目的 觀察細胞周期蛋白依賴激酶5（Cdk5）和p25在不同病程皇家外科學(xué)院（RCS）大鼠視網(wǎng)膜色素變性（RP）模型視網(wǎng)膜中的表達及與細胞凋亡的關(guān)系，探討Cdk5/p25介導(dǎo)的光感受器細胞凋亡在RP發(fā)病過程中的作用。 方法 取RCS RP大鼠（RCS大鼠）及正常對照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日齡視網(wǎng)膜，光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)，測量外核層厚度；利用免疫組織化學(xué)染色法觀察視網(wǎng)膜中Cdk5、p25和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleave-caspase 3）的表達和變化；采用Western blot法測定視網(wǎng)膜中cleave-caspase 3的蛋白質(zhì)水平；原位末端標記（TUNEL）法檢測視網(wǎng)膜中凋亡發(fā)生的情況，并對凋亡細胞平均吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值進行統(tǒng)計分析。采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果 隨著出生日齡的增加，RCS大鼠視網(wǎng)膜厚度較RCS-rdy+大鼠變薄，主要表現(xiàn)為視桿與視錐層和外核層明顯變薄。在RCS大鼠17、25、35日齡組，Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達逐漸增強，60日齡組表達下降；對照組RCS-rdy+大鼠各日齡組表達無明顯變化。Western blot法檢測結(jié)果顯示，隨著出生日齡的增加，RCS大鼠各日齡組視網(wǎng)膜cleave-caspase 3的表達明顯增加，以35日齡組增加最為明顯，而RCS-rdy+大鼠各日齡組視網(wǎng)膜cleave-caspase 3的表達沒有明顯的變化。TUNEL法檢測結(jié)果顯示，凋亡細胞主要出現(xiàn)在外核層中，在RCS大鼠17、25、35日齡組，各組凋亡細胞呈逐漸增多的趨勢，60日齡組凋亡細胞顯著下降；RCS-rdy+各日齡組凋亡細胞沒有明顯變化。多變量偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，Cdk5表達與p25表達、Cdk5表達與cleave-caspase 3表達、Cdk5表達與凋亡細胞表達、p25表達與cleave-caspase 3表達、p25表達與凋亡細胞表達、cleave-caspase 3表達與凋亡細胞表達的偏相關(guān)系數(shù)分別為0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852，P值為0.000，兩兩變量之間均顯著相關(guān)。 結(jié)論 17、25、35日齡RCS大鼠，隨著出生日齡的增加，其視網(wǎng)膜凋亡細胞逐漸增多，而Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達逐漸增強。RCS大鼠視網(wǎng)膜中凋亡細胞變化趨勢與Cdk5、p25和cleave-caspase 3的表達基本一致。提示RCS大鼠視網(wǎng)膜中光感受器細胞的凋亡與Cdk5、p25的表達水平升高有關(guān)，Cdk5可能參與RCS大鼠RP的發(fā)生與發(fā)展。
目的 觀察原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性（RP）患眼短波長自身熒光（SW-AF）和近紅外自身熒光（NIR-AF）特征以及與視野改變的相關(guān)性。方法 臨床檢查確診的原發(fā)性RP患者12例24只眼納入研究。其中，男性9例18只眼，女性3例6只眼。年齡15～69歲，平均年齡（35.33plusmn;15.03）歲。均行眼底彩色照相、SW-AF、NIR-AF、電腦視野、光相干斷層掃描（OCT）檢查。結(jié)果 SW-AF、NIR-AF檢查結(jié)果均顯示，眼底后極部均有大小不等的強熒光環(huán)。SW-AF強熒光環(huán)內(nèi)部弱熒光區(qū)域面積與NIR-AF強熒光區(qū)域面積正相關(guān)（r=0.662，P＜0.05）。OCT檢查證實強熒光環(huán)外的區(qū)域光感受器內(nèi)外節(jié)連接（IS/OS）層和外界膜斷裂、外核層變薄及色素上皮變薄萎縮。周邊部視網(wǎng)膜骨細胞樣色素沉著在SW-AF和NIR-AF中均為無熒光，眼底斑塊樣改變區(qū)域在SW-AF中同一位置表現(xiàn)為斑駁樣弱熒光。SW-AF強熒光環(huán)與視野具有正相關(guān)（r=0.492，P＜0.05）。結(jié)論 RP患者視野與SW-AF強熒光環(huán)內(nèi)區(qū)域大小相關(guān)，且SW-AF強熒光環(huán)內(nèi)區(qū)域與NIR-AF強熒光區(qū)域視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)正常。
目的 探討在體電穿孔輔助基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞層和光感受器（PR）細胞層的可行性。方法 147只健康雄性Spragne-Dawley(SD)大鼠根據(jù)電穿孔刺激模式電壓值分為5、10、15、20、25、30、35 V組，右眼視網(wǎng)膜下腔注射增強型綠色熒光蛋白（EGFP）真核表達質(zhì)粒pEGFPN1為實驗眼，左眼注射TE Buffer 為對照眼。各組根據(jù)不同轉(zhuǎn)染方向再分為RPE和PR兩個亞組。各組除電壓不同外，其余參數(shù)均為脈寬99 ms，脈沖間期0.5 s，連續(xù)5個脈沖。將帶有負電荷的質(zhì)粒在電場作用下，擬轉(zhuǎn)染到RPE細胞層，反向置電極，擬轉(zhuǎn)染到PR細胞層。轉(zhuǎn)染后7 d 取各組視網(wǎng)膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察EGFP表達強弱、范圍及熒光細胞計數(shù)分析；采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）、實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量觀察EGFP蛋白和mRNA的表達。結(jié)果 轉(zhuǎn)染后7 d，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，各組RPE亞組對照眼RPE細胞層內(nèi)均未見特異性熒光表達，實驗眼可見綠色熒光表達；各組RPE亞組對照眼視網(wǎng)膜鋪片均未見熒光表達，實驗眼視網(wǎng)膜鋪片均可見轉(zhuǎn)染了EGFP的RPE細胞。Western blot檢測顯示，隨電壓增加，EGFP蛋白與beta;-肌動蛋白條帶灰度相對比值呈上升趨勢。RT-PCR檢測顯示，各組均產(chǎn)生陽性擴增條帶，隨電壓增高，EGFP mRNA與GADPH mRNA擴增條帶灰度相對比值逐漸增高。結(jié)論 在體電穿孔方法可以有效輔助基因轉(zhuǎn)染大鼠RPE細胞層。
目的 觀察特發(fā)性視網(wǎng)膜血管炎、動脈瘤、視神經(jīng)視網(wǎng)膜（IRVAN）綜合征和Eales病熒光素眼底熒光血管造影（FFA）特征的異同。方法 回顧分析IRVAN綜合征患者4例8只眼和Eales病患者43例68只眼的FFA檢查資料。所有患者均行常規(guī)眼科檢查，包括視力、眼壓、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡眼底檢查。4例Eales病患者單眼玻璃體積血眼底窺不清，行對側(cè)眼檢查，其他所有患者雙眼常規(guī)彩色眼底照相、共焦激光掃描FFA檢查。IRVAN綜合征4例8只眼，均為雙眼發(fā)病。男性1例, 女性3例；年齡16～43歲，平均年齡（27.00plusmn;12.93）歲。Eales病43例68只眼, 男性32例, 女性11例；年齡6～59歲，平均年齡（30.79plusmn;11.46）歲。雙眼29例54只眼，單眼14例14只眼。兩組患者眼底均可見視網(wǎng)膜血管白鞘或白線狀改變、視網(wǎng)膜出血滲出、玻璃體積血。結(jié)果 FFA檢查結(jié)果顯示，IRVAN綜合征8只眼后極部動、靜脈均受累；均可見多發(fā)性視網(wǎng)膜大動脈瘤。周邊部毛細血管閉塞形成無灌注區(qū)7只眼,占87.50%；視盤水腫熒光滲漏5只眼,占62.50%；視神經(jīng)萎縮2只眼，25.00%；出血遮擋1只眼，占12.50%；視盤新生血管2只眼，占25.00%；視網(wǎng)膜新生血管4只眼，占50.00%；黃斑水腫4只眼，50.00%。Eales病43例68只眼中，所有患眼周邊病變區(qū)視網(wǎng)膜靜脈管壁滲漏；累及后極部靜脈32只眼，占47.06%；動脈同時受累5只眼，占7.35%；周邊部毛細血管閉塞形成無灌注區(qū)38只眼，占55.88%；視盤滲漏29只眼，占42.65%；視盤新生血管4只眼，占5.88%；視網(wǎng)膜新生血管26只眼，占38.24%；黃斑水腫15只眼，占22.06%。IRVAN綜合征與Eales病患者在后極部動脈受累眼數(shù)、靜脈受累眼數(shù)、動脈瘤眼數(shù)之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)；視盤滲漏、無灌注區(qū)、視盤和視網(wǎng)膜新生血管、黃斑水腫眼數(shù)之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(chi;2=0.479，1.449，0.068，1.676；P＞0.05)。結(jié)論 IRVAN綜合征和Eales病均可發(fā)生視網(wǎng)膜動脈和靜脈不同程度的炎性改變，并均可導(dǎo)致視盤水腫滲出。IRVAN綜合征后極部視網(wǎng)膜動、靜脈受累明顯高于Eales病，特別是視盤旁及后極部特征性大動脈瘤樣改變有助于IRVAN綜合征的診斷及IRVAN綜合征和Eales病的鑒別診斷。
目的 觀察視網(wǎng)膜色素變性(RP)患者視錐細胞和視桿細胞的多焦視網(wǎng)膜電圖(mfERG)特征，評估感光細胞功能。方法 選取正常受試者8例8只眼進行視桿細胞mfERG檢查，分析不同刺激光亮度對P1波振幅的影響；對19例RP患者38只眼分別進行視桿和視錐細胞mfERG檢查，根據(jù)局部波形信噪比判斷檢出率，對視錐細胞mfERG不同類型間的平均視力、P1波振幅密度進行比較和統(tǒng)計學(xué)分析。同時對比分析RP患者視桿和視錐細胞mfERG在各象限P1波振幅的變化。結(jié)果 采用0.04 cd/m2藍色低刺激光亮度可以穩(wěn)定記錄正常人視桿細胞mfERG反應(yīng)。RP患者視錐和視桿細胞mfERG有效波形檢出率分別為65.79%和10.51%。視錐mfERGⅠ型P1波振幅密度高于Ⅱ型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.21,P=0.000)，平均視力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.15, P=0.612)，I型振幅密度與logMAR視力呈負相關(guān)（r=-0.48，P=0.04）。分別比較RP患者視錐和視桿mfERG局部波形特征發(fā)現(xiàn)，兩者在各象限的P1振幅密度在空間上有一定的對應(yīng)性。結(jié)論 RP患者黃斑區(qū)視錐細胞的反應(yīng)存在多樣性，視錐細胞mfERG檢出率高于視桿細胞，殘存視錐和視桿細胞功能在空間上有一定的對應(yīng)性。
目的 觀察口服免疫耐受預(yù)防大鼠實驗性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎(EAU)過程中血清以及脾細胞培養(yǎng)上清液中的Th1類細胞因子干擾素（IFN）-gamma;、白細胞介素（IL）-2和Th2類細胞因子IL-4、IL-10表達水平。方法 Lewis大鼠72只隨機分為EAU組、口服視網(wǎng)膜S抗原10、100mu;g組和1、10 mg組、對照組，每組各12只大鼠。其中，EAU組用視網(wǎng)膜S抗原50mu;g和弗氏完全佐劑免疫誘導(dǎo)EAU模型，口服10、100 mu;g組和1、10 mg組，分別插管喂飼視網(wǎng)膜S抗原10、100 mu;g，1、10 mg和1 mg胰蛋白酶抑制劑的混合液1 ml，隔日1次，共7次，然后按上述方法誘導(dǎo)EAU；對照組插管喂飼磷酸鹽緩沖液和1 mg胰蛋白酶抑制劑的混合液1 ml，隔日1次，共7次，然后誘導(dǎo)EAU。觀察每組大鼠眼部EAU的臨床表現(xiàn)。在EAU高峰期取大鼠眼球，進行病理分級。同時取大鼠血清，分離脾細胞，培養(yǎng)后取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清以及脾細胞培養(yǎng)上清液中IFN-gamma;、IL-2、IL-4和IL-10細胞因子的水平。結(jié)果 100mu;g、1 mg組血清中Th1類細胞因子IFN-gamma;、IL-2濃度降低，Th2類細胞因子IL-4、IL-10的濃度增高，與EAU組和對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=51.9, 68.8, 35.7,7.5,P＜0.01）；10 mu;g、10 mg組血清中Th1、Th2類細胞因子與EAU組和空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與EAU組和空白對照組相比，100 mu;g、1 mg組大鼠脾細胞培養(yǎng)上清液中Th1類細胞因子IFN-gamma;和IL-2的濃度降低，Th2類細胞因子IL-4、IL-10的濃度增高，與EAU組和對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=57.1,15.6,33.1,167.7, P＜0.01）；10 mu;g、10 mg組大鼠脾細胞培養(yǎng)上清液血清中Th1、Th2類細胞因子與EAU組和空白對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 口服免疫耐受預(yù)防EAU過程中，Th1類細胞因子IFN-gamma;和IL-2的表達降低，而Th2類細胞因子IL-4、IL-10的表達增高。口服過高或過低劑量抗原不能預(yù)防EAU，細胞因子的表達水平也無明顯改變。提示細胞因子在口服免疫耐受預(yù)防EAU的過程中起到重要作用。
目的 觀察抗腫瘤壞死因子-alpha;單克隆抗體（TNF-alpha; MCAb）對于實驗性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎（EAU）的治療作用。方法 合成光感受器間維生素A類結(jié)合蛋白（IRBP）R16多肽片段，聯(lián)合免疫佐劑誘導(dǎo)EAU動物模型。按照注射次數(shù)不同將大鼠分為2組，分別于IRBP R16免疫后的第6天和第4、6、8天自大鼠尾靜脈注入TNF-alpha; MCAb，裂隙燈顯微鏡觀察其眼部臨床表現(xiàn)，同時設(shè)未治療組大鼠作為對照。于IRBP R16免疫后第13天測量遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH），并于第14天處死大鼠，取眼球行組織病理檢查。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測抗體注射后14 d 時大鼠血清中Th1類細胞因子gamma;-干擾素（IFN-gamma;）、Th2類細胞因子白細胞介素-4（IL-4）水平以及房水中IFN-gamma;水平。測量引流淋巴結(jié)細胞的抗原特異性淋巴細胞增生反應(yīng)。結(jié)果 TNF-alpha;MCAb治療組大鼠的眼部炎癥較未治療組明顯減輕，病理分級下降；房水和血清中IFN-gamma;水平降低，血清中IL-4增高；DTH反應(yīng)下降；引流淋巴結(jié)細胞對IRBP R16多肽刺激的增生反應(yīng)下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與單次注射相比，3次注射的治療效果更顯著（P＜0.05）。結(jié)論 TNF-alpha;MCAb能夠有效減輕EAU大鼠眼部的炎癥反應(yīng)和特異性細胞免疫反應(yīng)，改變Th1/Th2細胞因子平衡；多次應(yīng)用作用更顯著。
目的 觀察和探討細胞因子信號抑制因子（SOCS)在實驗性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎（EAU）外周血單個核細胞（PBMC）內(nèi)的表達及意義。方法 光感受器間維生素A 類結(jié)合蛋白(IRBP)免疫100只Lewis大鼠誘導(dǎo)EAU動物模型，隨機分為對照組和治療組。治療組從免疫后第1天至第28天，給予環(huán)孢霉素A（CSA）灌胃，20 mg/（kgmiddot;d）；對照組給予等量生理鹽水。免疫前、免疫后7、14、21、28 d采用裂隙燈顯微鏡觀察大鼠眼部變化并抽取其心臟血，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測血清白細胞介素（IL）-4、IL-12、干擾素（IFN）-gamma;的含量；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和蛋白免疫印跡法檢測PBMC內(nèi)SOCS mRNA和蛋白表達。結(jié)果免疫后14 d 時炎癥最明顯。對照組可見明顯的虹膜睫狀體炎，治療組前房輕微炎性滲出，但無虹膜后粘連及前房積膿。對照組血清中 IL-12、IFN-gamma;免疫后14 d達到最高峰，28 d下降到基礎(chǔ)水平，治療組在免疫后14 d達到高峰，但是升高程度明顯低于對照組，其他時間點與免疫前比較無差異；IL-4在對照組中下降不明顯，治療組在整個病程中呈上升趨勢。SOCS1、SOCS5 mRNA免疫后14 d表達最高，對照組分別是免疫前的4.05和3.83倍，治療組分別為1.15和1.16倍；兩組中含SH2結(jié)構(gòu)的細胞因子誘導(dǎo)蛋白（CIS）與SOCS3 mRNA輕度升高，對照組較治療組略明顯。對照組中SOCS1、SOCS5蛋白在免疫后7、14、21 d時顯著高于免疫前，CIS、SOCS3蛋白在免疫后14、21 d顯著高于免疫前；治療組中僅SOCS1蛋白在免疫后14 d顯著高于免疫前，其他時間點較免疫前無明顯改變。 結(jié)論 SOCS1、SOCS5水平升高與EAU發(fā)生過程中的Th1型反應(yīng)增強有關(guān)，CIS、SOCS3水平輕度升高可能是存在著Th2細胞反應(yīng)的增強以對抗Th1細胞反應(yīng)，實現(xiàn)動態(tài)免疫平衡。
目的 觀察米諾環(huán)素對視網(wǎng)膜色素變性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP過程的影響。方法 40只新生rd小鼠隨機分為10組，5組為實驗組，5組為對照組，每組4只小鼠。實驗組，出生后每日腹腔注射米諾環(huán)素22.5 mg/kg；對照組，出生后每日腹腔注射生理鹽水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各處死一組實驗組和對照組小鼠，取眼球做組織學(xué)觀察并行凋亡細胞檢測，并對兩組視網(wǎng)膜光感受器細胞數(shù)、外核層厚度以及凋亡細胞數(shù)目進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器細胞開始凋亡，14 d達高峰，28 d光感受器細胞完全消失；（2）出生后7 d實驗組光感受器細胞數(shù)目和外核層厚度與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；（3）出生后14、21 d實驗組光感受器細胞數(shù)目和外核層厚度多于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d實驗組外核層凋亡細胞數(shù)目少于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。結(jié)論 米諾環(huán)素在rd小鼠RP早期可以延緩光感受器細胞丟失，但不能完全阻止RP的發(fā)生。
目的 觀察特發(fā)性視網(wǎng)膜血管炎、動脈瘤、視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎綜合征（IRVAN綜合征）的臨床特征。 方法 回顧分析3例經(jīng)全身系統(tǒng)檢查、眼底彩色照相以及熒光素眼底血管造影（FFA）等檢查確診的IRVAN綜合征患者的臨床資料。 結(jié)果 3例患者均有特發(fā)性視網(wǎng)膜血管炎，而且是視網(wǎng)膜動脈的炎癥，視盤及視網(wǎng)膜血管多發(fā)性大動脈瘤以及因視盤水腫、視盤周圍滲出引起的視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎，2例患者周邊部視網(wǎng)膜血管有閉塞區(qū)。 結(jié)論 IRVAN綜合征的臨床特征有特發(fā)性視網(wǎng)膜血管炎，視網(wǎng)膜和視盤動脈血管管壁上多發(fā)性大動脈瘤，以及由于血管炎癥和動脈瘤引起的視網(wǎng)膜、視盤滲出、水腫以及由此產(chǎn)生的視神經(jīng)視網(wǎng)膜炎。 (中華眼底病雜志，2007，23：180-183)