術(shù)能夠上調(diào)GK大鼠骨骼肌組織中PI3Kp85α、Akt/PKB mRNA和磷酸化蛋白的表達(dá)，并上調(diào)GLUT4的轉(zhuǎn)錄和翻譯，促使更多的GLUT4在細(xì)胞膜表達(dá)，增加骨骼肌組織對葡萄糖的攝取，從而改善骨骼肌組織的胰島素抵抗。
目的探討Roux-en-Y胃旁路術(shù)（Roux-en-Y gastric bypass surgery，RYGB）后2型糖尿?。═2DM）大鼠血清中生長激素釋放肽（Ghrelin）和內(nèi)脂素（Visfatin）水平的變化及其意義。 方法先將30只健康雄性8周齡SD大鼠隨機(jī)分為糖尿病組22只和空白對照組（CSO組）8只。糖尿病組的22只大鼠給予高脂高糖飲食6周后，再腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ），最終成功建立T2DM大鼠模型18只。將建模成功的18只大鼠再隨機(jī)分為RYGB組10只和假手術(shù)組（DSO組）8只。RYGB組大鼠接受RYGB，DSO和CSO大鼠接受假手術(shù)。分別于術(shù)前和術(shù)后4周測定3組大鼠的空腹血糖（FBG）、空腹血清胰島素（FINS）、Ghrelin及Visfatin水平，計算術(shù)后4周時的肥胖指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)（ISI），進(jìn)行組間比較。 結(jié)果相較于術(shù)前，RYGB組大鼠的體質(zhì)量、肥胖指數(shù)、FBG水平、FINS及Visfatin水平均降低（P < 0.050），ISI值和Ghrelin水平升高（P < 0.050），但DSO組和CSO組大鼠手術(shù)前后的體質(zhì)量、體長、肥胖指數(shù)、FBG水平、FINS水平、ISI值、Ghrelin水平及Visfatin水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.050）。此外，3組大鼠手術(shù)前后的Ghrelin和Visfatin水平的差值比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.001），RYGB組的Ghrelin、Visfatin水平的差值較DSO組和CSO組大（P < 0.050），但DSO和CSO組的Ghrelin、Visfatin水平的差值比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.050）。 結(jié)論術(shù)后血清Ghrelin水平的升高和Visfatin水平的降低可能是RYGB治療肥胖型T2DM的重要機(jī)理。