目的 介紹精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽在腫瘤診治領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀、價值及發(fā)展前景。方法 對RGD肽在腫瘤診治領(lǐng)域的實驗研究新進展進行綜述。結(jié)果 RGD肽存在于多種生物細胞外基質(zhì)中，能特異性識別細胞表面整和素并與之結(jié)合，從而介導(dǎo)多種重要的生命活動。外源性RGD肽與腫瘤細胞表面整和素結(jié)合后，可作為體內(nèi)RGD肽類物質(zhì)的競爭性抑制劑，從而能抑制腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)的黏附與遷移、抑制腫瘤血管形成、誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，且具有靶向性標(biāo)記腫瘤顯像以及與其他方法聯(lián)合治療腫瘤的潛在價值。結(jié)論 RGD肽能從多個環(huán)節(jié)對腫瘤起到抑制作用，且展示出與其他療法聯(lián)合治療腫瘤的前景。
目的探討甘氨酸對大鼠肝臟熱缺血再灌注后肝竇內(nèi)皮細胞損傷的保護作用及其機理。方法取健康雄性SD大鼠72只，制備成鼠肝熱缺血再灌注模型,而后隨機分成正常對照組、缺血再灌注組、士的寧＋甘氨酸治療組和甘氨酸治療組, 每組各18只。分別于再灌注后1、3、24 h檢測血漿中內(nèi)皮素（ET）、透明質(zhì)酸（HA）、腫瘤壞死因子α （TNFα）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）及肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）含量的變化，并在光鏡下觀察肝竇內(nèi)皮細胞的病理改變。結(jié)果在再灌注后的不同時點，甘氨酸治療組中ET、HA、TNFα及ALT含量較缺血再灌注組顯著降低(P＜0.01或P＜0.05），SOD值相應(yīng)升高，同時光鏡下肝竇內(nèi)皮細胞的病理變化明顯改善，士的寧可部分拮抗甘氨酸的作用。結(jié)論甘氨酸對鼠肝熱缺血再灌注后肝竇內(nèi)皮細胞的損傷具有保護作用。推測這種作用可能與肝竇內(nèi)皮細胞及枯否細胞膜上的甘氨酸受體密切相關(guān)。
通過體外細胞毒性實驗和細胞與支架材料復(fù)合培養(yǎng)實驗的研究，評價精氨酸- 甘氨酸- 天冬氨酸- 重組蛛絲蛋白（pNSR16）/ 聚乙烯醇（poly vinyl alcohol，PVA）支架材料的細胞相容性。 方法 通過溶劑澆鑄 / 粒子瀝濾的方法制備pNSR16/PVA 支架材料及其浸提液。將小鼠胚胎成纖維細胞（NIH-3T3 細胞）與浸提液培養(yǎng)，采用MTT法檢測培養(yǎng)1、3、5 d 時支架材料的細胞毒性。將NIH-3T3 細胞與pNSR16/PVA 支架材料復(fù)合培養(yǎng)2、4、6 d 后行掃描電鏡、HE 染色觀察，并于復(fù)合培養(yǎng)6 d 后行免疫組織化學(xué)檢測，觀察NIH-3T3 細胞在支架材料上的黏附、生長及表達功能情況。 結(jié)果 MTT 法檢測顯示pNSR16/PVA 支架材料的細胞毒性為0 級。掃描電鏡觀察細胞在支架材料復(fù)合培養(yǎng)4 d后即可覆蓋支架材料表面，細胞呈一定方向排列。HE 染色示細胞能在支架表面黏附和生長，且隨培養(yǎng)時間的延長，細胞向支架內(nèi)部遷移。免疫組織化學(xué)檢測到NIH-3T3 細胞分泌的bFGF，細胞能進行正常分化。 結(jié)論 pNSR16/PVA 支架材料具有良好的細胞相容性，有望作為一種較理想的組織工程支架材料。
目的 研究藥物對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞線粒體功能影響, 為進行視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞藥物保護研究提供依據(jù)。 方法 新生小牛8只眼視網(wǎng)膜細胞培養(yǎng)，用激光掃描共聚焦顯微鏡（Confocal）檢測這些細胞在分別加入阿魏酸 （FA）、精氨酸、 甘氨酸、?；撬帷⒛X源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）和維生素E前后, 羅丹明123（dye rhodamine 123，Rh123）標(biāo)記的線粒體熒光強度的變化情況。 結(jié)果 500μg/ml FA可使線粒體熒光強度呈雙相變化。掃描60.772 s首次給藥后,熒光強度迅速下降(45.425±4.153→22.135±5.293), 但112.774 s再次給藥后, 曲線上揚(19.655±4.383→28.247±4.764), 在168.773s第三次給藥后, 曲線仍上揚。12.5mg/ml維生素E能增強線粒體熒光強度, 掃描56.457s給藥后,熒光強度曲線立即上揚(88.255±5.039→111.2 73±4.529)。50 ng/ml BDNF可使熒光強度升高, 在58.147、134.148s兩次給藥后, 熒光強度曲線均上揚,尤以首次作用明顯(69.115±5.038→77.225±5.131)。2.5 mg/ml甘氨酸和30 mg/ml精氨酸作用對線粒體熒光強度無明顯影響。6.25mg/ml?；撬峥墒咕€粒體熒光強度輕度減弱。 結(jié)論 FA、BDNF、維生素E可能通過線粒體途徑促進視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞代謝,氨基酸類則可能通過非線粒體途徑調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞活性。 （中華眼底病雜志，2004，20：229-232）
目的探討經(jīng)聚羥基脂肪酸酯表面顆粒結(jié)合蛋白（polyhydroxyalkanoates granule binding protein， PhaP）-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp，RGD）融合蛋白修飾后的聚羥基丁酸戊酸酯[poly（3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate），PHBV]和聚羥基丁酸己酸酯[poly（3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate），PHBHHx]的親水性及其與軟骨細胞的生物相容性。 方法利用溶劑揮發(fā)法制備PHBV和PHBHHx生物膜材料，掃描電鏡觀察材料結(jié)構(gòu)；通過蛋白工程技術(shù)表達純化PhaP-RGD融合蛋白，按照3.5 mg/mL濃度對兩種生物膜材料進行蛋白修飾，通過測量接觸角檢測蛋白修飾前后材料表面親疏水性的改變。采用三步消化法體外分離培養(yǎng)人鼻中隔軟骨細胞并傳代。取第2代細胞分別接種于PHBV（A1組）、PHBV/PhaP-RGD（A2組）、PHBHHx（B1組）、PHBHHx/PhaP-RGD（B2組）、細胞培養(yǎng)板（C組）。培養(yǎng)3 d后行DAPI染色觀察細胞增殖情況；3、7 d通過MTT法檢測細胞增殖能力；7 d掃描電鏡下觀察細胞在生物膜材料表面的貼附及形態(tài)結(jié)構(gòu)，并通過甲苯胺藍染色初步檢測細胞外基質(zhì)分泌情況。 結(jié)果掃描電鏡觀察示PHBV和PHBHHx生物膜材料表面為多孔結(jié)構(gòu)；經(jīng)融合蛋白修飾后PHBV、PHBHHx生物膜材料表面接觸角均顯著減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。細胞接種于生物膜材料表面后均能生長，培養(yǎng)3 d后B2組細胞增殖能力最強（P＜0.05）；7 d時各組軟骨細胞增殖能力均較3 d增強（P＜0.05），組間比較B1、B2組高于A1、A2、C組，B2組高于B1組、A1組高于A2組（P＜0.05）。培養(yǎng)7 d，甲苯胺藍染色示A1、A2、B1、B2組材料表面均可見藍色異染，其中A1、A2組染色程度相似，B2組染色較B1組深；掃描電鏡觀察示各組細胞貼附良好，細胞之間形成連接，并伸入材料孔隙內(nèi)。 結(jié)論經(jīng)PhaP-RGD融合蛋白修飾的PHBHHx生物膜材料與軟骨細胞有良好的生物相容性。
目的對比低氧培養(yǎng)與常氧條件下低氧模擬劑二甲基乙二?；拾彼幔╠imethyloxalylglycine，DMOG）對小鼠BMSCs成骨分化的影響。 方法原代分離培養(yǎng)健康3～4周齡昆明小鼠BMSCs，采用流式細胞術(shù)對細胞CD29、CD44、CD90、CD34表面標(biāo)志進行檢測，行成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化染色鑒定。取第3代BMSCs分為對照組（A組，常氧條件下培養(yǎng)）、低氧培養(yǎng)組（B組，1%O2低氧條件下培養(yǎng)）及DMOG干預(yù)組（C組，常氧條件下加入0.5 mmol/L DMOG培養(yǎng)）。分別于培養(yǎng)1、2、3、4 d采用MTT法檢測BMSCs增殖情況，7、14 d檢測ALP含量，24 h后采用Western blot法檢測低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor，HIF-1α）蛋白表達，3、7 d采用實時熒光定量PCR檢測RUNX2、Osterix基因表達，21 d行茜素紅染色觀察。 結(jié)果BMSCs流式細胞術(shù)表面標(biāo)志鑒定示CD29（+）、CD44（+）、CD90（+）、CD34（-）；成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化后茜素紅染色、油紅O染色及甲苯胺藍染色均呈陽性。MTT法檢測示，培養(yǎng)1 d，3組細胞增殖比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；2、3、4 d，與A組比較，C組均抑制細胞增殖，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；而B組則促進細胞增殖，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。培養(yǎng)各時間點，B、C組ALP含量、HIF-1α蛋白相對表達量及RUNX2、Osterix基因相對表達量均顯著高于A組，ALP含量及RUNX2、Osterix基因相對表達量C組高于B組，而HIF-1α蛋白相對表達量B組高于C組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。培養(yǎng)21 d茜素紅染色示，A組可見少許結(jié)節(jié)狀紅染物質(zhì)，B組可見中等量紅染物質(zhì)，而C組可見大量紅染物質(zhì)。 結(jié)論低氧能明顯促進BMSCs增殖，DMOG對BMSCs增殖無明顯影響；低氧與DMOG均能促進BMSCs成骨分化，且DMOG促BMSCs成骨分化能力更強。
目的 研究二甲基乙二酰基甘氨酸（dimethyloxalylglycine，DMOG）對跨區(qū)穿支皮瓣ChokeⅡ區(qū)血管生成的影響及作用機制。方法 將126只成年雄性SD大鼠隨機分為DMOG組、YC-1組和空白對照組，每組42只。3組大鼠背部制作大小為12 cm×3 cm的跨區(qū)穿支皮瓣模型；于術(shù)前1 d、2 h及術(shù)后1、2、3 d分別腹腔注射DMOG（40 mg/kg）、YC-1（HIF-1α抑制劑，10 mg/kg）和等量生理鹽水。術(shù)后觀察各組大鼠皮瓣成活情況，7 d時測量皮瓣成活面積并計算皮瓣成活率，皮瓣透光實驗、明膠-氧化鉛血管造影及HE染色觀察皮瓣ChokeⅡ區(qū)血管生成情況，免疫組織化學(xué)染色及Western blot法檢測皮瓣ChokeⅡ區(qū)VEGF及HIF-1α表達；3、5、7 d ELISA法測定皮瓣Choke Ⅱ區(qū)VEGF和HIF-1α蛋白含量。結(jié)果 術(shù)后7 d 時DMOG組皮瓣遠端未見明顯壞死，空白對照組和YC-1組皮瓣均發(fā)生壞死且主要位于遠端；DMOG組皮瓣成活率為90.28%±1.37%，高于YC-1組84.28%±1.45%及空白對照組85.83%±1.60%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。DMOG組皮瓣Choke Ⅱ區(qū)血管較多且結(jié)構(gòu)清晰、完整；YC-1組、空白對照組中Choke Ⅱ區(qū)血管較少且結(jié)構(gòu)紊亂。DMOG組血管數(shù)量為（25.56±1.29）條/視野，高于YC-1組（7.38±0.54）條/視野及空白對照組（14.48±0.91）條/視野，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后3、5、7 d，DMOG組皮瓣Choke Ⅱ區(qū)HIF-1α、VEGF表達均高于其余兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 DMOG能促進跨區(qū)穿支皮瓣Choke Ⅱ區(qū)血管生成，加速皮瓣早期血管化進程，改善微循環(huán)和血供，降低皮瓣缺血、缺氧損傷程度，提高成活率。