目的 探討體外培養(yǎng)成骨細胞在不同血清濃度條件下酒精干預 后增殖和功能的改變，以及胰島素樣生長因子 1(insulin-like growth factor 1, IGF-1)的保護作用。方法 體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠顱骨成骨細胞，分6組在不同條件下進行培養(yǎng)，分別為正常血清濃度組(F15組，含15%新生牛血清)、正常血清濃度加酒精組(F15/EtOH組，酒精濃度為100mmol/L)、血清饑餓組(F2組，含2%新 生牛血清)、血清饑餓加酒精組(F2/EtOH組)、血清饑餓加IGF-1組(F2/IGF-1組，IGF-1濃度為25ng/ml)和血清饑餓、IGF-1加酒精組(F2/IGF-1/EtOH組)。于培養(yǎng)24、48、72、96h檢測細胞增殖、細胞內堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性和骨鈣素(bone gla protein, BGP)mRNA表達。結果 各時間點F15/EtOH組成骨細胞吸光度(A)值及ALP活性、BGP mRNA表達較F15組均下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。F2組較F15組A值及ALP、BGP mRNA降低(P＜0.05)，F2/EtOH組較F2組降低(P＜0.05)，F(xiàn)2/IGF-1組較F2組增加(P＜0.05)；F2/IGF-1/EtOH組較F2/IGF-1組除24h外A值無明顯降低(P＞0.05)，ALP、BGP mRNA均降低(P＜0.05)，A值及ALP、BGP mRNA較F2/EtOH組增加(P＜0.05)。結論 酒精能引起成骨細胞增殖和功能抑制，加重血清饑餓對成骨細胞的抑制作用，可能是酒精性骨損害的機制之一。IGF-1能改善血清饑餓引起的成骨抑制，并抵抗酒精抑制細胞增殖的作用，可能成為探索治療酒精性骨損害的途徑之一。
目的 探索自體全層皮膚移植成活過程中表皮干細胞隨微環(huán)境的改變而變化的規(guī)律，為表皮干細胞的臨床應用提供理論依據。方法Wistar大鼠42只，于背部制作1.5 cm×1.5 cm自體全層皮膚原位移植模型。按取材時間點隨機分成7組（G1～G7組）,每組6只，分別為術后第1、3、5、7、14、21和30天；各組術前取材作對照。在各時間點大體觀察移植皮片情況；于手術前、后各時間點切取皮片組織標本，行HE染色和免疫組織化學染色，觀察組織學變化及整合素β1和基因物質p63陽性細胞變化。結果 術后第3天，G5、G6組各有1只動物移植皮片周圍感染，其他各組移植皮片均成活良好。G1~G4組細胞水腫，炎性細胞浸潤，纖維細胞逐漸增多，G5~G7組上皮化程度越來越高，纖維細胞含量越來越少。各組整合素β-1陽性細胞率低于基因物質p63，但隨觀察時間延長變化規(guī)律相似。陽性細胞在移植皮片中的排列結構紊亂，分布到表皮各層，從G6組開始逐漸集中于表皮的基底層和毛囊隆突部，但在表皮的其他各層仍然有陽性細胞。G1組陽性細胞率開始逐漸減少，G2組達到最低，然后逐漸增加，G1～G3組手術前、后比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；G4組接近術前（P＞0.05）；G6組達到最高峰后逐漸降低，G5～G7組手術前、后比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 表皮干細胞在自體全層皮片移植成活過程中，數量逐漸減少后增加,至超過正常，后又逐漸減少；在分布上開始紊亂，幾乎分布表皮各層，后又趨向正常規(guī)律性變化。
目的 探討優(yōu)化生長因子微包囊制作方法，觀察其釋放規(guī)律和復合微小顆粒骨異位成骨的效果。方法 正交設計優(yōu)化聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly-DL-lactide-co-glycolide,PLGA)微包囊制作工藝，于2、4、8、12、24、36、48、60、72、84、96、120、144、168、192、216、240和264 h計算微包囊的累計釋放量。實驗取24只Wistar大鼠，隨機分為4組（n=6），每只大鼠于雙側股部作1 cm切口，制備臀大肌肌袋模型。A組雙側植入膠原，B組雙側植入膠原和顆粒骨，C組雙側植入膠原和重組人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)/PLGA緩釋微包囊；D組雙側植入膠原、顆粒骨與rhBMP-2/PLGA緩釋微包囊。于術后3、4和5周取樣(n=2)行大體和組織學觀察。結果 各優(yōu)化變量對微包囊粒徑及其包封率均有影響，包囊表面光滑, 成球較好。體外能夠在11 d內緩慢釋放。術后3周大體觀察，A組未觸及移植物，B、C、D組可觸及，微包囊呈白色顆粒包裹于組織中。組織學觀察：術后3周，A組膠原已經完全吸收，其余3組可見殘余膠原；術后4周，A組膠原已不易見到，B組可見微小顆粒骨繼續(xù)吸收，體積變小；C組包囊體積縮小，囊間成骨性細胞增多；D組微小顆粒骨和微包囊繼續(xù)吸收，成骨性細胞和軟骨性細胞團增多；術后5周，B、C、D組均可見植入物體積減小，包囊被吸收破碎，但顆粒骨和包囊周圍的軟骨性細胞、成骨性細胞更加密集。結論 優(yōu)化PLGA微包囊制備工藝，使其在體外能夠長時間緩釋。自體微小顆粒骨可在臀大肌肌袋內異位誘導生成大量成骨性細胞，PLGA微包囊可以與其有機復合，并在減少生長因子用量的同時協(xié)同微小顆粒骨成骨。
目的 探討以去細胞的周圍神經細胞外基質（extracellular matrix, ECM）為支架，復合攜帶血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的質粒DNA，橋接修復大鼠坐骨神經缺損的效果。方法 30只雌性SD大鼠作為供體，用化學萃取方法獲得去細胞的周圍神經ECM支架，黏附攜帶VEGF的質粒DNA，制備VEGF基因活化基質（gene-activated matrix, GAM），用于體內實驗。將30只雌性Wistar大鼠制備坐骨神經缺損動物模型，再隨機分為三組，每組10只。A組用VEGFGAM修復，B組用浸浴多聚賴氨酸的ECM支架修復，C組為自體神經移植修復。術后12周，采用激光共聚焦顯微鏡、光鏡、透射電鏡等形態(tài)學方法及神經電生理學方法評價再生神經功能。結果 VEGF-GAM作為一種局部的基因緩釋系統(tǒng)釋放VEGF，表達12周以上。術后12周，A組前角運動神經元存活率為79.13％±2.53％，C組為75.26％±4.48％，二者比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；B組為56.09％±1.89％，A、C組均優(yōu)于B組，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。A組遠端再生神經軸突數為13 463±794個/mm2，較C組16 809±680個/mm2差，但優(yōu)于B組10 260±1 117個/mm2，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。A組動作電位傳導速度為16.44±1.65 m/s，較C組23.79±2.75 m/s差，優(yōu)于B組12.87±1.42 m/s，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。A組腓腸肌濕重恢復率為71.40％±3.05%，較C組87.00％±1.87％差，優(yōu)于B組50.00％±4.90％，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。A組坐骨神經指數恢復至39.37%±4.81%，較C組26.27%±2.71%差，優(yōu)于B組46.93％±2.96％，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。結論 VEGF GAM可促進大鼠坐骨神經功能的恢復，但效果差于自體神經移植。
目的 通過降低失神經骨骼肌局部成纖維細胞合成膠原纖維的方法，延緩失神經肌萎縮的進程。方法 將42只雄性SD大鼠左后肢制成2 cm坐骨神經缺損失神經腓腸肌模型，隨機分為三組，每組14只。A組于腓腸肌周圍注射粉防己堿（8mg/L），B組注射曲安舒松鈉（1.6 g/L），C組注射生理鹽水。術后30 d取材，根據不同觀察指標，選取相應足夠樣本，行肌纖顫電位波幅、肌濕重檢測、組織學觀察和顯微圖像分析儀測定。結果 A組肌纖顫電位波幅為0.195 8±0.041 9μV，B組0.185 2±0.050 3 μV，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），與C組0.137 7±0.058 9 μV比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。A組腓腸肌濕重為1.740 0±0.415 9 g，B組1.940 1±0.389 4 g，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），與C組0.800 0±0.100 0 g比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。光鏡下見，C組腓腸肌較A、B組萎縮明顯，肌纖維變細、變少，橫紋不清，肌細胞核增多，肌纖維間結締組織和脂肪細胞均明顯增多。A組肌動蛋白灰度值為440.124 2±46.135 6，B組476.211 4±41.668 8，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0..05），與C組380.040 0±86.315 9比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。A組肌纖維條數、直徑、截面積和肌纖維間膠原纖維增長面積與C組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；A、B組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。透射電鏡觀察各組均可見肌絲排列紊亂、線粒體消失和糖元顆粒減少等變性肌纖維存在，但C組變性肌纖維明顯較A、B組多。結論 抑制失神經骨骼肌纖維間結締組織增生有延緩肌萎縮的作用。
目的 探討皮下注射血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因、外科延遲兩種方法及其聯(lián)合應用對大鼠腹壁超范圍軸型皮瓣成活的影響。方法取雄性Wistar大鼠48只，體重400～450 g，制作大鼠以腹壁淺動脈為血管蒂的8 cm×8 cm超范圍軸型皮瓣模型。隨機分為六組,每組8只，分別為空白對照組（A組）、術時基因治療組（B組）、術前基因治療組（C組）、單純延遲組（D組）、延遲同時基因治療組（E組）和延遲后基因治療組（F組）。術后7 d，計算各組的皮瓣成活率；取皮瓣組織標本行HE染色，檢測平均微血管密度及內徑；取皮瓣組織標本行VEGF免疫組織化學染色檢測VEGF165的表達 結果〓各實驗組皮瓣成活率均顯著高于A組 (P＜0.05)；實驗組中，E組皮瓣成活率顯著高于其他各組 (P＜0.05)，余各實驗組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。微血管密度：B、C、E、F組顯著高于A、D組 ，差異有統(tǒng)計學意義(P＜005)；B、C、E、F組間以及A、D組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。微血管內徑：D組顯著大于E、F組 ，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而D組和E、F組均顯著大于A、B、C組，差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。免疫組織化學染色示A組及D組有少量VEGF165沉積，染色深度明顯淺于其他各組。B、C組和E、F組可見毛細血管內皮細胞胞漿內有棕褐色VEGF165抗原抗體復合物的沉積，染色較深，部分沉積物呈帶狀圍繞血管腔。各組實驗動物角膜層均未見新生血管。結論 皮下注射pcDNA4-VEGF165和外科延遲均能有效改善大鼠皮瓣的成活，但二者作用機制不同，而延遲的同時皮下注射VEGF基因能進一步提高大鼠皮瓣成活率。
目的 探討頜突外胚間充質干細胞對γ射線照射后大鼠造血系統(tǒng)的影響。方法 取孕11.5 d SD大鼠胚胎頜突，用消化法培養(yǎng)獲得外胚間充質干細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。雄性SD大鼠80只，體重220 g，隨機分為A、B、C、D 4組，每組20只，A、B和C組給予60Co γ射線全身一次性照射，照射劑量為6.0 Gy。A組：照射后6 h，尾靜脈移植第2代外胚間充質干細胞；B、C組尾靜脈分別移植真皮成纖維細胞和生理鹽水作為陰性對照；D組未照射，為正常對照組，注射生理鹽水0.3 ml/只。分別于1、2、3和4周動態(tài)觀察大鼠外周血白細胞及血紅蛋白的變化，并于第4周行骨髓有核細胞計數，測定大鼠骨髓粒細胞巨噬細胞集落形成單位（colony forming unit-granulocyte macrophage，CFU-GM），采用內源性脾結節(jié)法測定脾集落形成單位（colony forming unit-spleen，CFU-S），進行大鼠骨髓組織學檢查。結果 培養(yǎng)的原代外胚間充質干細胞呈單層生長，似成纖維樣梭形，有2～4個突起。移植后第3、4周，A組白細胞數明顯高于B、C組（P＜0.0），A、D組大鼠外周血血紅蛋白含量高于B、C組（P＜0.05）。移植后第4周，A組大鼠骨髓有核細胞計數明顯多于B、C組（P＜0.01）， CFU-S計數明顯多于B、C組（P＜0.01），A、D組CFU-GM數量均較B、C組多（P＜0.01）。結論 頜突外胚間充質干細胞具有干細胞的特征，能夠促進輻射損傷后大鼠造血功能的修復與重建。
目的 探討D-半乳糖(D-galactose, D-gal) 誘導SD大鼠骨髓間充質干細胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)衰老后的形態(tài)學及生物學變化情況。方法 取3只2月齡SD大鼠MSCs分離培養(yǎng)至第3代，一部分置于含8 g/L D-gal的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)至第6代作為誘導組；另一部分在原培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)至第6代作為對照組，并作表型鑒定。采用流式細胞儀檢測對照組加入8 g/L Dgal后4 d內細胞周期的分布變化。兩組MSCs培養(yǎng)7 d并繪制生長曲線，在光鏡和透射電鏡下觀察其形態(tài)和結構變化，β-半乳糖苷酶染色、單細胞凝膠電泳檢測DNA損傷方法檢測其衰老后的生物學行為變化。結果 誘導組MSCs鏡下呈典型的衰老細胞形態(tài)；對照組MSCs形態(tài)均勻，長勢良好。流式細胞儀檢測表明加入D-gal誘導后90% MSCs停留在G 0/G 1期，而S期和G 2/M期MSCs趨于消失，并隨誘導時間延長趨勢越明顯；對照組MSCs各期比例正常。MSCs生長曲線示誘導組生長速度較對照組明顯減慢。誘導組約85%呈β-半乳糖苷酶陽性染色，對照組染色為陰性。單細胞凝膠電泳示誘導組MSCs DNA有拖尾現(xiàn)象，對照組MSCs無DNA損傷。結論 D-gal對SD大鼠MSCs的老化具有誘導作用，初步推斷8 g/L為最適濃度，為研究MSCs衰老提供了較好的模型。
目的 建立外消旋聚乳酸復合神經生長因子（poly-D，L-lactic acid/nerve growth factor，PDLLA/NGF）可吸收性緩釋導管橋接修復大鼠坐骨神經缺損的動物模型，觀察復合導管對大鼠坐骨神經缺損再生的促進作用。方法 利用溶劑揮發(fā)法制備PDLLA單純導管和PDLLA/NGF緩釋導管，每根緩釋導管含NGF 450 U。SD大鼠40只隨機分成4組，每組10只，切除中段坐骨神經10 mm之后分別行自體神經移植（A組）、單純導管橋接（B組）、單純導管加一次性給藥（C組）、PDLLA/NGF緩釋導管橋接（D組）修復坐骨神經，除A組外，均保留10 mm缺損。術后3個月觀察神經再生情況，比較各組光鏡、電鏡及圖像分析等指標。結果 術后3個月導管與周圍組織粘連松，并開始降解，但外形仍保持完整。再生神經均順利通過導管腔，組織學觀察A組和D組內神經纖維數目多，大小均勻，成熟良好；B組和C組纖維結締組織多，神經纖維細小，髓鞘薄。圖像分析顯示除神經纖維計數D組高于A組外，A組和D組在纖維直徑、軸突直徑和髓鞘厚度方面差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），并明顯優(yōu)于B組和C組（P＜0.05)。結論 PDLLA/NGF緩釋導管能夠有效促進大鼠坐骨神經缺損再生，組織學觀察指標接近自體神經移植。
目的 探討異體神經片段經皮下包埋不同時段后對周圍神經再生的影響。方法 Wistar大鼠55只，雌雄不限，隨機分為5組，A、B、C組（實驗組）和D組（對照組）每組各10只， E組（供體組）15只。E組動物在出骨盆口以遠5 mm處切斷雙側坐骨神經，向遠端游離約15 mm，切斷作為移植物。A、B、C組動物均行左側大腿切口，皮下鈍性分離，埋入供體神經片段。術后1周（A組）、2周（B組）、3周（C組）顯露右側坐骨神經，距骨盆出口約5 mm處切斷，向遠端游離約10 mm再切斷，取出對側包埋的神經片段，修剪遠近端保留長度約10 mm，移植于右側神經缺損處。D組顯露右側坐骨神經后，在距骨盆出口約5 mm處切斷，向遠端游離約10 mm后再切斷，原位縫合。術后2、4、6、8、10及12周監(jiān)測坐骨神經功能指數（sciatic functional index，SFI），術后12周行電生理檢查測試運動神經誘發(fā)電位的傳導速度及潛伏期，組織學檢測移植神經再生軸突數目和面積，以及移植神經的超微結構變化。結果 術后各組SFI逐漸下降，12周時A組和D組的SFI最小，兩組間差異無統(tǒng)計學意義，但分別與B組和C組比較差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。術后12周A組和D組再生大量有髓神經纖維及少量無髓神經纖維，再生神經的數量和結構與正常神經相似，圖像分析顯示兩組間無明顯差別，與B組和C組比較差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。A組和D組的運動神經傳導速度及潛伏期結果無差異，優(yōu)于B組和C組，且差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。結論 異體神經片斷皮下包埋后有促進周圍神經再生的作用，皮下包埋1周組促神經再生作用優(yōu)于皮下包埋2、3周組。