目的 觀察人玻璃體液體外培養(yǎng)誘導人視網膜色素上皮（RPE）細胞間質轉分化作用。 方法 將3~5代傳代人RPE細胞分為普通培養(yǎng)組和玻璃體液培養(yǎng)組，分別應用普通培養(yǎng)液和25%玻璃體液進行培養(yǎng)。采用相差顯微鏡觀察兩組細胞形態(tài)變化，細胞爬片檢測肌動蛋白細胞骨架的變化。分別用細胞劃痕法、Transwell小室侵襲法及Ⅰ型膠原凝膠收縮實驗檢測細胞遷移、侵襲及收縮力的變化。應用逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測alpha;-平滑肌肌動蛋白（alpha;-SMA）和Snail1 mRNA的表達。 結果 相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，普通培養(yǎng)組細胞保持扁平形態(tài)，細胞接觸廣泛；玻璃體液培養(yǎng)組細胞一端呈扇形，另一端呈錐形拖尾形或梭形，細胞生長呈彼此分離的方式。細胞爬片結果顯示，普通培養(yǎng)組肌動蛋白骨架主要分布于RPE細胞周邊部，形如細胞周邊的條帶狀；玻璃體液培養(yǎng)組肌動蛋白纖維在細胞的一端重排，形成扇形扁平狀偽足突起，而在細胞另一端形成錐形拖尾改變。玻璃體液培養(yǎng)組與普通培養(yǎng)組比較，RPE遷移及侵襲能力顯著增強（t=14.190、22.630）、細胞收縮能力顯著下降（t=6.221），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。RT-PCR檢測結果顯示，玻璃體液培養(yǎng)組與普通培養(yǎng)組比較，Snail1 mRNA表達顯著上升（t=3.218，P=0.032），alpha;-SMA mRNA表達顯著下降（t=3.990，P=0.016），差異均有統(tǒng)計學意義。 結論 玻璃體液培養(yǎng)可誘導RPE細胞間質轉分化。這一作用通過增強RPE細胞遷移及侵襲能力，抑制RPE細胞收縮力；提高RPE細胞Snail1 mRNA表達，下調alpha;-SMA mRNA表達實現(xiàn)。
目的 觀察光照后人視網膜色素上皮（RPE）細胞趨化因子受體3（CCR3）配體嗜酸性粒細胞趨化因子（eotaxin）-1、eotaxin-2、eotaxin-3的表達。方法 體外培養(yǎng)人RPE細胞，取第5~10代生長狀態(tài)良好的傳代細胞用于實驗。將同代細胞隨機分為光照干預組與正常對照組。采用15 W藍色熒光燈自制光照器，以（600plusmn;100） Lux的強度對光照干預組細胞持續(xù)光照12 h，對照組細胞采用雙層高壓消毒錫紙包裹。隨后兩組細胞均置于恒溫培養(yǎng)箱內繼續(xù)培養(yǎng)，并于光照結束后0、3、6、12、24 h終止細胞培養(yǎng)。采用實時聚合酶鏈反應和蛋白免疫印跡法分別檢測eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA和蛋白的表達。結果 光照干預組細胞eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA 和蛋白表達均隨培養(yǎng)時間延長呈上升趨勢，其中eotaxin-3 mRNA和蛋白表達增加最為明顯。光照干預組與正常對照組比較，光照結束后0（t1=6.05，t2=12.561）、3（t1=2.95，t2=3.67） h時eotaxin-1、eotaxin-2 mRNA表達間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），eotaxin-3 mRNA表達間差異無統(tǒng)計學意義（t3=1.57、1.00，P＞0.05）；光照結束后6（t1=4.73，t2=18.64，t3=28.48）、12（t1=3.11，t2=20.62，t3=18.50）、24 （t1=8.25，t2=38.27，t3=18.60）h時eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 mRNA表達間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。光照干預組與正常對照組比較，除光照結束后3 h時eotaxin-3 蛋白表達間差異無統(tǒng)計學意義外（t3=1.28，P＞0.05）；光照結束后0（t1=4.85，t2=5.45，t3=6.21）、3 h（t1=5.64，t2=4.55）、6（t1=31.60，t2=6.63，t3=7.15）、12（t1=14.09，t2=18.22，t3=15.76）、24（t1=6.96，t2=10.47，t3=12.85） h 時eotaxin-1、eotaxin-2、eotaxin-3 蛋白表達間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 光照后人RPE細胞CCR3配體eotaxin-1、eotaxin-2 、eotaxin-3 mRNA和蛋白表達均隨培養(yǎng)時間延長呈上升趨勢，以eotaxin-3表達增加最為突出。
目的 觀察雙孔鉀離子通道蛋白（TRAAK K2P）持續(xù)性激動劑利魯唑對叔丁基過氧化氫（t-BHP）誘導體外培養(yǎng)的人視網膜色素上皮（hRPE）細胞氧化損傷的作用，探討其作用機制。方法 原代培養(yǎng)hRPE細胞，取第3~5代細胞進行實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、模型組和2、5、10、20 mu;mol/L加藥組及利魯唑單藥組。采用噻唑藍比色法檢測各組細胞存活率，以此確定利魯唑最佳干預濃度進行后續(xù)實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組，采用流式細胞儀檢測各組細胞的正常細胞率和早期凋亡率；倒置顯微鏡觀察各組細胞的形態(tài)變化；激光共聚焦顯微鏡觀察各組細胞核的形態(tài)變化和TRAAK K2P表達。結果與模型組比較，僅有10 mu;mol/L模型加藥組細胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.84，P＜0.05）。流式細胞儀檢測結果顯示，正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組正常細胞率分別為（97.6plusmn;1.3）%、（70.3plusmn;7.0）%、（86.9plusmn;5.2）%、（93.9plusmn;1.5）%；正常對照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.53、4.59、6.49，P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t=2.94、1.91，P＞0.05）。細胞早期凋亡率分別為（1.37plusmn;0.98）%、（25.50plusmn;8.02）%、（1.20plusmn;0.72）%、（5.20plusmn;2.00）%，正常對照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.07、7.13、5.94，P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t=0.06、1.18，P＞0.05）。正常對照組及利魯唑單藥組細胞呈梭形或多角形，細胞核呈均勻規(guī)則的橢圓形；模型組部分細胞腫脹、變圓、漂浮及細胞核固縮；模型加藥組個別細胞腫脹、變圓和細胞核固縮。正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組TRAAK K2P表達分別為0.040plusmn;0.003、0.041plusmn;0.001、0.049plusmn; 0.001、0.055plusmn;0.001。4組間TRAAK K2P表達比較，模型組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義（t=0.80，P＞0.05）；模型加藥組、利魯唑單藥組與正常對照組間差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.40、12.70，P＜0.05）。結論 利魯唑能在早期凋亡階段保護hRPE細胞免受t-BHP誘導的氧化損傷。利魯唑上調TRAAK K2P蛋白在細胞中的表達可能是其機制之一。
目的 觀察藍光照射對人視網膜色素上皮（RPE）細胞L-型鈣通道m(xù)RNA表達的影響。方法 體外培養(yǎng)的第4代人RPE細胞按隨機數(shù)字表法分為無光照組、光照組、光照+硝苯地平組和光照+（-）BayK8644組。（2000plusmn;500）Lux藍光照射6 h，終止細胞培養(yǎng)24 h。光照前加入硝苯地平和（-）BayK8644，濃度均為1times;10-5 mmol/L。熒光定量聚合酶鏈（PCR）技術檢測各組人RPE細胞L-型鈣通道alpha;1C亞型、alpha;1D亞型和alpha;1F亞型mRNA的表達。結果 熒光定量PCR產物alpha;1C、alpha;1D、alpha;1F和內參beta;-肌動蛋白的cDNA逆轉錄PCR擴增產物長度分別為68、157、125、186堿基對，產物的凝膠電泳結果顯示擴增條帶位置與以上片段相吻合。熒光定量PCR檢測結果顯示，光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達均高于無光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達均高于光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達高于光照+硝苯地平組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達均高于無光照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達與光照組和光照+硝苯地平組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組與光照組alpha;1D mRNA的表達比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達均高于無光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達均高于光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論 藍光照射可引起人RPE細胞L-型鈣通道中alpha;1C、alpha;1D及alpha;1F亞型mRNA表達不同程度的增高；1times;10-5 mmol/L硝苯地平不能對抗藍光對RPE細胞L-型鈣通道作用，而1times;10-5 mmol/L（-）Bay K8644可以增加以上3個亞基的表達。
目的 觀察急慢性中心性漿液性脈絡膜視網膜病變（CSC）的自身熒光（AF）和頻域光相干斷層掃描（OCT）圖像特征。方法 經裂隙燈顯微鏡、彩色眼底照相、熒光素眼底血管造影（FFA）、吲哚青綠血管造影檢查確診為CSC的67例患者73只眼納入研究。所有患者同時行AF及頻域OCT檢查。根據患者臨床及FFA表現(xiàn)，將其分為急性、慢性CSC 2種類型，分別為37例37只眼、30例36只眼。根據黃斑區(qū)神經上皮脫離區(qū)的AF表現(xiàn)將其分為單純減弱型、單純增強型及混合改變型3種類型。根據頻域OCT檢查顯示的神經上皮脫離區(qū)內外節(jié)的表現(xiàn)將其分為外節(jié)保存完整型、外節(jié)保存不全型及外節(jié)萎縮型3種類型。觀察急慢性CSC患者的AF及OCT圖像特征。結果 AF檢查發(fā)現(xiàn)，急性CSC 37只眼中，單純減弱型AF 19只眼，占51.35%；單純增強型AF 18只眼，占48.65%。慢性CSC 36只眼中，單純減弱型AF 2只眼，占5.56%；單純增強型AF 16只眼，占44.44%；混合改變型AF 18只眼，占50.00%。急慢性CSC患者3種AF表現(xiàn)的眼數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（chi;2=31.872，P=0.000）。頻域OCT檢查發(fā)現(xiàn)，急性CSC 37只眼中，外節(jié)保存完整型15只眼，占40.54%；外節(jié)保存不全型18只眼，占48.65%；外節(jié)萎縮型4只眼，占10.81%。慢性CSC 36只眼中，外節(jié)保存完整型5只眼，占13.89%；外節(jié)保存不全型17只眼，占47.22%；外節(jié)萎縮型14只眼，占38.89%。急慢性CSC患者3種OCT表現(xiàn)的眼數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（chi;2=10.572，P=0.005）。結論 急性CSC的AF表現(xiàn)以單純減弱型為主，慢性CSC的AF表現(xiàn)以混合改變型為主。急性CSC的OCT表現(xiàn)以外節(jié)保存不全型和外節(jié)保存完整型為主，慢性CSC的OCT表現(xiàn)以外節(jié)保存不全型和外節(jié)萎縮型為主。
目的 觀察息肉樣脈絡膜血管病變（PCV）伴視網膜色素上皮（RPE）撕裂的臨床特征。方法 臨床確診為PCV伴RPE撕裂的12例患者12只眼納入研究。其中，男性8例，女性4例；年齡39~71歲，平均年齡58.6歲。均為單眼發(fā)病，其中右眼8只，左眼4只。12只眼中，漿液性RPE脫離1只眼，出血性RPE脫離11只眼。所有患者均行眼底照相、熒光素眼底血管造影（FFA）及吲哚青綠血管造影（ICGA）檢查，3例患者同時行光相干斷層掃描（OCT）檢查。以血管弓為界，將RPE撕裂區(qū)位置分為血管弓內、血管弓上及血管弓外。根據撕裂區(qū)的形狀分為新月形、半月形及不規(guī)則形。觀察患者眼底、FFA、ICGA及OCT表現(xiàn)特征。結果 眼底檢查發(fā)現(xiàn)，RPE撕裂區(qū)呈灰白色病灶。12只眼中，RPE撕裂區(qū)位于血管弓內4只眼，占33.3%；血管弓上5只眼，占41.7%；血管弓外3只眼，占25.0%。RPE撕裂區(qū)形狀為新月形1只眼，占8.3%；半月形10只眼，占83.3%；不規(guī)則1只眼，占8.3%。FFA檢查發(fā)現(xiàn)，所有患者表現(xiàn)為早期RPE撕裂區(qū)可見透見脈絡膜熒光，晚期病灶內呈強熒光、邊緣銳利。早晚期均無熒光滲漏，RPE撕裂區(qū)邊緣可見卷曲皺縮的遮蔽熒光。ICGA檢查發(fā)現(xiàn)，早期可見RPE撕裂區(qū)清晰的透見熒光，缺乏毛玻璃樣熒光；晚期9只眼可見RPE撕裂區(qū)邊緣清晰的分界線，卷曲皺縮的遮蔽熒光。行OCT檢查的3只眼，其RPE撕裂區(qū)均可見RPE光帶斷裂缺失，邊緣可見RPE層卷邊的強反射區(qū)。結論 PCV伴RPE撕裂區(qū)多呈半月形，多位于血管弓內及血管弓上。血管造影檢查可見RPE撕裂區(qū)呈透見熒光，邊緣呈卷曲皺縮的遮蔽熒光。OCT檢查可見RPE撕裂區(qū)RPE光帶斷裂缺失，斷裂的邊緣RPE層卷邊呈卷曲的強反射帶。
目的 觀察正常人群后極部自發(fā)熒光（AF）的分布特點。方法 在我院眼科門診行眼底檢查的正常健康者78名156只眼納入研究。采用共焦激光掃描檢眼鏡HRA2對所有受檢者行AF檢查，獲取后極部AF平均圖像。應用Digimizer 3.7.1.0圖像分析系統(tǒng)進行長度定標，以凹部為圓心，做半徑為175、750、1250、2750 mu;m的同心圓，將黃斑區(qū)分為中心小凹、中心凹、旁中心凹及中心凹周圍區(qū)。除中心小凹外，用夾角為90deg;的2條放射線將各區(qū)進一步分為上方、下方、鼻側及顳側4個象限。測定黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限及視盤的AF熒光強度。同時，以凹部為原點，分別測定中心小凹垂直、水平方向的AF熒光強度。對比分析黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限和黃斑各分區(qū)不同年齡、性別及眼別之間的AF熒光強度的變化情況。結果 視盤、黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限AF熒光強度比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=528.648，P＜0.01）。中心小凹垂直方向AF呈ldquo;Vrdquo;型分布，水平方向AF呈傾斜ldquo;Mrdquo;型分布。不同年齡組黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限AF，中心小凹，旁中心凹下方、顳側、中心凹周圍區(qū)上方、下方、顳側間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。不同眼別間黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限AF熒光強度比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同性別間黃斑區(qū)各分區(qū)4個象限AF熒光強度比較，中心小凹，中心凹上方、下方、鼻側及中心凹周圍區(qū)顳側間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；其余分區(qū)象限間差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論 正常人黃斑中心小凹、中心凹、旁中心凹及中心凹周圍區(qū)上方、下方、鼻側及顳側AF分布不均；AF強度隨年齡增加而增強；不同眼別間AF分布對稱；不同性別間AF分布可能無差異。
目的 觀察周邊部視網膜病變相關區(qū)域的自發(fā)熒光（AF）表現(xiàn)。方法 42例周邊部視網膜病變患者60只眼納入本研究。所有患者均經全景眼底視網膜照相和熒光素眼底血管造影（FFA）檢查確診。應用共焦激光眼底血管造影儀HRAⅡ行黑色素相關近紅外自發(fā)熒光（NIA）及脂褐質相關自發(fā)熒光（FAF）檢查，分別采用波長為795、488 nm的激光激發(fā)成像。記錄9張/s，由共焦激光眼底血管造影儀HRAⅡ自動合成高分辨影像視野為55deg;，像素為822times;768的最終AF像。將AF像是否可見眼底血管及相關視網膜組織成像的影像判斷為有、無價值AF像。病變區(qū)域是否出現(xiàn)符合正常血管和視網膜組織的熒光表現(xiàn)判斷為正常、異常熒光。通過與圖像背景灰度比較，將異常熒光分級為無熒光、弱熒光和強熒光，觀察周邊部視網膜病變相關區(qū)域的AF表現(xiàn)。對比分析NIA和FAF檢查AF像均呈異常熒光表現(xiàn)者的異常熒光分級的一致性。結果 60只眼中，獲取有價值AF像者53只眼，占88.33%；獲取無價值AF像者7只眼，占11.67%。NIA檢查顯示，獲取有價值AF像的53只眼中正常熒光28只眼，占52.83%；呈片狀、圓點斑狀、條帶狀異常熒光25只眼，占47.17%。FAF檢查顯示，獲取有價值AF像的53只眼中正常熒光2只眼，占3.77%；呈片狀或與色素分布較為一致或沿血管分布的異常熒光51只眼，占96.23%。兩種檢查均呈異常熒光表現(xiàn)的25只眼中，異常熒光分級一致者18只眼，占72.00%；異常熒光分級不一致者7只眼，占28.00%。結論 周邊部視網膜病變相關區(qū)域存在不同程度的AF表現(xiàn)。
目的 觀察中心性漿液性脈絡膜視網膜病變（CSC）患者熒光滲漏點區(qū)域的眼底自身熒光（FAF）改變特點。方法 采用海德堡視網膜血管造影儀對CSC患者67例67只眼行熒光素眼底血管造影（FFA）檢查。其中，年齡le;45歲者47只眼，＞45歲者20只眼；急性CSC患者25只眼，慢性或復發(fā)性CSC患者 42只眼。使用488 nm波長激光采集FAF圖像，觀察熒光滲漏點區(qū)域的FAF改變特點。結果 67只眼中，F(xiàn)FA熒光滲漏點位置FAF無異常者35只眼，占52.2%；FAF呈點狀弱熒光者16只眼，占23.9%；FAF呈小片狀弱熒光或斑駁熒光者10只眼，占14.9%；FAF呈強熒光者6只眼，占9.0%。年齡le;45歲的47只眼中，F(xiàn)FA熒光滲漏點區(qū)域FAF無異常者26只眼，占55.3%；FAF呈點狀弱熒光者11只眼，占23.4%；FAF呈小片狀弱熒光或斑駁熒光者7只眼，占14.9%。FAF呈稍強熒光者3只眼，占6.3%。＞45歲的20只眼中，F(xiàn)FA熒光滲漏點位置FAF無異常者9只眼，占45.0%；FAF呈點狀弱熒光者5只眼，占25.0%；FAF呈片狀弱熒光或斑駁熒光者3只眼，占15.0%，F(xiàn)AF呈強熒光者3只眼，占15.0%。急性CSC 25只眼中，F(xiàn)FA熒光滲漏點位置FAF無異常改變者20只眼，占80.0%；FAF呈點狀弱熒光者4只眼，占16.0%；FAF呈小片狀弱熒光或斑駁熒光者1只眼，占4.0%。慢性或復發(fā)性CSC 42只眼中，F(xiàn)FA熒光滲漏點區(qū)域無異常改變者15只眼，占35.7%；FAF呈點狀弱熒光者12只眼，占28.6%；FAF呈小片狀弱熒光或斑駁熒光者9只眼，占21.4%；FAF呈強熒光者6只眼，占14.3%。結論 不同年齡和病程的CSC患者FFA熒光滲漏點位置具有特征性的FAF改變。