目的 了解近年來同種闊筋膜臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展。 方法 查閱國(guó)內(nèi)外同種闊筋膜應(yīng)用基礎(chǔ)、處理技術(shù)和臨床應(yīng)用的相關(guān)文獻(xiàn)，進(jìn)行總結(jié)分析。 結(jié)果 同種闊筋膜具有細(xì)胞成分少、膠原纖維平行致密的組織學(xué)特點(diǎn)和免疫原性低的特點(diǎn)，經(jīng)過不同方式處理和保存后，以細(xì)胞外基質(zhì)為主要成分的支架形式供臨床應(yīng)用，并成功應(yīng)用于眼科、泌尿外科、骨科和整形外科等領(lǐng)域，并已取得較為理想的治療效果。 結(jié)論 同種闊筋膜作為一種天然的生物材料在臨床修復(fù)缺損和功能重建中有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有望應(yīng)用于更多領(lǐng)域。
目的 組織工程皮膚已逐漸應(yīng)用于臨床，但其免疫原性仍存在爭(zhēng)議。通過重度聯(lián)合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency，SCID）小鼠重建人免疫系統(tǒng)，觀察移植的組織工程皮膚的免疫排斥情況。 方法 按朱堂友等的方法體外構(gòu)建組織工程皮膚和無細(xì)胞真皮基質(zhì)。取雄性4 ～ 6 周齡SCID 小鼠20 只，體重16 ～ 17 g，隨機(jī)分為4 組（n=5）。A、B、C 組于小鼠側(cè)腹部切除1 cm × 1 cm 大小全層皮膚后，A 組移植組織工程皮膚，B 組移植自愿捐贈(zèng)的人包皮，C 組將無細(xì)胞真皮基質(zhì)埋植皮下；D 組為正常對(duì)照，不作處理。移植術(shù)后2 周A、B、C 組取材行HE 染色，觀察各移植材料存活情況。并于各組小鼠腹腔注射3 × 107 個(gè)人脾淋巴細(xì)胞，4 周內(nèi)定期行大體、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、人IgG 免疫熒光染色，觀察是否發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。 結(jié)果 HE 染色示A 組組織工程皮膚具有真、表皮雙層結(jié)構(gòu)，類似人正常皮膚組織；B 組人包皮仍保持人皮膚的正常組織結(jié)構(gòu)；C 組無細(xì)胞真皮基質(zhì)位于原位，無明顯被降解跡象。植入人脾淋巴細(xì)胞后，A、C、D 組HE 染色未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；同時(shí)間點(diǎn)B 組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度均明顯高于其他3 組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。A 組植入人脾淋巴細(xì)胞2 周后表皮全層細(xì)胞抗人角蛋白14 單克隆抗體（monoclonal anti-body，mAb）染色陽性，抗人Ⅳ型膠原mAb 染色陽性；A、C、D 組抗人CD3、CD4、CD8 mAb 染色均未見陽性細(xì)胞；B 組2 周后真皮、皮下組織中大量抗人CD3、CD4 和CD8 mAb 染色陽性細(xì)胞。A、C、D 組于植入人脾淋巴細(xì)胞后人IgG 免疫熒光染色均未見陽性結(jié)果；B 組3 周后真皮深部大血管管壁人IgG mAb 免疫熒光染色陽性。 結(jié)論 組織工程皮膚免疫原性較弱，植入SCID 小鼠后未見明顯的免疫排斥反應(yīng)。
【摘 要】 目的 應(yīng)用酶法制備豬主動(dòng)脈脫細(xì)胞基質(zhì)，并評(píng)價(jià)其生物學(xué)性能。 方法 取新鮮屠宰的16 根肉豬降主動(dòng)脈，長(zhǎng)10 ～ 12 cm，應(yīng)用0.1% 胰蛋白酶和0.01% EDTA 于37℃震蕩條件下脫除細(xì)胞成分，HE 和Masson 染色行脫細(xì)胞基質(zhì)的組織學(xué)觀察，掃描電鏡和透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變。應(yīng)用單軸拉伸方法比較脫細(xì)胞前和脫細(xì)胞后48、96 和120 h 時(shí)材料兩斷端厚度、極限抗張強(qiáng)度（ultimate tension stress，UTS）和斷裂伸長(zhǎng)率（strain of failure，SOF），繪制應(yīng)力-應(yīng)變曲線。取成年雜種犬3 只，體重20 ～ 30 kg，雌雄不限。將脫細(xì)胞前后片狀主動(dòng)脈基質(zhì)埋植于犬脊柱兩側(cè)皮下，分別于埋植后1、3 和6 周取材，行HE 染色觀察，參照半定量的Wakitani 評(píng)分法，對(duì)取材時(shí)的大體形態(tài)、浸潤(rùn)細(xì)胞種類和數(shù)量、新生血管等指標(biāo)進(jìn)行比較，觀察宿主炎性細(xì)胞反應(yīng)和脫細(xì)胞基質(zhì)變化。將犬內(nèi)皮細(xì)胞種植于豬脫細(xì)胞基質(zhì)，HE 染色和掃描電鏡觀察細(xì)胞相容性。 結(jié)果 HE 染色和電鏡檢查顯示在96 h 可將新鮮豬主動(dòng)脈細(xì)胞成分脫除，Masson 染色顯示細(xì)胞外纖維成分保留完整。脫細(xì)胞前后的動(dòng)脈基質(zhì)厚度、UTS 和SOF 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），但UTS 顯示降低趨勢(shì)，SOF 則呈現(xiàn)增加趨勢(shì)，應(yīng)力- 應(yīng)變曲線呈現(xiàn)力學(xué)強(qiáng)度降低和延展性增加的變化趨勢(shì)。犬皮下埋植，各組脫細(xì)胞標(biāo)本炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，6 周時(shí)以成纖維細(xì)胞浸潤(rùn)為主，且基質(zhì)中見新生毛細(xì)血管。半定量組織學(xué)評(píng)分，在大體觀察、浸潤(rùn)細(xì)胞種類和數(shù)量方面與脫細(xì)胞前比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；新生血管數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。HE 染色和掃描電鏡顯示種植的內(nèi)皮細(xì)胞可在基質(zhì)表面形成單細(xì)胞層。 結(jié)論 應(yīng)用0.1% 胰蛋白酶和0.01% EDTA 持續(xù)振蕩96 h 制備的豬主動(dòng)脈脫細(xì)胞基質(zhì)，在生物力學(xué)、免疫原性和細(xì)胞相容性方面可滿足血管組織工程的需要。
目的 觀察組織工程皮膚的種子細(xì)胞角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)后的免疫原性變化情況。 方法 取自愿捐獻(xiàn)的健康兒童、青少年包皮，采用分離酶、胰蛋白酶兩步消化法進(jìn)行體外培養(yǎng)并傳代至5代，行苔盼藍(lán)計(jì)數(shù)細(xì)胞活性。SP法標(biāo)記各代角質(zhì)形成細(xì)胞中的朗格漢斯細(xì)胞和黑色素細(xì)胞，計(jì)算其占總細(xì)胞數(shù)的百分比。各代角質(zhì)形成細(xì)胞與從外周血中分離培養(yǎng)淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)，觀察淋巴細(xì)胞增殖情況，閃爍儀計(jì)數(shù)cpm值。 結(jié)果 培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)良好，原代及傳代后的細(xì)胞融合后呈鋪路石樣生長(zhǎng)。細(xì)胞凍存后復(fù)蘇，苔盼藍(lán)染色細(xì)胞活力gt;80%。原代中朗格漢斯細(xì)胞占5.8%，黑色素細(xì)胞占8.1%；1代中朗格漢斯細(xì)胞占2.1％，黑色素細(xì)胞占2.8％；2代后二者均消失。cpm值原代482.13±46.61，1代362.50±35.12，2代228.38±51.46，3代171.86±34.63，4代143.63±15.95，5代123.25±14.39，與對(duì)照組53.67±8.61比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。原代、1代與其他各代比較，2代與4、5代比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；2代與3代間，3、4代及5代間，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論 異體角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后不斷傳代，細(xì)胞免疫原性逐漸下降。
目的 評(píng)價(jià)麻疹- 腮腺炎- 風(fēng)疹- 水痘四聯(lián)疫苗的免疫效果和安全性。方法 采用Cochrane 系統(tǒng)評(píng)價(jià)的方法，電子檢索1990 年到2010 年4 月期間 PubMed、BIOSIS Previews、CDSR、Cochrane Library、CBM、CNKI、VIP 等，輔以手工檢索及追查已納入文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)。納入比較麻疹- 腮腺炎- 風(fēng)疹- 水痘四聯(lián)疫苗（MMRV）與麻疹- 腮腺炎- 風(fēng)疹三聯(lián)疫苗和水痘疫苗（MMR+V）分別接種的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）。由兩名研究者獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、評(píng)價(jià)質(zhì)量、提取數(shù)據(jù)并交叉核對(duì)。對(duì)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究采用RevMan 4.2.10 進(jìn)行Meta 分析。結(jié)果 共納入5 個(gè)RCT，其中B 級(jí)2 個(gè)，C 級(jí)3 個(gè)。Meta 分析結(jié)果顯示，MMRV 組和MMR+V 組的安全性指標(biāo)比較：① 接種部位疼痛發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=0.94，95%CI（0.83，1.05），P=0.28］；② 接種部位紅腫發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.08，95%CI（0.90，1.29），P=0.40］；③ 接種部位硬結(jié)發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.16，95%CI（0.95，1.43），P=0.14］；④ 接種后發(fā)熱率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.20，95%CI（1.12，1.29），Plt;0.000 01］；⑤ 接種后全身皮疹發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.18，95%CI（1.00，1.41），P=0.05］；兩組免疫原性指標(biāo)比較：① 接種后血清麻疹抗體陽轉(zhuǎn)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.00，95%CI（0.99，1.01），P=0.80］；② 血清腮腺炎抗體陽轉(zhuǎn)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=0.99，95%CI（0.50，1.01），P=0.11］；③ 血清風(fēng)疹抗體陽轉(zhuǎn)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.00，95%CI（0.99，1.01），P=0.68］；④ 血清水痘抗體陽轉(zhuǎn)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［RR=1.00，95%CI（0.99，1.01），P=0.58］。 結(jié)論 與MMR+V分開接種相比，MMRV 四聯(lián)疫苗具有同等的免疫效果，在免疫安全性方面，除接種后發(fā)熱率稍高外，其他局部和全身反應(yīng)性良好。鑒于MMRV 四聯(lián)疫苗在免疫效果和安全性方面的良好表現(xiàn)以及它在減少接種次數(shù)方面的作用，認(rèn)為MMRV 四聯(lián)疫苗可以作為兒童預(yù)防接種的候選疫苗進(jìn)行接種。后續(xù)工作中需加強(qiáng)對(duì)疫苗新組分引起發(fā)熱機(jī)制的研究。鑒于納入研究的整體質(zhì)量不高且數(shù)量有限，本系統(tǒng)評(píng)價(jià)中的部分證據(jù)引用需謹(jǐn)慎，建議在今后的研究中擴(kuò)大樣本量、完善試驗(yàn)設(shè)計(jì)、增加分析指標(biāo)，以提高研究質(zhì)量和論證強(qiáng)度。
目的研究同種異體關(guān)節(jié)移植中骨膜和骨髓經(jīng)低溫凍存處理后的免疫原性，探索同種異體關(guān)節(jié)制備的合適方法。 方法6月齡新西蘭白兔5只，體重2.6～3.0 kg，切取雙側(cè)膝關(guān)節(jié)，分離骨膜及骨髓，梯度降溫凍存1個(gè)月，經(jīng)復(fù)溫后無菌研磨，混合生理鹽水制備骨膜、骨髓懸濁液。6月齡青紫藍(lán)兔18只，體重2.1～2.8 kg，隨機(jī)分成3組（n=6）：A、B、C組分別于腹腔注射生理鹽水、骨膜懸濁液、骨髓懸濁液。測(cè)定注射前及注射后1、2周血清IL-2、IL-6、TNF-α濃度和外周靜脈血CD4+ T細(xì)胞/CD8+ T細(xì)胞比值。 結(jié)果IL-2測(cè)定：組內(nèi)比較注射前后濃度無時(shí)間變化趨勢(shì)（P=0.241）；組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.055）。IL-6測(cè)定：組內(nèi)比較注射后濃度出現(xiàn)顯著下降趨勢(shì)（P=0.040）；組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.357）。TNF-α測(cè)定：組內(nèi)比較注射前后濃度無時(shí)間變化趨勢(shì)（P=0.925）；組間比較B組濃度較其余兩組顯著升高（P＜0.05）。CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值測(cè)定：組內(nèi)比較注射前后無時(shí)間變化趨勢(shì)（P=0.248）；組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.646）。 結(jié)論經(jīng)低溫凍存處理后的骨膜、骨髓無顯著免疫原性；制備同種異體關(guān)節(jié)時(shí)建議保留骨膜，去除骨髓，徹底沖洗松質(zhì)骨中的紅骨髓，降低其免疫原性。
目的研究經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化的人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞（umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells，UCB-MSCs）表面免疫分子的表達(dá)以及體外調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的功能。 方法取自愿捐贈(zèng)的臍靜脈血分離獲取UCB-MSCs，體外擴(kuò)增至第3代，行成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)2周。流式細(xì)胞儀檢測(cè)成骨誘導(dǎo)分化前后UCB-MSCs免疫分子人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）Ⅰ類分子、HLA-Ⅱ類分子的表達(dá)。首先以成骨分化的UCB-MSCs刺激異體T淋巴細(xì)胞增殖，未誘導(dǎo)的UCB-MSCs設(shè)為對(duì)照。共設(shè)立UCB-MSCs 1×102、1×103、1×104和1×105個(gè)/孔4種不同細(xì)胞密度，分為IFN-γ預(yù)處理組和未處理組。然后以植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）刺激T淋巴細(xì)胞增殖，分別加入上述不同數(shù)量級(jí)的未誘導(dǎo)與成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs，觀察對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響，并同時(shí)加入IL-2檢測(cè)對(duì)UCB-MSCs抑制T淋巴細(xì)胞增殖作用的逆轉(zhuǎn)。最后建立Transwell共培養(yǎng)體系，研究成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs對(duì)混合T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用是否為接觸抑制性。 結(jié)果未誘導(dǎo)的UCB-MSCs高表達(dá)HLA-Ⅰ類分子，不表達(dá)HLA-Ⅱ類分子；經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs HLA-Ⅱ類分子的陽性表達(dá)率升高。未誘導(dǎo)的UCB-MSCs對(duì)異體T淋巴細(xì)胞增殖有顯著抑制效果，而成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱（且無細(xì)胞數(shù)量依賴性），并且在IFN-γ作用后，有刺激T淋巴細(xì)胞增殖的效果。密度為1×104個(gè)/孔及1×105個(gè)/孔時(shí)未誘導(dǎo)的UCB-MSCs可抑制PHA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖，但加入IL-2后該抑制作用被逆轉(zhuǎn)；而成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs則不具有抑制T淋巴細(xì)胞增殖的作用。Transwell共培養(yǎng)結(jié)果表明，與直接接觸培養(yǎng)相似，未誘導(dǎo)的UCB-MSCs可顯著抑制T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，而成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs抑制能力明顯減弱。 結(jié)論經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs抑制混合T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的效果明顯低于未經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化的UCB-MSCs，不適合作為骨組織工程或細(xì)胞治療的同種異體種子細(xì)胞來源。
目的應(yīng)用組織工程學(xué)方法去除人同種心臟瓣膜（HV）的內(nèi)皮細(xì)胞成分或全部細(xì)胞成分，比較兩種去細(xì)胞HV的免疫原性變化。 方法采用低滲液-去污劑（1% Triton）-核酸酶[1μg/ml核糖核酸酶（RNase）和10μg/ml去氧核糖核酸酶（DNase）[去細(xì)胞法去除HV表面的內(nèi)皮細(xì)胞成分，保留間質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性；采用低滲液-去污劑（1%去氧膽酸）-核酸酶[20μg/ml RNase和200μg/ml DNase]去細(xì)胞法去除HV組織中所有細(xì)胞成分，保留完整的細(xì)胞外基質(zhì)。免疫組織化學(xué)方法測(cè)定HLA-DR抗原在HV組織中的表達(dá)；行大鼠皮下移植試驗(yàn)，組織學(xué)評(píng)價(jià)及定性、定量分析組織的鈣化程度。 結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果證實(shí)HV去內(nèi)皮細(xì)胞和去全部細(xì)胞后組織中HLA-DR抗原表達(dá)均下降，但去全部細(xì)胞HV的HLA-DR抗原表達(dá)下降更為顯著。大鼠皮下移植實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明深低溫液氮保存HV和去內(nèi)皮細(xì)胞HV組織中有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞為著，管壁組織更為顯著；去全部細(xì)胞HV炎性反應(yīng)較輕，僅組織邊緣有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。鈣鹽染色深低溫液氮保存HV和去內(nèi)皮細(xì)胞HV組織中可見鈣鹽沉積，呈現(xiàn)大量黑色顆粒，管壁組織更為顯著；而去全部細(xì)胞HV組織中鈣鹽沉積極少。原子吸收光譜法定量分析結(jié)果表明去全部細(xì)胞HV組織中鈣離子含量明顯低于去內(nèi)皮細(xì)胞HV和深低溫液氮保存HV（P＜0.05），后兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論去全部細(xì)胞HV組織免疫原性顯著下降，移植后炎性反應(yīng)和組織鈣化程度顯著減輕。去內(nèi)皮細(xì)胞HV組織免疫原性及移植后炎性反應(yīng)有所下降，但移植后組織鈣化程度仍顯著增高，且管壁組織鈣鹽含量增高較瓣葉組織更加顯著，提示組織中大量的間質(zhì)細(xì)胞可能是參與HV移植后免疫反應(yīng)、導(dǎo)致HV移植后鈣化毀損的主要組織成份。
目的探討經(jīng)高氯酸鈉（NaClO4）處理后的脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料的免疫原性及其生物相容性。方法取 2 月齡新西蘭兔脛骨骨髓，采用全骨髓貼壁篩選法分離培養(yǎng) BMSCs。取 10 只 6 月齡成年新西蘭兔氣管，修剪至每段 1.5 cm，隨機(jī)分為對(duì)照組（A1 組，n=5），僅剝離氣管外表面疏松結(jié)締組織；實(shí)驗(yàn)組（B1 組，n=5）采用改良 NaClO4 浸泡法脫細(xì)胞處理。MTT 法檢測(cè)兩組支架浸提液的細(xì)胞毒性；免疫組織化學(xué)染色觀察支架主要組織相容性復(fù)合物（major histocompatibility complex，MHC）類抗原表達(dá)。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第 4 代 BMSCs 接種至兩組支架，制備細(xì)胞-支架復(fù)合物，培養(yǎng) 48 h 時(shí)行 Giemsa 染色，倒置顯微鏡觀察材料周圍的細(xì)胞活性；7、14 d 掃描電鏡觀察支架上的細(xì)胞狀態(tài)。取 10 只 6 月齡成年新西蘭兔，隨機(jī)分成對(duì)照組（A2 組，n=5）和實(shí)驗(yàn)組（B2 組，n=5），分別于頸背部皮下皮囊埋植已制備的新鮮氣管和脫細(xì)胞氣管。術(shù)后行大體觀察，并于術(shù)后 5、10、15、20、25、30 d 分析血清免疫球蛋白 IgM 和 IgG 含量的動(dòng)態(tài)變化，術(shù)后 30 d 行 HE 染色觀察。結(jié)果MTT 檢測(cè)示，B1 組浸提液的細(xì)胞增殖情況與 A1 組或純培養(yǎng)基陰性對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；免疫組織化學(xué)染色觀察示，B1 組支架經(jīng)脫細(xì)胞處理后可顯著降低基質(zhì)材料的抗原性。細(xì)胞-支架復(fù)合物培養(yǎng) 48 h Giemsa 染色示，兩組材料周圍的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好。培養(yǎng) 7、14 d 掃描電鏡觀察示，細(xì)胞在 A1 組氣管材料外壁上貼附良好，呈扁平的圓形、橢圓形，細(xì)胞排列緊密，成簇分布；細(xì)胞在 B1 組氣管材料外壁上呈單片狀生長(zhǎng)，形態(tài)與 A1 組相似，生長(zhǎng)趨勢(shì)較好。同種異體動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，B2 組材料的排斥反應(yīng)顯著低于 A2 組；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn) A2 組的 IgM 和 IgG 含量均顯著高于 B2 組（P<0.05）；HE 染色示，B2 組未見炎性細(xì)胞深層滲透或破壞氣管結(jié)構(gòu)，未見鈣化、排斥等不良反應(yīng)。結(jié)論經(jīng) NaClO4 化學(xué)脫細(xì)胞處理后，兔氣管支架材料具有良好的生物相容性，同時(shí)其免疫原性降低，適合作為構(gòu)建組織工程氣管的支架材料。
目的構(gòu)建金黃色葡萄球菌纖連蛋白結(jié)合蛋白 A（fibronectin binding protein A，F(xiàn)nBPA）r10-11 截短體融合蛋白的原核表達(dá)菌株并研究其免疫原性。 方法采用重組聚合酶鏈反應(yīng)（ploymerase chain reaction，PCR）技術(shù)從金黃色葡萄球菌 Newman 株全基因組序列中進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化，連接 T 載體后轉(zhuǎn)入大腸桿菌 DH5α 中進(jìn)行克隆，提取重組后的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，并回收目的片段連接到 pET-32a 質(zhì)粒中，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 BL21（DE3）中進(jìn)行原核表達(dá)，采用 HIS 蛋白純化柱純化截短蛋白 FnBPAr10-11，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE ）鑒定，純化后的 FnBPAr10-11 用于免疫小鼠［分為無菌磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）組、FnBPA 組、FnBPAr10-11 組］，檢測(cè)小鼠血清免疫球蛋白 G（immunoglobulin G，IgG）水平、細(xì)胞因子水平、免疫保護(hù)率。 結(jié)果SDS-PAGE 分析顯示，表達(dá)后的蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為 33.1×103。FnBPAr10-11 組與 FnBPA 組 IgG 抗體效價(jià)達(dá) 1∶128 000，與 PBS 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。FnBPAr10-11 組的細(xì)胞因子水平與 FnBPA 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與 PBS 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。攻毒試驗(yàn)中 FnBPAr10-11 組的免疫保護(hù)作用在 50% 以上。 結(jié)論成功構(gòu)建了金黃色葡萄球菌 FnBPAr10-11 截短體融合蛋白的原核表達(dá)菌株，該截短蛋白免疫原性良好。