目的 探討不同劑量X線照射對(duì)人結(jié)直腸癌Caco2細(xì)胞系中microRNA-221 （miR-221）和張力蛋白在10號(hào)染色體上同源缺失的磷酸酶（PTEN）表達(dá)的影響。方法 常規(guī)培養(yǎng)Caco2細(xì)胞系并分為5組，分別給予不同劑量（0、2、4、6及8 Gy） 的X射線照射，24 h后提取細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì)，應(yīng)用real-time RT-PCR方法檢測(cè)Caco2細(xì)胞中miR-221和PTEN mRNA的表達(dá)水平，用Western-blot法檢測(cè)PTEN蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 Caco2細(xì)胞系在不同劑量的X線照射下，其miR-221表達(dá)水平隨著照射劑量的增加而增高，呈劑量依賴性（P＜0.01）；PTEN mRNA的表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P＞0.05），但PTEN蛋白表達(dá)水平則隨X線照射劑量的增加而逐漸降低，亦呈劑量依賴效應(yīng)（P＜0.01）。結(jié)論 X線照射劑量可影響結(jié)直腸癌Caco2細(xì)胞中miR-221和PTEN蛋白的表達(dá)。
目的 探討過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）在肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)中的調(diào)節(jié)作用，以及PTEN和磷酸化蛋白激酶B(pAkt)在該過(guò)程中的變化，進(jìn)一步揭示PPARγ調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)理。方法 培養(yǎng)SMMC-7721肝癌細(xì)胞，經(jīng)不同濃度的PPARγ配體15-脫氧-前列腺素J2（15-d-PGJ2）或匹格列酮（pioglitazone）作用不同時(shí)間后，用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析，用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞PTEN mRNA的表達(dá)，用Western blot檢測(cè)細(xì)胞PTEN和pAkt蛋白的表達(dá)。結(jié)果 15-d-PGJ2和 pioglitazone對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖均具有抑制作用，且呈時(shí)間和劑量依賴性，均能增加G0/G1期細(xì)胞的比例，減少S期細(xì)胞的比例，增加SMMC-7721細(xì)胞PTEN mRNA和蛋白的表達(dá)，減少pAkt蛋白的表達(dá)。結(jié)論 PPARγ的配體能夠呈時(shí)間和劑量依賴性地抑制肝癌細(xì)胞的增殖，其機(jī)理可能是部分通過(guò)上調(diào)PTEN的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。
目的系統(tǒng)評(píng)價(jià)PTEN蛋白在胃癌中表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系。 方法計(jì)算機(jī)檢索PubMed、EMbase、中國(guó)知網(wǎng)、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)等，收集國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)表的所有相關(guān)病例對(duì)照研究，檢索時(shí)限均從建庫(kù)至2013年7月24日，同時(shí)追溯納入文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)。由2位研究者按照納入與排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)篩選、資料提取和質(zhì)量評(píng)價(jià)后，應(yīng)用RevMan 5.2軟件進(jìn)行Meta分析。 結(jié)果最終共納入14個(gè)病例對(duì)照研究，其中胃癌組1 026例，正常胃黏膜組539例。Meta分析結(jié)果顯示：PTEN蛋白表達(dá)在胃癌組低于正常胃黏膜組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[OR=0.07，95% CI（0.05，0.10），P＜0.000 01]。PTEN蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系：年齡＜60歲與≥60歲[OR=1.34，95% CI（0.88，2.04），P=0.17]、男性與女性[OR=0.91，95% CI（0.60，1.36），P=0.64]表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在腫瘤直徑＜5 cm與≥5 cm[OR=3.67，95% CI（2.02，6.67），P＜0.000 1]，高、中分化與低、未分化[OR=3.54，95% CI（2.56，4.91），P＜0.000 01]，浸潤(rùn)未超過(guò)漿膜層與超過(guò)漿膜層[OR=3.36，95% CI（2.41，4.67），P＜0.000 01]，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[OR=4.11，95% CI（2.98，5.67），P＜0.000 01]，TNM分期中Ⅰ+Ⅱ期與Ⅲ+Ⅳ期[OR=3.94，95% CI（2.74，5.65），P＜0.000 01]表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論P(yáng)TEN蛋白在胃癌中表達(dá)減低，且其低表達(dá)增加了胃癌惡性行為發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。
目的探討沉默PTEN基因后對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和侵襲影響的機(jī)理。 方法RT-PCR和Westernblot法分析PTEN在4種結(jié)腸癌細(xì)胞株（HT-29、WiDr、CaCo-2、Colo320細(xì)胞）中的表達(dá)，應(yīng)用短基因干擾RNA（siRNA）技術(shù)合成PTEN siRNA并轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞，Western blot法再次檢測(cè)PTEN蛋白在結(jié)腸癌細(xì)胞株的表達(dá)。細(xì)胞增殖和侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)PTEN基因沉默后對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞自身增殖和侵襲能力的影響。 結(jié)果PTEN在4種結(jié)腸癌細(xì)胞株中均有表達(dá)；4種結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染PTEN siRNA后，Western blot法證實(shí)PTEN蛋白表達(dá)明顯被抑制（P＜0.01），結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。 結(jié)論P(yáng)TEN基因的沉默能夠明顯增強(qiáng)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力，增強(qiáng)PTEN基因可為臨床靶向治療結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移提供新途徑。
目的歸納分析當(dāng)前抑癌基因PTEN與甲狀腺腫瘤的相關(guān)研究，深化對(duì)甲狀腺腫瘤發(fā)生及發(fā)展機(jī)理的認(rèn)識(shí)。 方法通過(guò)檢索國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)獲取近年來(lái)與PTEN基因及甲狀腺腫瘤相關(guān)的文獻(xiàn)資料并進(jìn)行綜述。 結(jié)果PTEN基因突變、啟動(dòng)子甲基化等導(dǎo)致PTEN蛋白表達(dá)異常，可導(dǎo)致其下游PI3K、mTOR、FAK等多種信號(hào)分子異常激活，進(jìn)而促進(jìn)甲狀腺良惡性腫瘤的發(fā)生及性質(zhì)演進(jìn)。 結(jié)論P(yáng)TEN基因及其下游信號(hào)通路異常與甲狀腺腫瘤的形成及病理性質(zhì)惡化之間存在相關(guān)性，但目前具體機(jī)理仍未完全明確，仍有待進(jìn)一步研究。
目的檢測(cè)PTEN和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。 方法收集甘肅省天水市第一人民醫(yī)院2012年9月至2015年3月期間手術(shù)切除后經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性甲狀腺癌的石蠟包埋組織40例及術(shù)后離體組織14例，分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法和RT-PCR法檢測(cè)PTEN和Ki-67蛋白和mRNA在甲狀腺癌組織及其相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，并分析PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)與甲狀腺癌患者臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。 結(jié)果① PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在甲狀腺癌組織中明顯低于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率[35.0%（14/40）比60.0%（24/40），P＜0.05]，Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在甲狀腺癌組織中明顯高于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率[72.5%（29/40）比42.5%（17/40），P＜0.05]。② PTEN mRNA表達(dá)相對(duì)灰度值在14例甲狀腺癌標(biāo)本中明顯低于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)（0.225 7±0.036 3比0.503 6±0.037 5，P＜0.05）；Ki-67 mRNA表達(dá)相對(duì)灰度值在14例甲狀腺癌標(biāo)本中明顯高于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)（1.212 1±0.042 1比0.293 6±0.027 4，P＜0.05）。③ PTEN和Ki-67蛋白表達(dá)與甲狀腺癌的組織學(xué)分級(jí)、病理類型、腫瘤分期及有無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與甲狀腺癌患者的性別、年齡及腫瘤包膜是否完整無(wú)關(guān)（P＞0.05）。④ PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌中的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（rs=-0.605，P=0.000），而其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)無(wú)相關(guān)性（rs=-0.021，P=0.899）。 結(jié)論P(yáng)TEN和Ki-67基因在甲狀腺癌組織中異常表達(dá)，其可能與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展及其機(jī)制有一定關(guān)系，二者聯(lián)合可能有助于甲狀腺癌病理類型的鑒別、生物學(xué)行為的判斷和臨床分期，可能作為甲狀腺癌基因診斷、治療的新靶點(diǎn)。
目的探討銀杏內(nèi)酯B（ginkgolide B，GB）對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）/10號(hào)染色體缺失張力蛋白同源的磷酸酶基因（chromosome 10 deletion phosphatase-tension protein homologue，PTEN）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）通路及細(xì)胞增殖凋亡的影響。方法體外培養(yǎng)H9C2細(xì)胞，對(duì)照組用無(wú)血清DMEM高糖培養(yǎng)基在37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)28 h，其余各組制備缺氧/復(fù)氧模型，GB低劑量組和GB高劑量組在缺氧/復(fù)氧前1 h分別用終濃度為50 μmol/L和200 μmol/L的GB預(yù)處理，卡維地洛組在缺氧/復(fù)氧前1 h用終濃度為10 μmol/L的卡維地洛預(yù)處理。檢測(cè)H9C2細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡，同時(shí)檢測(cè)H9C2細(xì)胞中乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）、PTEN、Akt、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和Caspase-3水平。結(jié)果與對(duì)照組比較，其余各組H9C2細(xì)胞增殖率、PTEN、Akt和p-Akt水平降低，細(xì)胞凋亡率、LDH、MDA、ROS和Caspase-3水平升高（P<0.05）；與缺氧復(fù)氧組比較，各GB劑量組和卡維地洛組H9C2細(xì)胞增殖率、PTEN、Akt和p-Akt水平升高，細(xì)胞凋亡率、LDH、MDA、ROS和Caspase-3水平降低，各GB劑量組呈劑量依賴性，但GB的作用強(qiáng)度不如卡維地洛（P<0.05）。結(jié)論GB通過(guò)激活Caspase-3/PTEN/Akt通路，抑制缺氧/復(fù)氧H9C2細(xì)胞凋亡，促進(jìn)H9C2細(xì)胞增殖。
本研究旨在探究PTEN誘導(dǎo)激酶1短亞型(PINK1S)在細(xì)胞質(zhì)中激酶活性調(diào)節(jié)機(jī)制。首先,通過(guò)免疫共沉淀篩選的方法證明PINK1S能夠和酪蛋白激酶2(CK2)蛋白復(fù)合體中的β亞基(CK2β)相互結(jié)合,但不與其他兩個(gè)催化亞基α1 (CK2α1)和α2 (CK2α2)結(jié)合。其次,同時(shí)過(guò)表達(dá)CK2β和PINK1S,利用免疫共沉淀的方法純化PINK1S,將得到的PINK1S用生物素標(biāo)記的磷酸化蛋白檢測(cè)標(biāo)簽(Phos-tagTM Biotin)檢測(cè)其磷酸化水平,發(fā)現(xiàn)CK2β能夠促進(jìn)PINK1S的自我磷酸化。最后,利用RNA干擾技術(shù),建立干擾CK2β的細(xì)胞株;在對(duì)照組和干擾CK2β的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)表達(dá)PINK1S,發(fā)現(xiàn)缺少CK2β表達(dá)導(dǎo)致PINK1S的磷酸化水平降低。本文研究表明:CK2β作為胞質(zhì)PINK1S自我磷酸化的輔助亞基,對(duì)其活性起到正調(diào)節(jié)作用。