目的 觀察高糖缺氧環(huán)境下轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(hREC)的影響。 方法 分別于5.5 mmol/L葡萄糖(低糖，LG)、25.0 mmol/L葡萄糖(高糖，HG)以及200 μmol/L CoCl2誘導(dǎo)的缺氧環(huán)境中培養(yǎng)hREC、人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(hRPEC)，并據(jù)此分為L(zhǎng)G組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組。實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞功能分析儀檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)初始時(shí)間(0 h)及培養(yǎng)后4、8、16、24、36、48、60、72 h的細(xì)胞生長(zhǎng)指數(shù)。分別在LG組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組細(xì)胞培養(yǎng)基中添加4 μmol/L TTR，即LG組+TTR、LG缺氧組+TTR、HG組+TTR、HG缺氧組+TTR，觀察TTR對(duì)hREC和hRPEC的作用以及hRPEC對(duì)hREC生長(zhǎng)的影響。Transwell共培養(yǎng)體系觀察hPEPC對(duì)hREC生長(zhǎng)影響。 結(jié)果 培養(yǎng)后72 h， LG組hREC、hRPEC生長(zhǎng)指數(shù)明顯高于LG缺氧組、HG組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(hREC：F=17.098、22.970, P＜0.05； hRPEC： F=45.442、9.011, P＜0.05)；HG組、HG缺氧組hREC、hRPEC生長(zhǎng)指數(shù)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(hREC：F=146.184,P＜0.05；hRPEC：F=27.907,P＜0.05)。HG組+TTR、 HG缺氧組+TTR hREC生長(zhǎng)指數(shù)顯著低于HG組、HG缺氧組，兩組hREC生長(zhǎng)指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=161.430、24.106,P＜0.05)； LG組+TTR、LG缺氧組+TTR hREC生長(zhǎng)指數(shù)高于LG組，LG缺氧組，兩組hREC生長(zhǎng)指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=200.486、48.662, P＜0.05)。LG組+TTR、LG缺氧組+TTR、HG組+TTR、HG缺氧組+TTR hRPEC生長(zhǎng)指數(shù)均較LG組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組略高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。共培養(yǎng)與單獨(dú)生長(zhǎng)細(xì)胞相比，共培養(yǎng)hRPEC對(duì)hREC生長(zhǎng)有顯著抑制作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(LG組：F=15.711,P＜0.05；LG缺氧組：F=45.659, P＜0.05；HG組：F=7.857, P＜0.05； HG缺氧組：F=6.348,P＜0.05)。 結(jié)論 高糖缺氧環(huán)境下TTR對(duì)hREC生長(zhǎng)有抑制作用。
目的 觀察經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈灌注溶栓藥治療實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞（CRAO）的效果及對(duì)全身的影響。 方法 對(duì)15只貓30只眼靜脈注射光化學(xué)藥物后激光照射貓視網(wǎng)膜動(dòng)脈形成CRAO模型，隨機(jī)分為3組 ：頸內(nèi)動(dòng)脈給藥組、靜脈給藥組及空白對(duì)照組，每組5只貓10只眼，分別經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈、股靜 脈給予尿激酶（UK）溶栓，空白對(duì)照組僅靜脈給予等滲鹽液。通過(guò)熒光素眼底血管造影判斷 動(dòng)脈再通情況，同時(shí)作血液生化指標(biāo)檢查以觀察其對(duì)全身的影響。 結(jié)果 用藥4h后，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈灌注組5只貓8只眼動(dòng)脈完全再通，占80%；靜脈組4只貓5只眼完全再通，占50％，兩組比較差異有顯著性的意義（R值的95％可信區(qū)間無(wú)重疊，相差顯著）。用藥后，頸內(nèi)動(dòng)脈給藥組血液中的凝血、纖溶、抗纖溶等指標(biāo)均優(yōu)于靜脈給藥組和空白對(duì)照組（P 值均lt;0.01）。 結(jié)論 在用UK溶栓治療實(shí)驗(yàn)性CRAO中，頸內(nèi)動(dòng)脈給藥比靜脈給藥更安全有效，這為臨床治療CRAO提供了新的給藥途徑和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)資料。 （中華眼底病雜志，2004，20：186-188）
目的 建立一個(gè)與臨床特征和病理機(jī)制相似的新的視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞（branch retinal vein occlusion, BRVO）模型。 方法 5只家兔靜脈內(nèi)注入光化學(xué)藥物孟加拉紅，以波長(zhǎng)530 nm氪綠激光照射單眼視網(wǎng)膜靜脈分支，1 h后行熒光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography, FFA)檢查，并于3 d后摘除5只兔眼球做病理切片。 結(jié)果 FFA檢查證實(shí)5只兔眼均有BRVO，病理切片證實(shí)5只兔眼阻塞的血管內(nèi)均有血栓形成。 結(jié)論 光化學(xué)法可建立和臨床病理機(jī)制相似的BRVO模型，此法操作簡(jiǎn)單，為BRVO的臨床研究提供了較好的動(dòng)物模型。 （中華眼底病雜志，2002，18：23-25）
目的 觀察重組葡激酶(recombinant staphylokinase，r-Sak)治療實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈阻塞(central retinal artery occlusion，CRAO)的效果及其對(duì)全身的影響。 方法 15只貓(30只眼)靜脈注射光化學(xué)藥物3%孟加拉紅后，用氬綠激光照射視網(wǎng)膜動(dòng)脈形成阻塞模型，靜脈給予r-Sak和尿激酶（erokinase，UK)溶栓，通過(guò)熒光素眼底血管造影判斷動(dòng)脈再通情況，同時(shí)作血液生化指標(biāo)的檢查。 結(jié)果 成功地建立了CRAO模型，實(shí)驗(yàn)用藥給藥4h后，r-Sak組CRAO的完全再通率為100%，而UK組的完全再通率僅為60%。使用r-Sak后血液中凝血、纖溶、抗纖溶指標(biāo)與空白對(duì)照組比較均差異無(wú)顯著意義。 結(jié)論 光化學(xué)法可建立和臨床相似的CRAO模型，R-Sak是一種高效安全、特異性強(qiáng)的溶栓藥，在臨床治療CRAO上有較好的應(yīng)用前景。 （中華眼底病雜志，2000，16：71-138）
【摘要】 目的 探討氬離子凝固術(shù)治療消化道息肉的臨床應(yīng)用及療效。 方法 2009年1-11月130例經(jīng)內(nèi)鏡及病理學(xué)證實(shí)的消化道息肉患者進(jìn)行氬離子凝固術(shù)，并對(duì)其臨床資料進(jìn)行總結(jié)分析。 結(jié)果 130例患者共323枚息肉，所有患者經(jīng)治療后均治愈，未見(jiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥。 結(jié)論 氬離子凝固術(shù)治療消化道息肉安全、便捷、有效，在內(nèi)鏡治療中有較高的臨床價(jià)值。
目的:探討內(nèi)鏡下氬離子凝固術(shù)(APC)聯(lián)合抑酸治療對(duì)Barrett食管的臨床療效。方法:選擇經(jīng)內(nèi)鏡及病理確診的Barrett食管患者40例,隨機(jī)分為兩組,治療組21例,對(duì)照組19例,治療組經(jīng)內(nèi)鏡下APC治療后聯(lián)合埃索美拉唑20mg 2次/日連續(xù)3月,對(duì)照組單用埃索美拉唑20mg 2次/日連續(xù)3月,分別于3月、6月、12月對(duì)兩組進(jìn)行臨床癥狀積分和內(nèi)鏡及病理隨訪。結(jié)果:兩組治療后3、6、12月臨床癥狀積分緩解無(wú)明顯差異性(Plt;0.05),但從內(nèi)鏡、病理隨訪的有效率來(lái)看,治療組與對(duì)照組相比有顯著差異性(Plt;0.05)。結(jié)論:BE內(nèi)鏡下APC聯(lián)合抑酸治療能有效逆轉(zhuǎn)Barrett上皮,是一種安全、有效的治療方法。
目的觀察轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)對(duì)視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(RMVEC)生物學(xué)行為的影響。 方法培養(yǎng)的RMVEC依照TTR濃度不同分為0(初始濃度)、4 μmol/L組。培養(yǎng)48 h后,噻唑藍(lán)(MTT)比色法、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)不同濃度TTR對(duì)RMVEC增生、遷移的影響。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)培養(yǎng)0(初始時(shí)間)、24、48 h時(shí)細(xì)胞損傷愈合情況。 結(jié)果MMT比色法檢測(cè)結(jié)果顯示,初始濃度組、4 μmol/L組吸光度值分別為0.17±0.02、0.40±0.03。兩組A值比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.47,P=0.000 1)。 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,初始濃度組、4 μmol/L組RMVEC向外遷移數(shù)分別為(140±7)、(227±14)個(gè)。兩組間RMVEC向外遷移數(shù)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.44,P=0.000 6)。 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,初始時(shí)間各組細(xì)胞劃痕距離大致相等;24 h,初始濃度組、4 μmol/L組細(xì)胞劃痕愈合距離分別為(134.4±45.4)、(330.0±23.1) μm。兩組細(xì)胞劃痕愈合距離比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.25,P<0.01)。48 h,4 μmol/L組完全愈合,初始濃度組未愈合。 結(jié)論TTR對(duì)RMVEC增生、遷移和損傷愈合有明顯促進(jìn)作用。
目的觀察糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)患者血清中微小RNA(miRNA)-195(miR-195)的表達(dá)。 方法抽取DR患者、糖尿病(DM)患者及正常受檢者靜脈血5 ml, 提取血漿總RNA, 純化。通過(guò)基因芯片篩選出在DR患者血清中具有差異表達(dá)的miRNA, 并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)結(jié)果。采用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miRNA調(diào)控的潛在靶基因, 篩選出miR-195及其靶基因高遷移率族蛋白B1(HMGB1)。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)轉(zhuǎn)染miR-195抑制物和(或)miR-195模擬物, 建立miR-195高表達(dá)和低表達(dá)細(xì)胞模型, 分為空白對(duì)照組、高表達(dá)(或)低表達(dá)組、陰性對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HMGB1 mRNA的相對(duì)表達(dá)比率。采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中HMGB1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果基因芯片檢測(cè)結(jié)果顯示, DR組miR-195表達(dá)較DM組下調(diào)8.34倍, 較正常組下調(diào)11.47倍。RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與基因芯片檢測(cè)結(jié)果相符。與DM組(F=0.034, t=8.057)和正常組(F=0.370, t=9.522)比較, DR組miR-195表達(dá)均明顯減弱, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示, 高表達(dá)組HUVEC的HMGB1 mRNA表達(dá)較空白對(duì)照組(F=0.023, t=11.287)和陰性對(duì)照組(F=0.365, t=7.471)明顯下調(diào), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);低表達(dá)組HUVEC的HMGB1 mRNA表達(dá)較空白對(duì)照組(F=0.053, t=10.871)和陰性對(duì)照組(F=0.492, t=6.883)明顯上調(diào), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示, 高表達(dá)組HUVEC的HMGB1蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組(F=0.021, t=8.820)、陰性對(duì)照組(F=0.039, t=7.401)明顯下降, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);低表達(dá)組HUVEC的HMGB1蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組(F=0.186, t=10.092)、陰性對(duì)照組(F=0.017, t=12.923)明顯升高, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論DR患者血清中miR-195表達(dá)明顯下調(diào)。
目的 觀察二十二碳六烯酸（DHA）對(duì)視網(wǎng)膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（RASMCs）大電導(dǎo)鈣激活鉀離子（BK）通道的激活作用。 方法 傳代培養(yǎng)RASMCs，取第6～8代細(xì)胞用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)。采用膜內(nèi)向外型單通道膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)，分別記錄DHA濃度0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L作用下RASMCs的BK通道開(kāi)放概率（NP0）。以0.0、1.0、5.0 μmol/L不同濃度的DHA干預(yù)RASMCs，并以此分為對(duì)照組、低劑量組及高劑量組。采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)RAMSCs的BK通道中β1亞基的相對(duì)蛋白表達(dá)量。 結(jié)果 DHA濃度為0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L時(shí)，RASMCs的BK通道NP0分別為0.044 4±0.001 2、0.081 2±0.004 2、0.209 0±0.006 1、0.310 5±0.005 3、0.465 0±0.007 8、0.497 7±0.014 5。隨DHA濃度的升高，BK通道NP0增加。不同DHA濃度作用下RASMCs的BK通道NP0比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.621，P＜0.05）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組、低劑量組、高劑量組RASMCs的BK通道中β1亞基的相對(duì)蛋白表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.657，P＞0.05）。 結(jié)論 DHA可直接激活RASMCs的BK通道。
目的觀察探討糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）患者血漿中miR-1470的表達(dá)變化及可能機(jī)制。方法住院治療的30例DR患者（DR組）以及在眼科門(mén)診檢查的30例糖尿病患者（DM組）、30名正常健康者（正常組）納入研究。抽取三組受檢者靜脈血5 ml，提取血漿總RNA，純化。通過(guò)基因芯片篩選出在DR患者血漿中具有差異表達(dá)的miRNA，并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)結(jié)果。采用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miRNA調(diào)控的潛在靶基因，篩選出miR-1470及其靶基因表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）。將人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞（hREC）分為正常組（糖濃度5.5 mmol/L）、高糖組（糖濃度25.0 mmol/L）。將hREC轉(zhuǎn)染miR-1470模擬物建立miR-1470高表達(dá)細(xì)胞模型，并將其分為空白對(duì)照組、高表達(dá)組、陰性對(duì)照組。采用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中miR-1470表達(dá)；采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)細(xì)胞中EGFR蛋白表達(dá)。兩組間計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間計(jì)量資料比較采用方差分析, 組間計(jì)量資料兩兩比較采用多重比較。結(jié)果RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與基因芯片檢測(cè)結(jié)果相符。DR組、DM組及正常組受檢者血漿中miR-1470表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=63.486，P=0.049）。與DM組和正常組比較，DR組患者血漿中miR-1470表達(dá)明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=111.2、73.9，P＜0.05）。高糖組hREC中miR-1470表達(dá)明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=42.082，P=0.015）。高糖組hREC中EGFR蛋白表達(dá)明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=?39.939，P=0.016）。空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、高表達(dá)組hREC中miR-1470表達(dá)（F=637.069，P=0.000）、EGFR蛋白表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=122.908，P=0.000）。與空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，高表達(dá)組hREC中miR-1470表達(dá)明顯升高（q=329.7、328.8，P＜0.05），EGFR蛋白表達(dá)明顯降低（q=242.5、234.6，P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組hREC中miR-1470表達(dá)、EGFR蛋白表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=1.5、7.9，P＞0.05）。結(jié)論DR患者血漿中miR-1470表達(dá)明顯下調(diào)，EGFR表達(dá)增加可能與其有關(guān)。