目的 觀察藏紅花素對視網膜缺血再灌注損傷（RIR）大鼠視網膜組織結構及腫瘤壞死因子-alpha;（TNF-alpha;）、白細胞介素-1beta;（IL-1beta;）表達的影響。方法 采用隨機數字表法將80只8~10周齡健康無眼疾Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠隨機分為正常對照組、模型組、藏紅花素低劑量組和藏紅花素高劑量組，每組20只。正常對照組大鼠不作任何處理。其余組采用前房灌注生理鹽水升高眼內壓法建立RIR模型。藏紅花素低劑量組、藏紅花素高劑量組均于建模前30 min和建模后每天定時分別以5 mg/kg、50 mg/kg的劑量腹腔注射藏紅花素溶液。建模后6、12、24、48 h，作視網膜石蠟切片行蘇木精-伊紅染色，光學顯微鏡觀察各組大鼠視網膜組織結構；作視網膜組織勻漿，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定各組TNF-alpha;、IL-1beta;的表達。結果 光學顯微鏡觀察發(fā)現，正常對照組大鼠視網膜組織結構正常；模型組大鼠出現視網膜水腫、結構紊亂、細胞排列疏松等病理改變；藏紅花素低劑量組大鼠視網膜病理改變程度較模型組輕；藏紅花素高劑量組大鼠視網膜組織結構與正常對照組相似。TNF-alpha;在建模后24 h表達量最高，IL-1beta;在建模后12、48 h時表達量最高。建模后6、12、24、48 h，模型組（t=5.42、7.94、9.32、9.18）、藏紅花素低劑量組（t=3.94、4.12、4.98、3.84）TNF-alpha;表達均較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；藏紅花素高劑量組TNF-alpha;表達較正常對照組有所升高，但差異無統(tǒng)計學意義（t=2.13、2.34、2.96、2.78，P＞0.05）。與模型組比較，藏紅花素低劑量組（t=3.95、4.56、4.01、5.12）、藏紅花素高劑量組（t=5.23、7.65、7.74、7.63）TNF-alpha;表達均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。建模后6、12、24、48 h，模型組（t=7.23、7.87、7.15、15.60）、藏紅花素低劑量組（t=5.65、5.10、5.54、6.87）、藏紅花素高劑量組（t=4.38、5.21、4.56、4.75）IL-1beta;表達均較正常對照組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與模型組比較，藏紅花素低劑量組僅于建模后48 h降低最為明顯，差異有統(tǒng)計學意義（t=7.56，P＜0.05）；各時間點藏紅花素高劑量組IL-1beta;表達均降低，差異均有統(tǒng)計學意義（t=6.94、5.36、6.05、10.50，P＜0.05）。結論 藏紅花素可以改善RIR大鼠視網膜組織結構的病理改變，降低TNF-alpha;、IL-1beta;的表達
目的 觀察脂質體Lipofectamine TM 2000（LF2000）介導pSUPER為載體的缺氧誘導因子-1alpha;（HIF-1alpha;）特異性小干擾RNA重組質粒（pSUPERsiHIF-1alpha;）對小鼠視網膜新生血管的抑制作用。方法 構建重組質粒pSUPER siHIF-1alpha;。將48只7日齡C57BL/6J小鼠分為正常組、空白對照組、空載體組和基因治療組，每組12只。正常組小鼠在正?？諝庵酗曫B(yǎng)?？瞻讓φ战M、空載體組和基因治療組建立氧誘導的視網膜新生血管模型。后空白對照組小鼠不再作任何處理。于出艙前1 d，空載體組小鼠玻璃體腔注射pSUPER 和LF2000脂質體混合物1 mu;l，基因治療組小鼠玻璃體腔注射重組質粒pSUPERsiHIF-1alpha;和LF2000脂質體混合物1 mu;l。采用熒光造影視網膜鋪片觀察各組小鼠視網膜血管形態(tài)變化；作病理切片，光學顯微鏡下計數各組突破視網膜內界膜的新生血管內皮細胞核數；免疫組織化學染色法檢測各組小鼠視網膜中HIF-1alpha;、血管內皮生長因子（VEGF）的蛋白表達；逆轉錄聚合酶聯(lián)反應（RT-PCR）檢測各組小鼠視網膜中HIF-1alpha; mRNA的表達。結果 視網膜鋪片熒光顯微鏡觀察顯示，正常組小鼠整個視網膜血管分布呈均勻網狀；空白對照組、空載體組小鼠視網膜中周部可見大片無灌注區(qū)及新生血管叢，伴熒光滲漏；基因治療組無灌注區(qū)及新生血管叢空白對照組、空載體組明顯減少，視網膜血管網狀結構基本正常。光學顯微鏡觀察發(fā)現，空白對照組、空載體組突破視網膜內界膜的血管內皮細胞數較正常組明顯增多，差異有統(tǒng)計學意義（F=5850.016，P＜0.05）；基因治療組突破視網膜內界膜的血管內皮細胞數較空白對照組明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（F=3012.469，P＜0.05）。免疫組織化學染色結果 顯示，HIF-1alpha;蛋白陽性表達主要位于細胞核中，VEGF蛋白陽性表達主要位于細胞漿中。正常組小鼠視網膜中HIF-1alpha;蛋白表達均呈陰性，VEGF蛋白表達呈弱陽性；空白對照組、空載體組小鼠HIF-1alpha;、VEGF蛋白表達均呈陽性；基因治療組小鼠視網膜中HIF-1alpha;、VEGF蛋白表達均呈弱陽性。RT-PCR檢測結果顯示，空白對照組、空載體組較正常組小鼠視網膜中HIF-1alpha; mRNA表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（F=3102.326，P＜0.05）?；蛑委熃M小鼠視網膜中HIF-1alpha; mRNA表達較空白對照組下調，差異也有統(tǒng)計學意義（F=3336.425，P＜0.05）。結論 脂質體介導重組質粒pSUPERsiHIF-1alpha;轉染視網膜可有效抑制氧誘導小鼠視網膜新生血管的形成。
目的 觀察表皮生長因子（EGF）誘導人視網膜色素上皮（RPE）細胞整合素alpha;5表達對細胞增生和遷移的影響。方法 在0.1、1.0、10.0、20.0、100.0 ng/ml EGF濃度條件下，體外培養(yǎng)人RPE細胞。逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）及流式細胞術觀察不同濃度組整合素alpha;5 mRNA和蛋白的表達。后將實驗分為Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基（DMEM）/Fv、DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF、DMEM/F12+10.0 ng/mlEGF+兔抗人整合素alpha;5多克隆抗體（1∶100）及DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF+兔抗人波形蛋白抗體（1∶100）組，采用噻唑藍（MTT）比色法和Boyden小室法檢測細胞增生及遷移。結果 RT-PCR檢測顯示，細胞培養(yǎng)12 h，EGF對人RPE細胞整合素alpha;5 mRNA合成無明顯影響（F=0.618，P=0.687）；細胞培養(yǎng)24、48 h，EGF能刺激人RPE細胞合成整合素alpha;5 mRNA，并呈濃度依賴性（F=465.303，212.340；P=0.000，0.000）。流式細胞術檢測顯示，10.0 ng/ml組整合素alpha;5熒光強度最強，與空白對照組和0.1 ng/ml組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。MTT比色法和Boyden小室法檢測顯示，整合素alpha;5的表達促進人RPE細胞增生和遷移。結論 EGF促進整合素alpha;5 mRNA和蛋白的表達，整合素alpha;5的表達促進人RPE細胞增生和遷移。
目的 觀察大鼠視網膜胚胎期及出生后早期發(fā)育過程中低氧誘導因子-1alpha;(HIF -1alpha;)的時空表達，探討其表達變化與視網膜發(fā)育的關系。方法 實驗大鼠分為孕12、16、20 d 組，出生后1、5、10 d組及成年組，每組各5只，共35只大鼠。用免疫組織化學方法、半定量逆轉錄聚合酶聯(lián)反應（RT-PCR）方法檢測視網膜H IF-1alpha;蛋白及HIF-1alpha;mRNA的表達。結果 胚胎期大鼠視網膜神經上皮層及視網膜色素上皮層均有HIF1alpha;陽性表達，出生后發(fā)育早期視網膜神經上皮層及視網膜色素上皮層也可見HIF-1alpha;陽性表達，以神經節(jié)細胞、內網層更明顯。隨著發(fā)育進展，其陽性表達主要位于視網膜節(jié)細胞層。大鼠視網膜HIF-1alpha;蛋白及mRNA的表達在胚胎期最高、出生后發(fā)育期逐漸下降、成年期最低，其差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.01）。結論 大鼠視網膜胚胎及出生后發(fā)育過程中HIF-1alpha;的表達存在時空上的變化，這種變化可能與大鼠視網膜胚胎期及出生后早期的發(fā)育密切相關。
目的 觀察急性葡萄膜炎患者治療前后血清干擾素-gamma;（IFN-gamma;）、腫瘤壞死因子-alpha;（TNF-alpha;）和白細胞介素-6（IL-6）水平變化，探討其在急性葡萄膜炎發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法 連續(xù)收集各類急性葡萄膜炎患者75例，用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定其急性期和治療后恢復期血清IFN-gamma;、TNF-alpha;和IL-6水平，并與同期收集的30例健康人血清IFN-gamma;、TNF-alpha;和IL-6檢測結果進行比較。結果 葡萄膜炎患者急性期血清IFN-gamma;、 TNF-alpha;和IL-6水平明顯高于治療恢復期和對照者（F=65.805、50.418、155.381，P=0.000），并且與其初診時視力呈明顯負相關（r=-0.656、-0.592、-0.653，P=0.000），3種細胞因子之間呈正相關（r=0.340、0.467、0.338，P＜0.05）。結論 INF-gamma;、TNF-alpha;和IL-6在急性葡萄膜炎患者血清中明顯升高，治療后均下降，表明這些細胞因子參與了葡萄膜炎的發(fā)生和發(fā)展過程。
目的 觀察抗腫瘤壞死因子-alpha;單克隆抗體（TNF-alpha; MCAb）對于實驗性自身免疫性葡萄膜視網膜炎（EAU）的治療作用。方法 合成光感受器間維生素A類結合蛋白（IRBP）R16多肽片段，聯(lián)合免疫佐劑誘導EAU動物模型。按照注射次數不同將大鼠分為2組，分別于IRBP R16免疫后的第6天和第4、6、8天自大鼠尾靜脈注入TNF-alpha; MCAb，裂隙燈顯微鏡觀察其眼部臨床表現，同時設未治療組大鼠作為對照。于IRBP R16免疫后第13天測量遲發(fā)型超敏反應（DTH），并于第14天處死大鼠，取眼球行組織病理檢查。應用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測抗體注射后14 d 時大鼠血清中Th1類細胞因子gamma;-干擾素（IFN-gamma;）、Th2類細胞因子白細胞介素-4（IL-4）水平以及房水中IFN-gamma;水平。測量引流淋巴結細胞的抗原特異性淋巴細胞增生反應。結果 TNF-alpha;MCAb治療組大鼠的眼部炎癥較未治療組明顯減輕，病理分級下降；房水和血清中IFN-gamma;水平降低，血清中IL-4增高；DTH反應下降；引流淋巴結細胞對IRBP R16多肽刺激的增生反應下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與單次注射相比，3次注射的治療效果更顯著（P＜0.05）。結論 TNF-alpha;MCAb能夠有效減輕EAU大鼠眼部的炎癥反應和特異性細胞免疫反應，改變Th1/Th2細胞因子平衡；多次應用作用更顯著。
目的 觀察轉化生長因子alpha;（TGFalpha;）對鼠視網膜Muuml;ller細胞谷氨酸轉運體 (GLAST) mRNA、蛋白質表達及攝取活性的調控作用。方法 取出生后7～10 d 的新生昆明小鼠視網膜組織，體外進行Muuml;ller細胞的培養(yǎng)。同一原代細胞的第3～4代細胞培養(yǎng)后隨機分為2組：①TGFalpha;干預組：分別加入濃度為50、75、125、150 ng/ml的TGFalpha;，每種濃度3孔；②對照組：仍用含20%胎牛血清的Dulbeccon改良Eagle培養(yǎng)基培養(yǎng)。采用L-3H-谷氨酸攝取分析方法觀察不同濃度TGFalpha;對Muuml;ller細胞GLAST攝取活性的影響；逆轉錄聚合酶鏈反應方法分析Muuml;ller細胞GLAST mRNA表達的差異；免疫組織化學染色方法檢測Muuml;ller細胞GLAST蛋白質表達的變化。結果隨著TGFalpha;濃度的增加，L-3H-谷氨酸的攝取量及GLAST mRNA表達量均逐漸增加，TGFalpha;濃度為125 ng/ml時，L-3H-谷氨酸的攝取量達到最大值，為對照組的266%，同時GLASTmRNA表達量也達到最大值，為對照組的近4倍。免疫組織化學染色顯示當TGFalpha;濃度為125 ng/ml時，干預組Muuml;ller細胞內的GLAST蛋白表達量明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 TGFalpha;可通過上調GLAST mRNA和蛋白質的表達增加視網膜Muuml;ller細胞谷氨酸轉運體GLAST的攝取活性。
目的 觀察缺氧誘導因子1alpha;（HIF-1alpha;）對早期糖尿病視網膜病變（DR）大鼠外周血中性粒細胞表面CD18表達以及視網膜白細胞和血管內皮細胞黏附的影響。 方法 雄性Sprague-Dawley大鼠，鏈脲佐菌素腹腔注射誘導糖尿病模型。2個月后，取18只糖尿病模型大鼠隨機分為糖尿病組（B組）、糖尿病＋HIF-1alpha;反義寡核苷酸組（ASODN）（C組）、糖尿病＋HIF-1alpha;正義寡核苷酸組（SODN）（D組），每組各為6只大鼠。年齡匹配的正常大鼠6只作為正常對照組（A組）。A、B組注射等量5%葡萄糖溶液，C、D組分別通過鼠尾靜脈注射ASODN和SODN（025 mg/kg）。分別以流式細胞儀和丫啶橙白細胞造影觀察外周血中性粒細胞CD18水平及視網膜白細胞黏附量。 結果 外周血中性粒細胞CD18的陽性細胞比例，B組為（44.93plusmn;3.60）%， A組為（18.66plusmn;1.52）%，C組為（31.66plusmn;4.72）%，D組為（51.00plusmn;5.66）%；各組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=42.46, Plt;0.001）。丫啶橙視網膜白細胞染色陽性細胞數，A組為（46.16plusmn;10.68）個，B組為（133.83plusmn;20.43）個，C組為（99.83plusmn;9.28）個，D組為（121.33plusmn;10.23）個。B組陽性染色細胞數較A組提高約2.89倍；C、D組與B組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.12，95%可信區(qū)間為-3.69~28.69）。 結論 在體內實驗條件下，HIF-1alpha;蛋白能夠下調糖尿病動物外周血中性粒細胞表達CD18及視網膜白細胞聚集。HIF-1alpha;有可能成為早期DR藥物治療的靶點。 （中華眼底病雜志，2008，24：268-271）
目的 探討缺氧誘導因子-1alpha;（HIF-1alpha;）和血管內皮生長因子（VEGF）小片段干擾性RNA（siRNA）對人血管內皮細胞VEGF表達的影響。 方法 構建HIF-1alpha; siRNA重組質粒。將體外培養(yǎng)的人血管內皮細胞（HUVEC-12）分成常氧（20%）組和低氧（1%）組。低氧組中，采用脂質體Lipofectamine TM 2000（LF2000）分別轉染空載體質粒（空載體組）、HIF-1alpha; siRNA（HIF-1alpha;組）、VEGF-165 siRNA（VEGF組）和HIF-1alpha; siRNA+VEGF165 siRNA（共轉染組）。低氧組中未轉染的細胞為對照組。采用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）鑒定基因轉染效率；RT-PCR和免疫細胞化學法檢測各組細胞中VEGF基因和蛋白表達的變化。 結果 成功構建HIF-1alpha; siRNA重組質粒。人血管內皮細胞轉染24 h后，HIF-1alpha; siRNA和VEGF-165 siRNA重組質粒有表達。常氧組細胞中僅見微弱的VEGF mRNA和蛋白表達，而低氧組表達明顯上調；HIF-1alpha;組、VEGF組和共轉染組表達較對照組減弱，其中共轉染組抑制效果最明顯。 結論 HIF-1alpha;和VEGF165 siRNA能有效抑制人血管內皮細胞VEGF的表達。
目的 檢測細胞因子對人視網膜色素上皮（RPE）細胞早期生長反應基因-1（Egr-1）的影響。 方法 體外培養(yǎng)人RPE細胞，采用免疫熒光染色、Western blotting和逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）定性定量觀察不同刺激因素作用下Egr-1蛋白和mRNA的表達變化。刺激因素包括：20 mu;g/ml脂多糖（LPS）、40 ng/ml腫瘤壞死因子（TNF）alpha;、10 U/ml 干擾素（IFN）gamma;、30%單核/巨噬細胞株（THP-1細胞）上清液和正常人玻璃體液分別刺激0(未受刺激)、10、20、30、40、60 min。結果 在未受刺激的RPE細胞中Egr-1呈弱陽性表達，細胞漿為淺黃綠色熒光，隨著刺激因素的作用，Egr-1的表達明顯增強，細胞漿和部分細胞核呈強綠色熒光。20 mu;g/ml LPS、40 ng/ml TNFalpha;、10 U/ml IFNgamma;、30％THP-1細胞上清液和玻璃體液刺激RPE細胞后，與未受刺激的RPE細胞相比，Egr-1 mRNA的最大增強幅度分別為19、13、14、12、14倍，Egr-1蛋白的最大升高幅度分別為34、12、17、32、13倍。 結論 LPS、TNFalpha;、IFNgamma;、THP1細胞上清液和玻璃體液可上調體外培養(yǎng)的人RPE細胞Egr-1 mRNA和蛋白的表達，且出現核轉位現象，說明這些刺激因素可引起Egr-1的活化。