精子活力是衡量精液質(zhì)量和男性生育能力的一個重要臨床指標。精子運動所需能量來自線粒體呼吸鏈的氧化磷酸化，線粒體形態(tài)、數(shù)目、酶活性、DNA完整性及活性氧（ROS）產(chǎn)生等的改變都影響精子生理功能。線粒體自噬是一種選擇性的細胞自噬途徑，作為一種清除損傷的線粒體和過量產(chǎn)生的ROS的防御機制，確保細胞內(nèi)線粒體功能穩(wěn)定，促進應(yīng)激環(huán)境中細胞的存活。因此，推測精子細胞可能通過線粒體自噬這一特異性的選擇途徑清除異常線粒體以保護精子細胞生存并維持精子活力，自噬參與了精子的發(fā)生過程。
目的 研究自噬特異性抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）對5-氟尿嘧啶（5-FU）誘導(dǎo)肝癌細胞系SMMC7721凋亡的影響，并初步探討其機制。方法 利用單丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色技術(shù)，在熒光顯微鏡下對細胞自噬進行定性觀察；以CCK8法檢測3-MA抑制細胞自噬前后經(jīng)5-FU誘導(dǎo)SMMC7721細胞的存活，凋亡以AnnexinⅤ/PI流式細胞分析法檢測；以Western blot法分別檢測自噬特異性蛋白LC3及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段的表達。結(jié)果 5-FU處理肝癌SMMC7721細胞48h后，可誘導(dǎo)其發(fā)生自噬，細胞存活率為（60.73±2.65）%，凋亡率為（40.42±2.34）%；聯(lián)合應(yīng)用3-MA處理48h后，可使肝癌SMMC7721細胞存活率明顯降低（P＜0.01），為（42.31±1.32）%，而細胞凋亡率顯著增加（P＜0.01），為（60.92±2.99）%，同時引起自噬特異性蛋白LC3-Ⅱ及凋亡蛋白caspase-3活化片段和PARP裂解片段表達增加，其灰度值比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01）。結(jié)論 自噬在5-FU誘導(dǎo)肝癌細胞系SMMC7721凋亡過程中起保護性作用，抑制自噬可提高肝癌SMMC7721細胞對5-FU的敏感性，其可能主要通過激活caspase-3及剪切PARP來實現(xiàn)的。因此，自噬特異性抑制劑3-MA可能為提高肝癌對5-FU的敏感性提供新思路。
目的 了解調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)抑制腫瘤細胞自噬的研究進展。方法 對國內(nèi)外有關(guān)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)抑制腫瘤細胞自噬的文獻進行綜述。結(jié)果 在Ca2＋釋放及未折疊蛋白聚集而誘發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中，自噬可被多種通路激活，并調(diào)節(jié)生理及病理過程。結(jié)論 在腫瘤細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中，調(diào)節(jié)其反應(yīng)通路因子進而抑制自噬的發(fā)生仍需進一步研究。
目的探討自噬-溶酶體系統(tǒng)在慢性阻塞性肺疾病(簡稱慢阻肺)大鼠骨骼肌萎縮中的作用機制。 方法采用單純熏香煙法復(fù)制慢阻肺大鼠動物模型。采用Real time PCR,Western blot技術(shù)檢測大鼠趾長伸肌中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的mRNA及蛋白表達,探討自噬-溶酶體系統(tǒng)在慢阻肺大鼠骨骼肌萎縮中的作用機制,進一步探索骨骼肌萎縮的機制。用透射電鏡觀察對照組和實驗組大鼠趾長伸肌組織切片及肺組織切片中的變化。 結(jié)果Real time PCR分析結(jié)果顯示,實驗組大鼠趾長伸肌組織中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、Atg5的mRNA表達實驗組顯著高于對照組(P均<0.05,其中Bnip3兩組對照P均<0.01)。兩組大鼠MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ的mRNA表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Western blot分析結(jié)果顯示,實驗組大鼠趾長伸肌組織中FOXO轉(zhuǎn)錄因子以及自噬相關(guān)基因Bnip3、Beclin1、p62、MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5的蛋白表達慢阻肺組顯著高于對照組(P均<0.05,其中Bnip3,MAP-LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1兩組對照P均<0.01)。透射電鏡下,相比于對照組,實驗組大鼠趾長伸肌胞漿內(nèi)自噬溶酶體增多,肺組織切片中發(fā)現(xiàn)肺組織纖維化和炎癥細胞增多。 結(jié)論實驗組大鼠趾長伸肌組織內(nèi)自噬-溶酶體系統(tǒng)被激活,可能是骨骼肌萎縮的機制之一。
目的總結(jié)自噬及其在胃癌中的研究進展。 方法檢索并篩選近年來國內(nèi)外發(fā)表的有關(guān)自噬與胃癌關(guān)系的文獻并分別對自噬的特點、分子標志、調(diào)控因素及其在胃癌中的意義和作用進行綜述。 結(jié)果自噬既可促進細胞的死亡，也可延長腫瘤形成中癌細胞的存活。調(diào)控自噬的藥物（包括中藥）在腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用前景，但基于自噬調(diào)控的抗腫瘤治療效果仍取決于細胞內(nèi)自噬的實際水平。 結(jié)論目前對胃癌自噬現(xiàn)象的了解仍然知之甚少，闡明自噬現(xiàn)象的分子機理并通過合理調(diào)控自噬來殺傷癌細胞仍然需要更為深入的實驗研究。
目的總結(jié)近年來自噬參與腫瘤細胞能量代謝關(guān)系的最新研究進展。 方法主要根據(jù)PubMed檢索相關(guān)資料，就近年來關(guān)于自噬對腫瘤細胞能量代謝調(diào)控機理以及對腫瘤生物學效應(yīng)影響的最新研究進展進行綜述。 結(jié)果自噬能夠通過對腫瘤細胞葡萄糖攝取、糖酵解途徑、氧化磷酸化以及脂代謝和氨基酸代謝進行調(diào)控，從而使腫瘤的生物學行為發(fā)生改變。 結(jié)論自噬對腫瘤能量代謝的調(diào)控為腫瘤在應(yīng)激條件下的存活機制提供了理論依據(jù)。加深自噬對腫瘤能量代謝的調(diào)控機制以及對腫瘤生物學行為影響的研究有助于開發(fā)新的、更有效的個性化的抗癌療法。就自噬對腫瘤能量代謝研究進展來看，我們必須揭示清楚的是自噬對腫瘤能量代謝調(diào)控是否與癌基因、抑癌基因、信號通路等其他因素有關(guān)，以及對不同類型腫瘤生物學行為產(chǎn)生何種影響。
目的研究在慢性阻塞性肺疾?。ê喎Q慢阻肺）大鼠肺組織中自噬相關(guān)蛋白的變化。 方法單純煙熏法構(gòu)建慢阻肺大鼠動物模型，采用Real time PCR，Western blot技術(shù)檢測檢測大鼠肺組織中PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR及自噬相關(guān)基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1、P62、Atg7、Atg12的mRNA及蛋白表達，探討在慢阻肺大鼠肺組織中自噬水平及自噬相關(guān)蛋白的變化。用LC3B免疫組化比較COPD組與正常大鼠間自噬水平的變化。 結(jié)果Real time PCR分析結(jié)果顯示，與正常組相比，慢阻肺組大鼠肺組織中自噬相關(guān)基因Beclin1、Atg5、Atg12的mRNA表達顯著增高（P＜0.05，其中Beclin1、Atg5兩組比較P＜0.01）。Atg7的mRNA表達在慢阻肺組與正常組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Western blot分析結(jié)果顯示，慢阻肺組大鼠肺組織中PI3K蛋白、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR蛋白表達顯著降低（P＜0.05）。自噬相關(guān)基因LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5、Beclin1蛋白表達增高（P＜0.05，其中LC3Ⅱ/Ⅰ、Atg5兩組比較P＜0.01）。P62蛋白表達顯著下降（P＜0.01）。LC3B免疫組化顯示，慢阻肺組LC3B表達高于正常組。 結(jié)論煙熏12周的慢阻肺大鼠與正常組相比，自噬通路上游蛋白PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR的表達降低，自噬蛋白表達增加，自噬水平增加。
目的 總結(jié)細胞自噬在周圍神經(jīng)損傷后病理生理變化過程中的作用及調(diào)控機制，為周圍神經(jīng)損傷的治療提供新的思路。 方法 廣泛查閱近 5 年與細胞自噬在周圍神經(jīng)損傷及再生方面的相關(guān)文獻，并進行總結(jié)與討論。 結(jié)果 通過對小鼠進行藥物干預(yù)及基因敲除等方法調(diào)節(jié)其自噬功能后證實，雪旺細胞自噬主要通過 JNK/c-Jun 通路影響后續(xù)的髓鞘崩解、炎性細胞浸潤及軸突再生等一系列過程，通過調(diào)節(jié)雪旺細胞自噬可以改變周圍神經(jīng)損傷后瓦勒變性的發(fā)生、發(fā)展，維持周圍神經(jīng)結(jié)構(gòu)的完整性，但其對后續(xù)軸突再生的作用仍存在爭議。 結(jié)論 細胞自噬過程在周圍神經(jīng)損傷后病理生理變化過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，深化研究其機制及作用，可為周圍神經(jīng)損傷后治療方法的研究提供新思路。
糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）神經(jīng)損傷的病理改變主要包括神經(jīng)細胞損傷和膠質(zhì)細胞增生，均出現(xiàn)在DR早期，可由高血糖刺激直接引起；兩者相互促進，導(dǎo)致DR進一步加重。DR神經(jīng)細胞損傷的分子機制研究主要集中于炎癥、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、晚期糖基化終末產(chǎn)物的形成增加等細胞外環(huán)境的改變及相關(guān)的信號通路，其主要結(jié)局為凋亡和自噬。神經(jīng)膠質(zhì)細胞在神經(jīng)細胞損傷后反應(yīng)性激活，表現(xiàn)為細胞形態(tài)、數(shù)量及胞內(nèi)蛋白表達水平的改變。在非增生型DR中，神經(jīng)細胞損傷較輕，膠質(zhì)細胞輕度活化增生；而在增生型DR中，膠質(zhì)細胞明顯活化增生，釋放大量炎癥因子及血管活性物質(zhì)，導(dǎo)致視神經(jīng)損傷的進一步加重。細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2、c-Fos、p38絲裂原活化蛋白激酶等多條信號通路均與之相關(guān)。對這些分子機制及信號通路的研究將有望在細胞水平上調(diào)控DR神經(jīng)損傷的病理改變。
目的 探討 Beclin-l 基因與胰腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法 ① 回顧性收集 2009 年 4 月至 2009 年 11 月期間四川大學華西醫(yī)院行手術(shù)切除的胰腺癌標本 25 例及正常胰腺組織 20 例，采用實時熒光定量 PCR 和免疫組化染色方法分別檢測胰腺癌組織及正常胰腺組織中 Beclin-1 mRNA 及其蛋白的表達水平，并分析胰腺癌組織中 Beclin-1 蛋白的表達水平與患者臨床病理學特征之間的關(guān)系。② 將 PANC-1 細胞分為 2 組，轉(zhuǎn)染組細胞轉(zhuǎn)染 PLenO-WPI-Beclin-1 重組慢病毒載體，未轉(zhuǎn)染組細胞未進行重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染，分別于共培養(yǎng) 24 及 48 h 時采用 PCR 法檢測 Beclin-1 mRNA 的表達水平。③ 將 PANC-1 細胞分為 3 組，轉(zhuǎn)染組加入 PLenO-WPI-Beclin-1 重組慢病毒載體，空載體組加入 PLenO-WPI 載體，空白對照組未加入任何載體，各組細胞于培養(yǎng) 1～7 d 期間每天采用 MTT 法檢測細胞增殖情況。 結(jié)果 ① 人胰腺癌中 Beclin-1 mRNA 及其蛋白的表達水平均低于正常胰腺組織（P<0.05）。在胰腺癌患者中，Beclin-1 蛋白的表達水平與患者的年齡、性別、腫瘤直徑及分化程度均無關(guān)（P>0.05），而與 TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，TNM Ⅲ期和Ⅳ期患者的 Beclin-1 蛋白的表達水平低于Ⅰ期或Ⅱ期患者（P<0.05）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者的 Beclin-1 蛋白的表達水平低于陰性患者（P=0.011）。② 轉(zhuǎn)染 24 h 和 48 h 時，同時點轉(zhuǎn)染組細胞中 Beclin-1 mRNA 的表達水平高于未轉(zhuǎn)染組（P<0.05）。③ MTT 實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染 1、2 及 3 d 時，轉(zhuǎn)染組、空載體組和空白對照組細胞的 OD 值比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；從轉(zhuǎn)染 4 d 開始，至轉(zhuǎn)染 7 d 期間，同時點轉(zhuǎn)染組細胞的 OD 值較空白對照組和空載體組均較低（P<0.05）。 結(jié)論 Beclin-1 基因及其蛋白在胰腺癌組織中的表達均下調(diào)，其可能是胰腺癌發(fā)生發(fā)展的原因之一。將 Beclin-1 基因?qū)?PANC-1 細胞后，細胞的增殖能力降低，提示 Beclin-1 基因可能是胰腺癌基因治療的目標基因。