目的探討bFGF及EGF單獨(dú)或聯(lián)合誘導(dǎo)人BMSCs（human BMSCs，hBMSCs）向神經(jīng)細(xì)胞分化的差異以及Wnt/β-catenin信號通路在分化過程中的調(diào)控作用。方法 取鑒定后的第4代hBMSCs，根據(jù)不同誘導(dǎo)條件分為對照組（A組）、EGF誘導(dǎo)組（B組）、bFGF誘導(dǎo)組（C組）、EGF+bFGF誘導(dǎo)組（D組）以及EGF+bFGF+ Dickkopf相關(guān)蛋白1（Dickkopf-related protein 1，DKK-1）誘導(dǎo)組（E組）。誘導(dǎo)培養(yǎng)7 d后，采用倒置熒光相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，RT-PCR檢測神經(jīng)細(xì)胞 ［巢蛋白（Nestin）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶 （neuron-specific enolase，NSE）、微管相關(guān)蛋白 2（microtubule-associated protein 2，MAP-2）和膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）］ 以及Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵組件（β-catenin和Cyclin D1）基因水平表達(dá)變化，細(xì)胞免疫熒光染色以及Western blot檢查檢測神經(jīng)細(xì)胞（Nestin、GFAP）以及Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵組件 ［β-catenin、磷酸化β-catenin（phosphorylation β-catenin，P-β-catenin）、細(xì)胞胞質(zhì)β-catenin（Cytoplasmic β-catenin）及細(xì)胞核內(nèi)β-catenin（Nuclear β-catenin）］ 蛋白水平表達(dá)變化。結(jié)果 誘導(dǎo)培養(yǎng)后，與A、B組比較，C～E組細(xì)胞出現(xiàn)典型的神經(jīng)樣細(xì)胞變化，其中D組最明顯。RT-PCR檢測示與A組比較，C～E組Nestin、NSE、MAP-2，D、E組GFAP及B組NSE基因相對表達(dá)量升高；C、D組β-catenin以及B～D組Cyclin D1基因相對表達(dá)量升高；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。D組與E組比較，Nestin、NSE、MAP-2、GFAP、β-catenin、CyclinD1基因相對表達(dá)量均升高；與C組比較Nestin基因相對表達(dá)量下降，NSE、MAP-2、GFAP基因相對表達(dá)量均升高；組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。細(xì)胞免疫熒光染色觀察示C～E組NSE、GFAP陽性率與A組比較均升高，D組高于C、E組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Western blot檢測示，C、D組NSE蛋白相對表達(dá)量較A組升高，D組高于C、E組；C～E組GFAP蛋白相對表達(dá)量較A組升高、D組高于E組；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。C、D組與A組比較以及D組與E組比較，β-catenin、Cytoplasmic β-catenin、Nuclear β-catenin蛋白相對表達(dá)量以及β-catenin核質(zhì)比均升高，P-β-catenin蛋白相對表達(dá)量下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論bFGF可誘導(dǎo)hBMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化，而EGF無此作用，但能增強(qiáng)bFGF誘導(dǎo)作用；Wnt/β-catenin信號通路在這一過程中發(fā)揮正向調(diào)控效應(yīng)。
目的綜述阿侖膦酸鈉（alendronate，ALN）對骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）關(guān)節(jié)軟骨保護(hù)作用的研究進(jìn)展。 方法廣泛查閱近年國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果ALN能改善OA關(guān)節(jié)軟骨代謝微環(huán)境，抑制軟骨下骨骨重塑，對關(guān)節(jié)軟骨有潛在保護(hù)作用。 結(jié)論ALN有望成為一種OA疾病改善藥物，但OA治療尚缺乏統(tǒng)一的基礎(chǔ)與臨床評價標(biāo)準(zhǔn)，制定統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)并獲取臨床數(shù)據(jù)對ALN的開發(fā)和應(yīng)用有指導(dǎo)性意義。
目的 總結(jié)Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest 支架治療 Hangman 骨折的臨床療效，并初步評價其安全性。 方法 2007 年8 月－ 2008 年12 月，收治11 例Hangman 骨折患者。男8 例，女3 例；年齡27 ～ 51 歲，平均38 歲。按 Levine-Edwards 分型標(biāo)準(zhǔn)分型：Ⅱ型5 例，Ⅱ A 型2 例，Ⅲ型4 例，其中2 例合并C2、3 椎間盤突出。脊髓功能根據(jù)美國脊髓損傷學(xué)會（ASIA）標(biāo)準(zhǔn)：B 級3 例，C 級2 例，D 級3 例，E 級3 例。受傷至手術(shù)時間5 ～ 10 d，平均7 d。采用后路Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest 支架外固定治療，其中2 例合并C2、3 椎間盤突出者同期行頸椎前路椎間盤切除、椎間植骨鈦板內(nèi)固定術(shù)。術(shù)后復(fù)查X 線片示骨折愈合后拆除Halo-Vest 支架及Apofix 內(nèi)固定。 結(jié)果 術(shù)后切口均Ⅰ愈合。11 例均獲隨訪，隨訪時間21 ～ 36 個月，平均28.5 個月。術(shù)后6 個月X 線片示骨折均獲骨性愈合，未見內(nèi)固定物松動及斷裂。9 例未行頸椎前路手術(shù)者頸部活動基本正常，2 例術(shù)前合并C2、3 椎間盤突出者頸部屈曲受限。末次隨訪時脊髓功能ASIA評分為（88.6 ± 19.1）分，較術(shù)前（55.3 ± 14.3）分顯著改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.009，P=0.002）。根據(jù)Mayo（McGrory）頸椎創(chuàng)傷評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評價，獲優(yōu)8 例，良2 例，可1 例，優(yōu)良率91.0%。 結(jié)論 應(yīng)用Apofix 內(nèi)固定聯(lián)合Halo-Vest支架治療Hangman 骨折是一種安全、有效的方法。
目的 探討B(tài)MP-2 聯(lián)合低氧環(huán)境誘導(dǎo)BMSCs 向軟骨表型分化的可行性，并進(jìn)一步研究其生物學(xué)機(jī)制。 方法 取4 周齡健康清潔級雌性SD 大鼠骨髓采用貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs，取第2 代細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)條件不同分為4 組：常氧對照組（A 組）、常氧加BMP-2 誘導(dǎo)液組（B 組）、低氧（O2 濃度3%）對照組（C 組）和低氧加BMP-2誘導(dǎo)液組（D 組）。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，培養(yǎng)7、14、21 d 阿利新藍(lán)染色檢測各組軟骨 基質(zhì)糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）分泌水平，21 d 時Western blot 檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原和低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxiainducible factor 1α，HIF-1α）蛋白表達(dá)水平，RT-PCR檢測成軟骨、成骨以及低氧相關(guān)基因表達(dá)水平。 結(jié)果 誘導(dǎo)培養(yǎng)21 d，D 組細(xì)胞變?yōu)轭悎A形，細(xì)胞密度降低，細(xì)胞周邊呈陷窩樣，基質(zhì)包裹細(xì)胞；A、B、C 組均未見上述典型變化。D 組阿利新藍(lán)染色明顯較其他組深，并隨誘導(dǎo)時間延長藍(lán)染加深，21 d 時出現(xiàn)成片深染藍(lán)色，其他組各時間點(diǎn)僅見散在少量的淡染藍(lán)色。Western blot 檢測D 組細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平較其他組顯著增高，C、D 組HIF-1α 蛋白表達(dá)水平較A、B 組顯著增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。RT-PCR 檢測D 組成軟骨分化相關(guān)指標(biāo)Ⅱ型膠原α1（collagen Ⅱ α1，COL2 α1）、聚集蛋白聚糖表達(dá)最高，而B 組成骨分化相關(guān)指標(biāo)COL1 α1、ALP、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2 表達(dá)水平最高，C、D 組低氧相關(guān)指標(biāo)HIF-1α 較A、B 組顯著增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 BMP-2 聯(lián)合低氧（O2 濃度3%）環(huán)境可以誘導(dǎo)大鼠BMSCs 向軟骨分化，并抑制其成骨分化，HIF-1α 可能是參與促軟骨生成過程中的一個重要信號分子。
目的研究白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）聯(lián)合bFGF對人BMSCs（human BMSCs，hBMSCs）增殖及分化的影響。 方法取第4代hBMSCs，根據(jù)培養(yǎng)條件不同分為4組：A組為對照組，加入完全培養(yǎng)基（含10% FBS的α-MEM）常規(guī)培養(yǎng)；B組加入含10 ng/mL LIF的完全培養(yǎng)基；C組加入含10 ng/mL bFGF的完全培養(yǎng)基；D組加入含10 ng/mL LIF和10 ng/mL bFGF的完全培養(yǎng)基。采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）測定各組第4代hBMSCs生長曲線；倒置相差顯微鏡觀察各組hBMSCs形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測各組第8代hBMSCs表面標(biāo)志CD44、CD90、CD19、CD34表達(dá)情況。 結(jié)果4組細(xì)胞生長曲線均近似S形，且細(xì)胞增殖速率表現(xiàn)為D組>C組>B組>A組。各組細(xì)胞形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)A組細(xì)胞較早出現(xiàn)衰老和分化現(xiàn)象；B組細(xì)胞早期形態(tài)維持較好，但增殖相對緩慢，后期出現(xiàn)部分衰老細(xì)胞；C組少量細(xì)胞呈神經(jīng)樣細(xì)胞分化，但增殖較快；D組細(xì)胞增殖迅速，且能長期維持hBMSCs形態(tài)特征。流式細(xì)胞術(shù)檢測示，A、C組骨髓基質(zhì)標(biāo)志CD44、CD90表達(dá)較B、D組低；各組造血細(xì)胞標(biāo)志CD19、CD34均呈陰性，組間差異不明顯。 結(jié)論LIF聯(lián)合bFGF不僅可以維持hBMSCs的多向分化潛能，而且能夠促進(jìn)其快速增殖。