目的 建立成年兔視網(wǎng)膜Muuml;ller細胞體外原代培養(yǎng)方法。方法 運用組織塊培養(yǎng)法。分離出成年兔視網(wǎng)膜神經(jīng)感覺層，剪成1 mmtimes;1 mm大小組織塊，置于含有20%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)液/F12培養(yǎng)，采用倒置相差顯微鏡、透射電子顯微鏡觀察及熒光免疫組織化學染色的方法進行培養(yǎng)細胞的鑒定。結(jié)果 培養(yǎng)的細胞塊3 d后可見部分細胞突起長出，7 d后整個組織塊周圍放射狀長出較多細胞。倒置相差顯微鏡下，培養(yǎng)細胞呈一端細胞體豐富膨大，另一端有一長突起，細胞核橢圓形，常有2個或2個以上核仁；透射電子顯微鏡下，細胞胞體大，細胞漿豐富，內(nèi)含豐富的8～10 nm的微絲。熒光免疫組織化學法顯示細胞呈神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白和胞內(nèi)視黃醛結(jié)合蛋白陽性，陽性率達95%以上。結(jié)論 運用組織塊培養(yǎng)法可培養(yǎng)出兔視網(wǎng)膜Muuml;ller細胞。
目的 研究甲潑尼龍對視網(wǎng)膜激光損傷后Müller細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和增生細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的影響。 方法 40只Sprague-Danley(SD)大鼠隨機分為治療組和對照組，治療組大鼠在視網(wǎng)膜激光光凝損傷后連續(xù)3 d腹腔注射劑量為30 mg/kg的甲潑尼龍，對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水；分別于激光光凝術(shù)后3、7、14、28 d各處死5只動物，取出眼球，用AFA固定液進行組織固定后做石蠟包埋、切片，用免疫組織化學方法測定GFAP和PCNA的表達。 結(jié)果 激光光凝損傷后3d ，治療組和對照組視網(wǎng)膜Müller細胞均表達PCNA，治療組PCNA表達明顯較對照組弱，3 d 后PCNA表達消失；激光光凝損傷后3 d ，治療組和對照組視網(wǎng)膜Müller細胞均表達GFAP，在各時間點治療組GFAP表達明顯較對照組弱。 結(jié)論 甲潑尼龍可減輕Müller細胞激光損傷后PCNA和GFAP的表達，最終影響視網(wǎng)膜激光光凝損傷的瘢痕修復，這為研究視網(wǎng)膜激光損傷和防護的機制提供了實驗證據(jù)。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 299-301)
目的 評估單純距舟關(guān)節(jié)融合術(shù)治療 Müller-Weiss 病的早期療效。 方法 2013 年 5 月—2015 年 2 月，采用單純距舟關(guān)節(jié)融合術(shù)治療 Müller-Weiss 病 13 例。其中男 2 例，女 11 例；年齡 42～67 歲，平均 59 歲。病程 8～20 年，平均 13 年。根據(jù) Maceira 分期：Ⅲ期 7 例，Ⅳ期 6 例。術(shù)前患足負重位 X 線片測量足弓高度為（43.1±1.8）mm；側(cè)位 X 線片測量 Meary 角為（–2.8±2.3）°，距跟角為（5.8±2.4）°；Saltzman 位 X 線片測量跟骨外翻角為（–2.0±0.7）°。術(shù)前美國矯形足踝協(xié)會（AOFAS）中足評分為（43.5±12.4）分，疼痛視覺模擬評分（VAS）為（7.3±1.5）分。 結(jié)果 患者均獲隨訪，隨訪時間 14～39 個月，平均 20 個月?；甲闾弁醇伴g歇性跛行等癥狀均消失，距舟關(guān)節(jié)均骨性融合，融合時間 12～16 周，平均 13 周。術(shù)后無切口感染、皮膚壞死、內(nèi)固定物斷裂等并發(fā)癥發(fā)生。末次隨訪時，足弓高度、Meary 角、距跟角和跟骨外翻角分別為（52.5±2.2）mm、（1.3±2.2）°、（16.5±3.7）°、（0.4±0.7）°，AOFAS 中足評分為（83.8±9.1）分，VAS 評分為（1.0±0.4）分，均較術(shù)前顯著改善，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。 結(jié)論 對于保守治療無效的 Müller-Weiss 病患者，如距下關(guān)節(jié)和跟骰關(guān)節(jié)受累較少，單純距舟關(guān)節(jié)融合術(shù)是一種可靠、有效的治療方法。
目的觀察叔丁基對苯二酚（tBHQ）對高糖環(huán)境下視網(wǎng)膜Müller細胞中核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、血紅素氧合酶1（HO-1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的表達影響；初步探討tBHQ的抗氧化及抗凋亡作用。方法大鼠視網(wǎng)膜Müller細胞分為正常糖組（5.5 mmol/L）（N組）、高糖組（45.0 mmol/L）（HG組）、tBHQ干預組（HG+tBHQ組）。HG+tBHQ組Müller細胞培養(yǎng)48 h后，加入tBHQ 20 μmol/L預處理劑誘導Nrf2和HO-1的表達。免疫熒光染色法鑒定Müller細胞；蛋白免疫印跡法和實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測各組Müller細胞中Nrf2、HO-1、PI3K、B淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）、Bax蛋白和基因的表達；流式細胞儀檢測各組Müller細胞的凋亡。結(jié)果培養(yǎng)的Müller細胞細胞體大，細胞漿豐富；細胞核呈圓形或卵圓形，邊界清晰。HG組Müller細胞中Nrf2（t=4.114）、HO-1（t=9.275）蛋白表達較N組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.006、0.000）。HG+tBHQ組Müller細胞中Nrf2（t=7.847）、HO-1（t=7.947）、PI3K（t=5.397）、Bcl-2（t=6.825）蛋白表達較HG組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000、0.000、0.002、0.000）；Bax蛋白表達較HG組降低，差異有統(tǒng)計學意義（t=14.998、P=0.000）。HG組Müller細胞中Nrf2（t=7.292）、HO-1（t=15.014）mRNA較N組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000、0.000）。HG+tBHQ組Müller細胞中Nrf2（t=18.046）、HO-1（t=39.458）、PI3K（t=4.979）、Bcl-2（t=9.535）mRNA較HG組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000、0.000、0.003、0.000）；Bax mRNA較HG組降低，差異有統(tǒng)計學意義（t=16.520、P=0.000）。HG組Müller細胞凋亡率較N組增高，差異有統(tǒng)計學意義（t=39.905、P=0.000）；HG+tBHQ組Müller細胞凋亡率較HG組降低，差異有統(tǒng)計學意義（t=21.083、P=0.000）。結(jié)論tBHQ通過上調(diào)視網(wǎng)膜Müller細胞中Nrf2、HO-1、PI3K的表達，抑制Müller細胞的凋亡。
目的觀察丁基苯酞（NBP）對過氧化氫（H2O2）誘導下視網(wǎng)膜Müller細胞凋亡的保護作用。方法體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜Müller細胞分為正常對照組、模型組（H2O2組）、實驗組（H2O2+NBP組）。H2O2組、H2O2+NBP組細胞培養(yǎng)液中加入200 μmol/L H2O2刺激2 h后，H2O2組更換為完全培養(yǎng)基，H2O2+NBP組更換為含1 μmol/L NBP的完全培養(yǎng)基。正常對照組為常規(guī)培養(yǎng)細胞。蘇木精-伊紅（HE）染色觀察各組細胞形態(tài)改變；噻唑藍（MTT）比色法檢測NBP作用24、48 h后各組細胞活性；Hoechst33258染色觀察各組細胞凋亡情況；LIVE/DEAD®細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測各組細胞生存力；二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）+內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）紅色熒光探針（ER-Tracker Red）雙染色觀察各組細胞ER中活性氧（ROS）的表達水平。單因素方差分析聯(lián)合Dunnett統(tǒng)計學方法進行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果HE染色結(jié)果顯示，H2O2+NBP組細胞數(shù)量較H2O2組增加。MTT比色法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NBP作用24、48 h后，正常對照組與H2O2組、H2O2組與H2O2+NBP組細胞生存力比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=28.96、3.658、47.58、20.33，P＜0.001、0.022）。Hoechst33258結(jié)果顯示，H2O2+NBP組細胞少數(shù)細胞核邊集呈新月狀且細胞核碎裂減少，其余細胞藍色熒光均勻。LIVE/DEAD®細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測結(jié)果顯示，H2O2組中呈紅色熒光的死亡細胞明顯增多，呈綠色熒光的活細胞數(shù)量顯著減少；H2O2+NBP組呈綠色熒光的活細胞數(shù)量增多，呈紅色熒光的死亡細胞減少。DCFH-DA+ER-Tracker Red雙染色結(jié)果顯示，H2O2組細胞中綠色熒光強度明顯增強；H2O2+NBP組細胞中綠色熒光強度較H2O2組明顯降低。結(jié)論NBP通過抑制ROS的產(chǎn)生緩解H2O2誘導的人視網(wǎng)膜Müller細胞凋亡。
目的探討距舟關(guān)節(jié)融合聯(lián)合跟骨截骨治療 Müller-Weiss 病的早期療效。 方法2015 年 6 月—2017 年 2 月，對 14 例（14 足）保守治療無效的 Müller-Weiss 病患者行距舟關(guān)節(jié)融合聯(lián)合跟骨截骨治療。男 3 例，女 11 例；年齡 35～56 歲，平均 46.2 歲。左足 6 例，右足 8 例。Maceira 分期：Ⅲ期 5 例，Ⅳ期 9 例。病程 4～12 年，平均 7 年。術(shù)前攝 X 線片測量 Saltzman 位后足力線為（9.8±2.8）°，側(cè)位跟骨傾斜角（calcaneal pitch angle，CPA）為（14.7±5.1）°，側(cè)位距骨第 1 跖骨角（Meary 角）為（4.8±2.8）°，正位距骨第 1 跖骨角（talar 1 meta-tarsal angle，T1MA）為（25.0±7.3）°；無鄰近關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎。術(shù)前疼痛視覺模擬評分（VAS）為（5.9±1.5）分，美國矯形外科足踝協(xié)會踝與后足評分（AOFAS）為（58.8±17.6）分。 結(jié)果患者均獲隨訪，隨訪時間 14～27 個月，平均 22.3 個月。術(shù)后 2 例出現(xiàn)足內(nèi)側(cè)麻木感，2 例切口感染；其余患者無明顯不適。末次隨訪時，VAS 評分為（1.6±1.3）分，AOFAS 評分為（90.6±2.7）分，均較術(shù)前明顯改善（t=8.18，P=0.00；t=–6.95，P=0.00）。X 線片復查示，患者距舟關(guān)節(jié)及跟骨截骨均達骨性愈合；測量 Saltzman 位后足力線為（–2.5±2.7）°，側(cè)位 CPA 為（25.0±5.2）°、Meary 角為（2.6±2.1）°，正位 T1MA 為（8.1±3.8）°；除 Meary 角與術(shù)前比較差異無統(tǒng)計學意義（t=1.53，P=0.15）外，Saltzman 位后足力線、CPA、T1MA 與術(shù)前比較差異均有統(tǒng)計學意義（t=11.93，P=0.00；t=–8.89，P=0.00；t=8.05，P=0.00）。 結(jié)論對于保守治療無效且無鄰近關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的 Müller-Weiss 病患者，采用距舟關(guān)節(jié)融合聯(lián)合跟骨截骨治療可獲得較好的早期療效。
目的高表達多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）對糖基化終產(chǎn)物（AGEs）誘導下視網(wǎng)膜Müller細胞凋亡的影響。方法實驗研究。體外培養(yǎng)的人Müller細胞分為正常細胞組（N組）、空白對照組（N+AGEs組）、空載體對照組（Vec+AGEs組）及PSF高表達組（PSF+AGEs組）。N組為常規(guī)培養(yǎng)的Müller細胞；N+AGEs組僅做轉(zhuǎn)染處理并聯(lián)合AGEs誘導；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000分別將增強型綠色熒光蛋白（pEGFP）空載體、pEGFP-PSF真核表達質(zhì)粒導入Müller細胞并聯(lián)合AGEs誘導。細胞轉(zhuǎn)染24 h后應用AGEs（150 μg/ml）誘導72 h，采用HE、Hoechst 33258染色觀察各組細胞形態(tài)；分別采用MTT比色法、ELISA細胞凋亡試劑盒及2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯法檢測N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力、細胞凋亡值及細胞內(nèi)ROS水平。結(jié)果N組細胞形態(tài)飽滿，胞漿染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細胞體積縮小，胞質(zhì)致密濃縮、嗜酸性染色增強；PSF+AGEs組細胞形態(tài)尚飽滿，胞漿染色較均勻，胞核染色均一。N+AGEs組、Vec+AGEs組、PSF+AGEs組細胞生存力分別為0.42±0.11、0.35±0.12、0.68±0.12；細胞凋亡值分別為1.08±0.16、0.96±0.20、0.44±0.08；細胞內(nèi)ROS水平分別為28 833.67±3 550.06、28 356.67±4 854.81、18 616.00±3 382.54。與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細胞生存力明顯提高（F=20.65，P=0.000），細胞凋亡值（F=43.43，P=0.000）及細胞內(nèi)ROS水平（F=18.86，P=0.000）明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義。結(jié)論高表達PSF通過抑制ROS產(chǎn)生來緩解AGEs誘導下人Müller細胞凋亡，從而發(fā)揮對Müller細胞的保護作用。
目的觀察普羅布考對高糖環(huán)境下人視網(wǎng)膜Müller細胞中特化蛋白1（SP1）/細胞骨架相關(guān)蛋白（Keap1）/核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/半胱氨酸連接酶催化亞基（GCLC）表達的影響；初步探討普羅布考的抗氧化作用。方法體外培養(yǎng)的人Müller細胞分為正常糖組（5.5 mmol/L）、高糖組（25.0 mmol/L）、正常糖+普羅布考組、高糖+普羅布考組；后兩組中加入100 μmol/L普羅布考。免疫熒光染色法鑒定Müller細胞；免疫熒光染色法和實時RP-PCR（qRT-PCR）檢測各組Müller細胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白、mRNA的表達。兩組間數(shù)據(jù)比較采用獨立樣本t檢驗。結(jié)果體外培養(yǎng)的人Müller細胞谷氨酰胺合成酶染色陽性率＞95%。免疫熒光染色結(jié)果顯示，Müller細胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白均呈陽性表達。qRT-PCR結(jié)果顯示，與正常糖組比較，高糖組Müller細胞中SP1（t=28.30，P＜0.000）、Keap1（t=5.369，P=0.006）、Nrf2（t=10.59，P=0.001）mRNA表達顯著上調(diào)，GCLC顯著下調(diào)（t=4.633，P=0.010），差異均有統(tǒng)計學意義。與高糖組比較，高糖+普羅布考組Müller細胞中SP1（t=12.60，P=0.000）、Keap1（t=4.076，P=0.015）mRNA表達顯著下調(diào)，Nrf2（t=12.90，P=0.000）、GCLC（t=15.96，P＜0.000）mRNA表達顯著上調(diào)，差異均有統(tǒng)計學意義。結(jié)論普羅布考通過抑制高糖誘導Müller細胞中SP1、Keap1的表達，上調(diào)Müller細胞中Nrf2、GCLC的表達，發(fā)揮抗氧化作用。
神經(jīng)干細胞（NSC）是一類能向神經(jīng)細胞和膠質(zhì)細胞分化的特殊干細胞。Müller細胞作為視網(wǎng)膜主要內(nèi)源性NSC，具有在視網(wǎng)膜損傷后進入細胞周期增生并分化為神經(jīng)細胞的能力。在脊椎動物中，視網(wǎng)膜Müller細胞的內(nèi)源性NSC自發(fā)再生有著很高的效率，而哺乳動物這一能力幾乎完全消失。深入研究發(fā)現(xiàn)，Ascl1、Sox2、Lin28、Atoh7等部分轉(zhuǎn)錄因子具有促進Müller細胞增生并分化為神經(jīng)細胞的功能。而Ascl1聯(lián)合組蛋白脫乙酰酶抑制劑更能使小鼠Müller細胞分化的神經(jīng)細胞整合進入已有的視網(wǎng)膜并能對光做出反應，從而可能挽救視力。但與斑馬魚相比，哺乳動物Müller細胞增生再生能力依然十分有限。尋找更多能增強Müller細胞分化能力的新因子將成為亟待解決的重要問題。
缺血性視網(wǎng)膜病變會導致微血管損傷、炎癥進展和新生血管出現(xiàn)，是造成視力損傷的重要原因。在這些病理過程中，視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞的作用不容忽視，它們用途廣泛，與各類細胞相互作用，共同維持視網(wǎng)膜內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定并限制疾病進展。因此，膠質(zhì)細胞的活化和增生幾乎是所有視網(wǎng)膜疾病中普遍存在的反應。其中，小膠質(zhì)細胞和Müller細胞作為兩種主要的內(nèi)源性視網(wǎng)膜膠質(zhì)細胞，彼此影響、共同作用甚至相互依存，能夠通過不同反應發(fā)生形態(tài)及功能轉(zhuǎn)換，決定視網(wǎng)膜的損傷程度。這些反應不僅關(guān)乎疾病進展程度，也對維持神經(jīng)元及光感受器存活至關(guān)重要。了解缺血性視網(wǎng)膜病變中小膠質(zhì)細胞與Müller細胞間可能存在的交互作用，有望為尋找更具有針對性的早期治療靶點提供思路。