精子活力是衡量精液質(zhì)量和男性生育能力的一個(gè)重要臨床指標(biāo)。精子運(yùn)動(dòng)所需能量來(lái)自線粒體呼吸鏈的氧化磷酸化，線粒體形態(tài)、數(shù)目、酶活性、DNA完整性及活性氧（ROS）產(chǎn)生等的改變都影響精子生理功能。線粒體自噬是一種選擇性的細(xì)胞自噬途徑，作為一種清除損傷的線粒體和過(guò)量產(chǎn)生的ROS的防御機(jī)制，確保細(xì)胞內(nèi)線粒體功能穩(wěn)定，促進(jìn)應(yīng)激環(huán)境中細(xì)胞的存活。因此，推測(cè)精子細(xì)胞可能通過(guò)線粒體自噬這一特異性的選擇途徑清除異常線粒體以保護(hù)精子細(xì)胞生存并維持精子活力，自噬參與了精子的發(fā)生過(guò)程。
目的 研究自噬特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）對(duì)5-氟尿嘧啶（5-FU）誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系SMMC7721凋亡的影響，并初步探討其機(jī)制。方法 利用單丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色技術(shù)，在熒光顯微鏡下對(duì)細(xì)胞自噬進(jìn)行定性觀察；以CCK8法檢測(cè)3-MA抑制細(xì)胞自噬前后經(jīng)5-FU誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞的存活，凋亡以AnnexinⅤ/PI流式細(xì)胞分析法檢測(cè)；以Western blot法分別檢測(cè)自噬特異性蛋白LC3及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段的表達(dá)。結(jié)果 5-FU處理肝癌SMMC7721細(xì)胞48h后，可誘導(dǎo)其發(fā)生自噬，細(xì)胞存活率為（60.73±2.65）%，凋亡率為（40.42±2.34）%；聯(lián)合應(yīng)用3-MA處理48h后，可使肝癌SMMC7721細(xì)胞存活率明顯降低（P＜0.01），為（42.31±1.32）%，而細(xì)胞凋亡率顯著增加（P＜0.01），為（60.92±2.99）%，同時(shí)引起自噬特異性蛋白LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段表達(dá)增加，其灰度值比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。結(jié)論 自噬在5-FU誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞系SMMC7721凋亡過(guò)程中起保護(hù)性作用，抑制自噬可提高肝癌SMMC7721細(xì)胞對(duì)5-FU的敏感性，其可能主要通過(guò)激活caspase-3及剪切PARP來(lái)實(shí)現(xiàn)的。因此，自噬特異性抑制劑3-MA可能為提高肝癌對(duì)5-FU的敏感性提供新思路。
目的 了解調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)抑制腫瘤細(xì)胞自噬的研究進(jìn)展。方法 對(duì)國(guó)內(nèi)外有關(guān)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)抑制腫瘤細(xì)胞自噬的文獻(xiàn)進(jìn)行綜述。結(jié)果 在Ca2＋釋放及未折疊蛋白聚集而誘發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中，自噬可被多種通路激活，并調(diào)節(jié)生理及病理過(guò)程。結(jié)論 在腫瘤細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中，調(diào)節(jié)其反應(yīng)通路因子進(jìn)而抑制自噬的發(fā)生仍需進(jìn)一步研究。
目的探討自噬-溶酶體系統(tǒng)在慢性阻塞性肺疾病(簡(jiǎn)稱慢阻肺)大鼠骨骼肌萎縮中的作用機(jī)制。 方法采用單純熏香煙法復(fù)制慢阻肺大鼠動(dòng)物模型。采用Real time PCR,Western blot技術(shù)檢測(cè)大鼠趾長(zhǎng)伸肌中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的mRNA及蛋白表達(dá),探討自噬-溶酶體系統(tǒng)在慢阻肺大鼠骨骼肌萎縮中的作用機(jī)制,進(jìn)一步探索骨骼肌萎縮的機(jī)制。用透射電鏡觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌組織切片及肺組織切片中的變化。 結(jié)果Real time PCR分析結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌組織中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、Atg5的mRNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P均<0.05,其中Bnip3兩組對(duì)照P均<0.01)。兩組大鼠MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ的mRNA表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Western blot分析結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌組織中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的蛋白表達(dá)慢阻肺組顯著高于對(duì)照組(P均<0.05,其中Bnip3,MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1兩組對(duì)照P均<0.01)。透射電鏡下,相比于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌胞漿內(nèi)自噬溶酶體增多,肺組織切片中發(fā)現(xiàn)肺組織纖維化和炎癥細(xì)胞增多。 結(jié)論實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌組織內(nèi)自噬-溶酶體系統(tǒng)被激活,可能是骨骼肌萎縮的機(jī)制之一。
目的總結(jié)自噬及其在胃癌中的研究進(jìn)展。 方法檢索并篩選近年來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)表的有關(guān)自噬與胃癌關(guān)系的文獻(xiàn)并分別對(duì)自噬的特點(diǎn)、分子標(biāo)志、調(diào)控因素及其在胃癌中的意義和作用進(jìn)行綜述。 結(jié)果自噬既可促進(jìn)細(xì)胞的死亡，也可延長(zhǎng)腫瘤形成中癌細(xì)胞的存活。調(diào)控自噬的藥物（包括中藥）在腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用前景，但基于自噬調(diào)控的抗腫瘤治療效果仍取決于細(xì)胞內(nèi)自噬的實(shí)際水平。 結(jié)論目前對(duì)胃癌自噬現(xiàn)象的了解仍然知之甚少，闡明自噬現(xiàn)象的分子機(jī)理并通過(guò)合理調(diào)控自噬來(lái)殺傷癌細(xì)胞仍然需要更為深入的實(shí)驗(yàn)研究。
目的總結(jié)近年來(lái)自噬參與腫瘤細(xì)胞能量代謝關(guān)系的最新研究進(jìn)展。 方法主要根據(jù)PubMed檢索相關(guān)資料，就近年來(lái)關(guān)于自噬對(duì)腫瘤細(xì)胞能量代謝調(diào)控機(jī)理以及對(duì)腫瘤生物學(xué)效應(yīng)影響的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。 結(jié)果自噬能夠通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞葡萄糖攝取、糖酵解途徑、氧化磷酸化以及脂代謝和氨基酸代謝進(jìn)行調(diào)控，從而使腫瘤的生物學(xué)行為發(fā)生改變。 結(jié)論自噬對(duì)腫瘤能量代謝的調(diào)控為腫瘤在應(yīng)激條件下的存活機(jī)制提供了理論依據(jù)。加深自噬對(duì)腫瘤能量代謝的調(diào)控機(jī)制以及對(duì)腫瘤生物學(xué)行為影響的研究有助于開(kāi)發(fā)新的、更有效的個(gè)性化的抗癌療法。就自噬對(duì)腫瘤能量代謝研究進(jìn)展來(lái)看，我們必須揭示清楚的是自噬對(duì)腫瘤能量代謝調(diào)控是否與癌基因、抑癌基因、信號(hào)通路等其他因素有關(guān)，以及對(duì)不同類型腫瘤生物學(xué)行為產(chǎn)生何種影響。
目的研究在慢性阻塞性肺疾?。ê?jiǎn)稱慢阻肺）大鼠肺組織中自噬相關(guān)蛋白的變化。 方法單純煙熏法構(gòu)建慢阻肺大鼠動(dòng)物模型，采用Real time PCR，Western blot技術(shù)檢測(cè)檢測(cè)大鼠肺組織中PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR及自噬相關(guān)基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1、P62、Atg7、Atg12的mRNA及蛋白表達(dá)，探討在慢阻肺大鼠肺組織中自噬水平及自噬相關(guān)蛋白的變化。用LC3B免疫組化比較COPD組與正常大鼠間自噬水平的變化。 結(jié)果Real time PCR分析結(jié)果顯示，與正常組相比，慢阻肺組大鼠肺組織中自噬相關(guān)基因Beclin1、Atg5、Atg12的mRNA表達(dá)顯著增高（P＜0.05，其中Beclin1、Atg5兩組比較P＜0.01）。Atg7的mRNA表達(dá)在慢阻肺組與正常組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Western blot分析結(jié)果顯示，慢阻肺組大鼠肺組織中PI3K蛋白、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。自噬相關(guān)基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1蛋白表達(dá)增高（P＜0.05，其中LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5兩組比較P＜0.01）。P62蛋白表達(dá)顯著下降（P＜0.01）。LC3B免疫組化顯示，慢阻肺組LC3B表達(dá)高于正常組。 結(jié)論煙熏12周的慢阻肺大鼠與正常組相比，自噬通路上游蛋白PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的表達(dá)降低，自噬蛋白表達(dá)增加，自噬水平增加。
目的 總結(jié)細(xì)胞自噬在周圍神經(jīng)損傷后病理生理變化過(guò)程中的作用及調(diào)控機(jī)制，為周圍神經(jīng)損傷的治療提供新的思路。 方法 廣泛查閱近 5 年與細(xì)胞自噬在周圍神經(jīng)損傷及再生方面的相關(guān)文獻(xiàn)，并進(jìn)行總結(jié)與討論。 結(jié)果 通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行藥物干預(yù)及基因敲除等方法調(diào)節(jié)其自噬功能后證實(shí)，雪旺細(xì)胞自噬主要通過(guò) JNK/c-Jun 通路影響后續(xù)的髓鞘崩解、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及軸突再生等一系列過(guò)程，通過(guò)調(diào)節(jié)雪旺細(xì)胞自噬可以改變周圍神經(jīng)損傷后瓦勒變性的發(fā)生、發(fā)展，維持周圍神經(jīng)結(jié)構(gòu)的完整性，但其對(duì)后續(xù)軸突再生的作用仍存在爭(zhēng)議。 結(jié)論 細(xì)胞自噬過(guò)程在周圍神經(jīng)損傷后病理生理變化過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，深化研究其機(jī)制及作用，可為周圍神經(jīng)損傷后治療方法的研究提供新思路。
糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）神經(jīng)損傷的病理改變主要包括神經(jīng)細(xì)胞損傷和膠質(zhì)細(xì)胞增生，均出現(xiàn)在DR早期，可由高血糖刺激直接引起；兩者相互促進(jìn)，導(dǎo)致DR進(jìn)一步加重。DR神經(jīng)細(xì)胞損傷的分子機(jī)制研究主要集中于炎癥、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、晚期糖基化終末產(chǎn)物的形成增加等細(xì)胞外環(huán)境的改變及相關(guān)的信號(hào)通路，其主要結(jié)局為凋亡和自噬。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞損傷后反應(yīng)性激活，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量及胞內(nèi)蛋白表達(dá)水平的改變。在非增生型DR中，神經(jīng)細(xì)胞損傷較輕，膠質(zhì)細(xì)胞輕度活化增生；而在增生型DR中，膠質(zhì)細(xì)胞明顯活化增生，釋放大量炎癥因子及血管活性物質(zhì)，導(dǎo)致視神經(jīng)損傷的進(jìn)一步加重。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2、c-Fos、p38絲裂原活化蛋白激酶等多條信號(hào)通路均與之相關(guān)。對(duì)這些分子機(jī)制及信號(hào)通路的研究將有望在細(xì)胞水平上調(diào)控DR神經(jīng)損傷的病理改變。
目的 探討 Beclin-l 基因與胰腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法 ① 回顧性收集 2009 年 4 月至 2009 年 11 月期間四川大學(xué)華西醫(yī)院行手術(shù)切除的胰腺癌標(biāo)本 25 例及正常胰腺組織 20 例，采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 和免疫組化染色方法分別檢測(cè)胰腺癌組織及正常胰腺組織中 Beclin-1 mRNA 及其蛋白的表達(dá)水平，并分析胰腺癌組織中 Beclin-1 蛋白的表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系。② 將 PANC-1 細(xì)胞分為 2 組，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞轉(zhuǎn)染 PLenO-WPI-Beclin-1 重組慢病毒載體，未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞未進(jìn)行重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染，分別于共培養(yǎng) 24 及 48 h 時(shí)采用 PCR 法檢測(cè) Beclin-1 mRNA 的表達(dá)水平。③ 將 PANC-1 細(xì)胞分為 3 組，轉(zhuǎn)染組加入 PLenO-WPI-Beclin-1 重組慢病毒載體，空載體組加入 PLenO-WPI 載體，空白對(duì)照組未加入任何載體，各組細(xì)胞于培養(yǎng) 1～7 d 期間每天采用 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果 ① 人胰腺癌中 Beclin-1 mRNA 及其蛋白的表達(dá)水平均低于正常胰腺組織（P<0.05）。在胰腺癌患者中，Beclin-1 蛋白的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、腫瘤直徑及分化程度均無(wú)關(guān)（P>0.05），而與 TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，TNM Ⅲ期和Ⅳ期患者的 Beclin-1 蛋白的表達(dá)水平低于Ⅰ期或Ⅱ期患者（P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性患者的 Beclin-1 蛋白的表達(dá)水平低于陰性患者（P=0.011）。② 轉(zhuǎn)染 24 h 和 48 h 時(shí)，同時(shí)點(diǎn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中 Beclin-1 mRNA 的表達(dá)水平高于未轉(zhuǎn)染組（P<0.05）。③ MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 1、2 及 3 d 時(shí)，轉(zhuǎn)染組、空載體組和空白對(duì)照組細(xì)胞的 OD 值比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；從轉(zhuǎn)染 4 d 開(kāi)始，至轉(zhuǎn)染 7 d 期間，同時(shí)點(diǎn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的 OD 值較空白對(duì)照組和空載體組均較低（P<0.05）。 結(jié)論 Beclin-1 基因及其蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)均下調(diào)，其可能是胰腺癌發(fā)生發(fā)展的原因之一。將 Beclin-1 基因?qū)?PANC-1 細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖能力降低，提示 Beclin-1 基因可能是胰腺癌基因治療的目標(biāo)基因。