目的 研究在缺氧條件下A549細(xì)胞對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)遷移及微血管形成的影響。方法 A549細(xì)胞在常氧組(21%O2)、缺氧組(2%O2)、無(wú)氧組(0%O2)中培養(yǎng)24 h后,通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)蛋白量以確定缺氧模型建立是否成功。隨后取常氧組、缺氧組的A549細(xì)胞上清液、HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)液干預(yù)HUVEC,用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、微絲綠色熒光染色方法觀察各組HUVEC的遷移情況及偽足形成,體外HUVEC三維培養(yǎng)技術(shù)觀察血管形成情況。結(jié)果 與常氧組比較,缺氧組A549細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)好,增殖明顯;無(wú)氧組A549細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)差,細(xì)胞數(shù)量減少;缺氧組及無(wú)氧組A549細(xì)胞均有HIF-1α表達(dá),且缺氧組表達(dá)更加明顯。與細(xì)胞培養(yǎng)液干預(yù)組比較,缺氧上清液干預(yù)組和常氧上清液干預(yù)組A549細(xì)胞的HUVEC均有不同程度的遷移、偽足結(jié)構(gòu)形成及血管管腔樣結(jié)構(gòu)形成,且前者較后者明顯。結(jié)論 缺氧環(huán)境下A549細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,增殖明顯,而無(wú)氧環(huán)境下則不利于A549細(xì)胞的生長(zhǎng)。缺氧環(huán)境下A549細(xì)胞能促進(jìn)HUVEC的遷移、偽足形成及血管形成。
目的:采用常壓間歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)大鼠的動(dòng)物模型,觀察間歇性常壓低氧預(yù)處理的促血管生成作用。方法:成年雄性Wistar大鼠25只,體重210~215 g,隨機(jī)分為2大組:對(duì)照組(C組,n=5)和間歇性低氧預(yù)處理組(IH組,n=20)。IH組動(dòng)物進(jìn)行間歇性低氧預(yù)處理(4 h/d,間歇缺氧1 d者為IH1組,7 d者為IH2組,14 d者為IH3組,28 d者為IH4組),按計(jì)劃完成實(shí)驗(yàn)后測(cè)定心肌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) 蛋白表達(dá)及毛細(xì)血管密度。結(jié)果:間歇性低氧預(yù)處理大鼠心肌VEGF蛋白表達(dá)增加,心肌毛細(xì)血管密度增高。結(jié)論:間歇性低氧預(yù)處理能促進(jìn)大鼠心肌內(nèi)的血管生成,其機(jī)制可能與心肌VEGF表達(dá)增高有關(guān)。
目的 克隆和構(gòu)建攜帶人低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α。方法 以缺氧的肝癌細(xì)胞株HepG2總RNA為模板,進(jìn)行RT-巢式PCR,獲得HIF-1α的cDNA,克隆入Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE2hyg,酶切重組子鑒定。將構(gòu)建好的PTRE-HIF-1α用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞,在強(qiáng)力霉素的作用下,用RT-PCR及Western blot法鑒定重組質(zhì)粒的表達(dá)。結(jié)果 擴(kuò)增出HIF-1α的cDNA測(cè)序結(jié)果與Genbank記載完全一致,并成功克隆入PTRE2hyg,將反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞,可以完整有效表達(dá)HIF-1α且受強(qiáng)力霉素的調(diào)控。結(jié)論 成功克隆和構(gòu)建攜帶HIF-1α基因的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α,并證明其表達(dá)能在HepG2Tet-on細(xì)胞中受強(qiáng)力霉素調(diào)控。
為探討老年患者腹腔感染術(shù)后肺損害的發(fā)生及其防治措施,對(duì)我院外科1991年1月至1992年12月收治的77例60歲以上的腹部外科疾病患者,術(shù)后給吸氧處理后的血氧飽和度(SaO2)進(jìn)行了連續(xù)監(jiān)測(cè),其中伴腹腔感染者(感染組)38例,無(wú)腹腔感染者(非感染組)39例。結(jié)果: 感染組術(shù)后SaO2<95%者28例,其低氧血癥發(fā)生率為73.7%,非感染組SaO2<95%者12例,其低氧血癥發(fā)生率為30.8%,兩組比較差異有顯著性意義(P<0.001)。對(duì)術(shù)后SaO2<95%的40例患者給予吸氧處理后,其低氧血癥得以改善31例,有效率達(dá)77.5%; 而低氧血癥未糾正者9例,均并發(fā)成人呼吸窘迫綜合征(ARDS),發(fā)生率為2.5%(9/40),其中感染組并發(fā)ARDS者8例,發(fā)生率為21.1%,非感染組1例,發(fā)生率為2.6%,兩組比較,差異有顯著性意義(P<0.05)。該結(jié)果提示: 老年患者腹腔感染術(shù)后易并發(fā)低氧血癥,且易發(fā)展成ARDS。因此老年患者腹腔感染術(shù)后,常規(guī)進(jìn)行血氧飽和度的臨床監(jiān)測(cè)和吸氧治療,是防治肺損害的重要措施之一。
目的 探討羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑斯伐他汀對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的預(yù)防作用,及其與肺小動(dòng)脈血管緊張素Ⅱ受體1(AT1R)表達(dá)的關(guān)系。方法 30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、低氧組和預(yù)防組,常壓低氧(8 h×6 d×3 w)建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型,預(yù)防組于每日低氧前給予斯伐他汀10 mg/kg灌胃,正常組和低氧組則給予生理鹽水。測(cè)定平均肺動(dòng)脈壓(mPAP),血清膽固醇濃度,右心室肥厚指數(shù)[RV/(LV+S)],肺小動(dòng)脈管壁厚度占外徑的百分比(WT%)和管壁面積占總面積的百分比(WA%),以及大鼠肺小動(dòng)脈管壁AT1R表達(dá)水平。結(jié)果 與低氧組比較,預(yù)防組mPAP和RV/(LV+S)均明顯降低[(22.6±3.86)mm Hg比(29.3±2.27)mm Hg,(25.13±0.75)%比(33.18±1.58)%,P均lt;0.01],肺小動(dòng)脈厚度指標(biāo)和面積指數(shù)明顯下降[WT%:(15.98±1.96)%比(25.14±1.85)%;WA%:(54.60±3.94)%比74.77±4.52)%;P均lt;0.01],AT1R的染色強(qiáng)度明顯降低(1.23±0.09比1.57±0.13,Plt;0.01)。低氧組前述指標(biāo)均較對(duì)照組明顯升高(P均lt;0.01)。三組大鼠血清膽固醇濃度沒(méi)有顯著差異(Pgt;0.05)。結(jié)論 斯伐他汀可抑制肺血管AT1R受體的表達(dá),對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的形成具有明顯的預(yù)防作用。
在過(guò)去二十年間,麻醉技術(shù)和手術(shù)技術(shù)的改進(jìn)使肺部惡性腫瘤患者的手術(shù)死亡率大大降低,但術(shù)后并發(fā)癥仍是主要問(wèn)題。肺切除術(shù)后的常見(jiàn)并發(fā)癥是肺部并發(fā)癥[1],主要表現(xiàn)是低氧血癥,尤其在肺功能減退的肺切除患者中發(fā)病率更高[2]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)低氧血癥的診斷缺乏統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn),一些作者采用Russell等[3]提出的標(biāo)準(zhǔn),吸空氣氧的情況下,患者動(dòng)脈血氧飽和度(SpO2)≤92%,大于30 s就可診斷為術(shù)后低氧血癥。也有作者建議[4]將一次或以上血?dú)鈾z查PaO2lt;8 kPa或PaO2/FiO2lt;300 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)作為診斷低氧血癥的標(biāo)準(zhǔn)。30%~50%的術(shù)后患者可發(fā)生低氧血癥,一般認(rèn)為這樣的低氧血癥是一過(guò)性的,對(duì)大多數(shù)患者是無(wú)害的[5]。但如果合并心腦或其他器官動(dòng)脈硬化或其他原因的血管阻塞,這種低氧血癥就是很危險(xiǎn)的[6]。常見(jiàn)低氧血癥的原因是肺萎陷不張和誤吸、心源性肺水腫、靜脈輸入液體過(guò)量、通氣血流比例失調(diào)和急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ALI/ARDS)[7],其中ALI/ARDS是肺切除術(shù)后患者死亡的主要原因[8-10]。
目的 觀察低氧習(xí)服對(duì)模擬高原肺水腫大鼠肺組織結(jié)構(gòu)及低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)表達(dá)的影響。方法 56只Wistar大鼠隨機(jī)分為7組:常氧對(duì)照組(N組)、急性低氧對(duì)照組(H0組)、急性低氧組(H1組)、3 000 m低氧習(xí)服組(C3.0組)、3 000 m低氧習(xí)服+急性低氧組(C3.1組)、5 000 m低氧習(xí)服組(C5.0組)、5 000 m低氧習(xí)服+急性低氧組(C5.1組),每組8只。習(xí)服完成后,將大鼠置于模擬海拔6 000 m急性低氧24 h。采用Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)動(dòng)物習(xí)服完成后肺組織HIF-1α蛋白和mRNA的表達(dá)情況,光鏡和電鏡下觀察大鼠急性低氧后肺結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果 H1組肺組織顯微和超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯間質(zhì)性肺水腫,低氧習(xí)服后間質(zhì)性肺水腫明顯減輕。Western blot方法未檢測(cè)到大鼠肺組織表達(dá)HIF-1α,但HIF-1α mRNA在N組有一定量表達(dá),C3.0組和C5.0組HIF-1α? mRNA表達(dá)均明顯高于N組(P均lt;0.01)。結(jié)論 低氧習(xí)服可以減輕低氧大鼠肺間質(zhì)水腫程度,提高肺組織HIF-1α mRNA表達(dá)。HIF-1可能介導(dǎo)參與了大鼠肺低氧習(xí)服過(guò)程。
單肺通氣技術(shù)( OLV) 廣泛應(yīng)用于開(kāi)胸手術(shù), 該技術(shù)使手術(shù)側(cè)肺萎陷, 非手術(shù)側(cè)單肺通氣, 目的是防止手術(shù)側(cè)肺分泌物或血液流入健側(cè)肺, 確保氣道通暢, 防止交叉感染, 避免手術(shù)側(cè)肺膨脹, 使肺保持安靜以利于手術(shù)操作, 減輕對(duì)肺實(shí)質(zhì)的損傷。隨著手術(shù)日益走向微創(chuàng)時(shí)代, 對(duì)該技術(shù)的需求大量增加。
目的 探討建立不同間歇低氧( IH) 程度、IH 時(shí)間和再氧合( ROX) 時(shí)間以及持續(xù)低氧( CH) 模式家兔在體頸動(dòng)脈體和頸總動(dòng)脈模型。方法 由計(jì)算機(jī)程序控制單片機(jī), 在串口通訊協(xié)議驅(qū)動(dòng)下, 由下位機(jī)芯片控制不同氧分壓( PO2 ) 灌注液的灌注過(guò)程。45 只成年雄性新西蘭大耳白家兔( 2. 5 ~3. 0 kg) 復(fù)合麻醉后保留自主呼吸, 游離右側(cè)頸總動(dòng)脈和竇神經(jīng)( CSN) , 顯露CSN化學(xué)感受性神經(jīng)細(xì)束并安放電極記錄CSN傳入活性。結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈向心端血流, 并向右側(cè)頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端內(nèi)插入導(dǎo)管, 經(jīng)蠕動(dòng)輸液泵交替灌注以發(fā)泡法預(yù)平衡的灌注液( 2 mL/min) 。灌注低氧灌注液, 而后再灌注正常氧灌注液, 交替往復(fù)形成IH/ROX 循環(huán), 從而在頸總動(dòng)脈內(nèi)模擬出睡眠呼吸暫停狀態(tài)的不同IH 模式IH/ROX 暴露情況; 或持續(xù)灌注低氧液以模擬CH 暴露情況。監(jiān)測(cè)頸動(dòng)脈體CSN傳入活性, 完成暴露后游離收集頸動(dòng)脈體和插管遠(yuǎn)心端的頸總動(dòng)脈及其分叉作為標(biāo)本。結(jié)果 正常氧灌注時(shí)CSN化學(xué)傳入細(xì)束的基線頻率為( 0.17 ±0. 03) 次脈沖/ s( impulse / s) , 平均波幅為( 46. 2 ±4. 4) μV; 低氧灌注時(shí)傳入頻率為( 0. 64 ±0. 09) impulse/ s, 平均波幅為( 87. 4 ±6. 6) μV; 正常氧灌注液的PO2 約為( 139 ±1. 5) mmHg, 而IH 灌注液的PO2 約為( 35. 2 ±1. 3) mmHg。結(jié)論 該模型可以用于研究不同IH 和CH 模式時(shí)頸動(dòng)脈體和頸總動(dòng)脈多種神經(jīng)和生物化學(xué)變化, 具有較大的應(yīng)用價(jià)值。
目的 對(duì)控制低通氣造成的低氧血癥伴高碳酸血癥家兔, 用純氧進(jìn)行腹膜腔通氣, 觀察其對(duì)動(dòng)脈血?dú)獾挠绊?。方?16 只家兔經(jīng)氣管切開(kāi)并插入氣管導(dǎo)管, 連接呼吸機(jī)。調(diào)整呼吸機(jī)參數(shù), 同時(shí)使用肌肉松弛劑抑制自主呼吸, 造成低通氣, 致使兔PaO2 降低和PaCO2 升高, 制備低氧血癥伴高碳酸血癥家兔模型, 然后用純氧進(jìn)行腹膜腔內(nèi)通氣, 檢測(cè)腹膜腔內(nèi)通氣開(kāi)始后0. 5、1、1. 5 及2 h動(dòng)脈血?dú)狻=Y(jié)果 經(jīng)純氧腹膜腔內(nèi)通氣后, PaO2 由通氣前的( 52. 50 ±3. 46) mm Hg分別顯著升至腹膜腔通氣后30 min 的( 76. 46 ±7. 79) mmHg 、1 h 的( 79. 62 ±9. 53) mm Hg、1. 5 h 的( 78. 54 ±7. 18) mm Hg、2 h的( 81. 1 ±8. 3) mmHg( P 均lt; 0. 05) , 通氣各時(shí)點(diǎn)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P gt;0. 05) 。而PaCO2 變化不顯著( P gt;0. 05) , 由( 63. 84 ±9. 09) mmHg降至腹膜腔通氣后0. 5 h 的( 59. 84 ±14. 22 ) mm Hg、1 h 的( 59. 16 ±15. 5) mmHg、1. 5 h 的( 60. 02 ±7. 07) mm Hg、2 h 的( 61. 38 ±6. 56) mm Hg。結(jié)論 用純氧進(jìn)行腹膜腔內(nèi)通氣能明顯改善肺控制性低通氣家兔的低氧血癥, 而對(duì)高碳酸血癥改善不明顯。