目的 探討納米炭吸附5-FU淋巴靶向化療對胃癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常胃組織中bcl-2、bax及caspase-3表達(dá)的影響。方法 將2005年10月至2006年8月在我科住院的28例胃癌患者分為淋巴靶向化療（ＬＮＴＣ）組（ n =14）和對照組（ n =14）。ＬＮＴＣ組先以納米炭吸附5-FU行淋巴靶向化療后再行手術(shù)，對照組直接手術(shù)。術(shù)畢取胃癌組織、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常胃組織，采用免疫組化法檢測其中bcl-2、bax及caspase-3表達(dá)情況。結(jié)果 ＬＮＴＣ組中胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)bcl-2表達(dá)陽性率低于對照組（28.6% 比78.6% ，25.0% 比70.0% ），bax表達(dá)陽性率高于對照組（85.7% 比28.6% ，80.0% 比30.0% ），caspase-3表達(dá)陽性率高于對照組（57.1% 比14.3% ， 55.0%比15.0% ），2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＜ 0.05）； 正常胃組織中三者表達(dá)陽性率2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P ＞ 0.05)。結(jié)論 納米炭吸附5-FU淋巴靶向化療可使胃癌組織及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)內(nèi)bcl-2表達(dá)下降，bax和 caspase-3 表達(dá)增加，影響這些凋亡調(diào)節(jié)分子表達(dá)可能是其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)理之一。
目的 探討乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中bcl-2、bax及bad基因表達(dá)水平變化及與乳腺癌其他生物因素的相關(guān)性。方法 復(fù)習(xí)國內(nèi)、外相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行綜述。結(jié)果 在從正常乳腺組織到乳腺癌逐漸演化的過程中凋亡抑制基因bcl-2的表達(dá)水平變化尚有待進(jìn)一步研究，而凋亡促進(jìn)基因bax、bad的表達(dá)水平呈遞減趨勢。bcl-2基因表達(dá)水平與乳腺癌中一些公認(rèn)的正性因子如雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）呈正相關(guān)，與其他一些負(fù)性因子如p53、表皮生長因子受體、c-erbB-2、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等呈負(fù)相關(guān)。bax基因的表達(dá)水平與乳腺癌ER、PR水平以及p53表達(dá)水平等無關(guān)。對于bad基因與乳腺癌其他生物因素的相關(guān)性尚未見報(bào)道。結(jié)論 乳腺癌中bcl-2基因表達(dá)水平的變化對乳腺癌預(yù)后以及治療的作用尚存在爭議，bad基因與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系亦不清楚，而bax基因表達(dá)水平與乳腺癌的預(yù)后呈正相關(guān)。對于它們的研究將為我們評價(jià)乳腺癌的預(yù)后提供新的指標(biāo)，為乳腺癌的治療開辟新的思路。
目的 研究RNA干擾(RNAi)對兔血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）bcl-2基因表達(dá)的干擾效應(yīng)。方法 用脂質(zhì)體法將構(gòu)建的裝載靶向bcl-2基因小干擾性RNA(siRNA)的表達(dá)載體(pshRNA-bcl-2質(zhì)粒)轉(zhuǎn)染VSMCs（基因組），以轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞和加DMEM的空白細(xì)胞作為對照，采用半定量RT-PCR 和Western blot法檢測bcl-2基因的表達(dá)，用MTT法檢測VSMCs生長情況。結(jié)果 轉(zhuǎn)染siRNA的表達(dá)載體可以抑制內(nèi)源性bcl-2基因在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯水平上的表達(dá)，基因組bcl-2的mRNA和蛋白表達(dá)較空載體組和空白對照組明顯減少(P＜0.01)； 基因組的VSMCs生長也較空載體組和空白對照組明顯受到抑制(P＜0.01)。結(jié)論 載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)可明顯抑制內(nèi)源性bcl-2基因的表達(dá)和VSMCs生長
目的 探討槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細(xì)胞的生長抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用及其作用機(jī)理。方法 將處于對數(shù)生長期的HR8348細(xì)胞用含槐耳清膏的培養(yǎng)基培養(yǎng)36 h，用四氮唑藍(lán)（MTT）比色法檢測吸光度(OD)值，計(jì)算抑制率； 用甲基綠-派若寧染色法及TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡指數(shù)； 用免疫組織化學(xué)方法檢測bcl-2、bcl-xl、bax、bak及p53基因表達(dá)的情況。結(jié)果 槐耳清膏對HR8348細(xì)胞的抑制率隨濃度增加而上升，濃度為4.0 mg/ml時(shí)抑制率最大（71.1%），與5-FU組（濃度為10 μg/ml）相比差異無顯著性意義（P＞0.05）。甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法均可見到典型的細(xì)胞凋亡、凋亡小體或出泡現(xiàn)象，凋亡指數(shù)隨槐耳清膏濃度的增加而增加，當(dāng)濃度達(dá)4.0 mg/ml時(shí)，凋亡指數(shù)迅速上升，甲基綠-派若寧法為0.1620±0.0128，TUNEL法為0.2612±0.0158，均大于5-FU組的凋亡指數(shù)（0.0780±0.0095和0.1028±0.0131），P＜0.05。槐耳清膏組bcl2、bclxl、bak、p53蛋白表達(dá)較空白對照組明顯增強(qiáng)（P＜0.05)，而bax變化不明顯（P＞0.05）?；倍甯嘟Mbak/bcl-2 和bak/bcl-xl比值顯著大于空白對照組。結(jié)論 槐耳清膏在體外對人直腸癌HR8348細(xì)胞具有顯著的抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用?；倍甯嗾T導(dǎo)人直腸癌HR8348細(xì)胞凋亡可能與提高bak/bcl-2、bak/bcl-xl比值及上調(diào)p53基因表達(dá)有關(guān)。
目的 探討5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）體外誘導(dǎo)直腸癌HR8348細(xì)胞凋亡的作用及細(xì)胞凋亡與bcl-2、bcl-xl、bax及p53表達(dá)的關(guān)系。方法 經(jīng)5-FU處理HR8348細(xì)胞24 h后，用甲基綠-派若寧染色法和TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況，并用SP免疫組織化學(xué)法檢測HR8348細(xì)胞中bcl-2、bcl-xl、bax和p53的表達(dá)。結(jié)果 HR8348細(xì)胞經(jīng)5-FU作用24 h后，細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）明顯高于對照組，差異有顯著性意義（P＜0.01）。5-FU作用不同時(shí)相bcl-2的表達(dá)評分結(jié)果與對照組比較差異均無顯著性意義； 不同時(shí)相bcl-xl的表達(dá)評分結(jié)果與對照組比較稍降低； 而bax的表達(dá)評分結(jié)果隨時(shí)間延長明顯增加，24 h、36 h的表達(dá)評分結(jié)果明顯高于對照組（P＜0.01），而p53在5-FU組和對照組各時(shí)相均未見表達(dá)。結(jié)論 5-FU具有誘導(dǎo)HR8348細(xì)胞凋亡的作用； 5-FU可能通過上調(diào)bax的表達(dá)并改變bax/bcl-xl的比值而誘導(dǎo)HR8348細(xì)胞凋亡。
為探討肝細(xì)胞肝癌發(fā)生過程中bcl-2蛋白的變化規(guī)律及與細(xì)胞凋亡變化的關(guān)系，運(yùn)用TUNEL法和免疫組化方法檢測石蠟保存的肝細(xì)胞肝癌組織(hepatocellular carcinoma, HCC)、肝硬變組織(liver cirrhosis,LC)和正常肝組織(normal liver, NL)中細(xì)胞凋亡發(fā)生率和bcl-2的表達(dá)。結(jié)果： 從NL、LC到HCC組織，細(xì)胞凋亡活性出現(xiàn)增強(qiáng)； bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸下降，LC和HCC組比較，Ｐ＜0.05。結(jié)論： bcl-2的表達(dá)可能與肝細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)；在肝癌發(fā)生過程中，bcl-2表達(dá)下降可能是引起肝癌細(xì)胞凋亡增加的原因之一。
目的 觀察N-甲基-N亞硝酸脲（MNU）誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜損傷過程中凋亡相關(guān)分子半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、bcl-2相關(guān)X蛋白（bax）和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-xl（bcl-xl）在視網(wǎng)膜中的時(shí)空表達(dá)，探討其在MNU誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜損傷中的作用。方法 將鼠齡50 d的30只SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為MNU模型組（24只大鼠）和正常對照組（6只大鼠）。模型組按40 mg/kg的劑量腹腔注射MNU建立MNU模型；正常對照組大鼠腹腔注射生理鹽水5ml/kg。模型組大鼠根據(jù)MNU注射后不同處死時(shí)間再分為1、3、7、10 d組，每小組各6只大鼠。正常對照組大鼠注射后3 d處死。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測各組視網(wǎng)膜中caspase-3、bax和bcl-xl的基因表達(dá)情況；免疫熒光技術(shù)檢測其在視網(wǎng)膜中的表達(dá)以及分布的變化，并用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)dUTP 缺口末段標(biāo)記（TUNEL）法檢測視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果經(jīng)病理學(xué)檢測確定造模成功。RT-PCR檢測結(jié)果表明，［與正常對照組相比（caspase-3和bax的相對吸光度（RA）值為62.45plusmn;7.65、46.53plusmn;4.41］，MNU模型1 d 組caspase-3（83.23plusmn;8.11，P=0.009）和bax（72.73plusmn;9.46，P=0.004）的表達(dá)均增強(qiáng)，3 d 組二者表達(dá)水平均最高 （caspase-3 RA =140.48plusmn;18.40，P=0.000；bax- RA=102.36plusmn;13.97，P=0.001），10 d 組caspase-3的表達(dá)水平（RA =47.32plusmn;5.37，P=0.027）低于對照組，而10 d bax的表達(dá) （RA=48.27plusmn;4.40，P=0.997）基本恢復(fù)至對照組水平；bcl-xl在4個(gè)造模組中的表達(dá)水平（1 d RA =63.29plusmn;4.29，P=0.000；3d RA =79.83plusmn;5.58，P=0.000；7 d RA=70.19plusmn;4.42，P=0.000；10 d RA =66.05plusmn;4.97，P=0.000）均高于正常對照組（RA =45.98plusmn;3.06），3 d 組的表達(dá)水平最高。MNU誘導(dǎo)后1、3、7 d 組的bax/bcl-xl比值（1 d為1.15plusmn;0.14，P=0.143；3 d為1.28plusmn;0.16，P=0.001；7 d為1.17plusmn;0.08，P=0.079）大于對照組（1.01plusmn;0.09），其中3 d組的比值最大，但10 d 組bax / bcl-xl比值（0.73plusmn;0.07，P=0.001）小于對照組。免疫熒光檢測結(jié)果顯示，caspase-3、bax和bcl-xl的表達(dá)變化分別與其RT-PCR檢測結(jié)果一致；正常對照組在視網(wǎng)膜各層均未發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞，MNU 1 d 組的外核層可檢測到大量凋亡細(xì)胞核［凋亡率（AI）為34.96plusmn;3.44，P=0.000］，3 d 組的外核層檢測的凋亡細(xì)胞最多（AI=76.97plusmn;5.83，P=0.000），10 d 組未檢測到凋亡細(xì)胞。結(jié)論 MNU誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡可能是通過上調(diào)caspase-3及引起bax/bcl-xl表達(dá)失衡并明顯傾向促進(jìn)細(xì)胞凋亡造成的。
目的 探討survivin在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)中的表達(dá)及其與RB臨床分期、組織分化程度及p53、bcl-2蛋白表達(dá)的關(guān)系。 方法 應(yīng)用抗surv ivin、p53和bcl-2單克隆抗體，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶免疫組織化學(xué)法對38例RB常規(guī)石蠟標(biāo)本行survivin、p53和bcl-2蛋白表達(dá)的測定，對6例正常視網(wǎng)膜組織行survivin表達(dá)的測定。 結(jié)果 38例RB組織中20例survivin蛋白呈陽性表達(dá)，占52.6％，6例正常視網(wǎng)膜組織內(nèi)均無survivin蛋白表達(dá)，兩組比較差異有顯著性的意義(P＜0.05)。survivin的陽性表達(dá)與患者的性別、臨床分期、組織學(xué)分型無關(guān)(P＞0. 05)。38例RB組織中，25例p53陽性表達(dá)，18例bcl-2陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率分別為65.8％和 47.4％。p53、 bcl-2陽性表達(dá)組中survivin陽性表達(dá)率均顯著高于p53、 bcl-2陰性表達(dá)組(P均lt;0.05)。 結(jié)論 survivin在RB中表達(dá)上調(diào)，提示該基因可能在RB的發(fā)生發(fā)展中起一定作用；survivin、p53和bcl-2可能通過相互作用共同參與RB的發(fā)生發(fā)展。 （中華眼底病雜志，2004，20：215-217）
目的 觀察p53、bcl-2、bax基因、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial cell growth factor, VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibro blast gro wth factor, bFGF）、胰島素樣生長因子-I（insulin-like growth factor-I, IGF-I ）及其受體在1～20周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell, VECs) 的表達(dá)以及與細(xì)胞周期阻滯的關(guān)系。 方法 四氧嘧啶(alloxan)誘導(dǎo)制作糖尿病大鼠模型；免疫組織化學(xué)染色，光、電鏡觀察；斑點(diǎn)印跡（dot blotting）測定p53、bcl-2 mRNA；Western 印跡（Western blotting）測定p53、bcl-2蛋白。 結(jié)果 免疫組織化 學(xué)染色后光學(xué)顯微鏡觀察顯示8～20周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層的各類血管都呈p53、bcl-2免疫陽性反應(yīng)。電鏡觀察顯示陽性反應(yīng)物沉淀在VECs。VECs同時(shí)為VEGF、bFGF、IGF-I蛋白及其受體陽性反應(yīng)。視網(wǎng)膜內(nèi)其它細(xì)胞及同窩對照大鼠和1～6周病程糖尿病大鼠視網(wǎng)膜所有細(xì)胞均未見上述蛋白陽性反應(yīng)。Dot blotting測定結(jié)果顯示，20周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織有p53和bcl-2 mRNA表達(dá)。Western blotting測定證實(shí)20周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)p53和bcl-2 蛋白。對照組及1 ~ 20周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)未見bax陽性反應(yīng)物。 結(jié)論 p53、bcl-2可能參與介導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VECs周期阻滯。高糖刺激生長因子VEGF、bFGF、IGF-I及其受體的表達(dá)，生長因子可能通過自分泌途徑維持VECs存活。 （中華眼底病雜志，2003，19：29-33）
目的 觀察缺氧對培養(yǎng)的牛視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)細(xì)胞增生和凋亡基因bcl-2表達(dá)的影響。 方法 用四甲基偶氮唑藍(lán)［3-(4,5-dimethylthiazole-2yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromid, MTT］比色法和免疫組織化學(xué)的方法，將培養(yǎng)的RPE細(xì)胞接種于24孔板，每孔細(xì)胞密度為5×10 4，分成4組：A組置入缺氧環(huán)境中培養(yǎng)(3%O 2 ，5%CO 2，92%N 2，37℃)；B組置入正常環(huán)境中培養(yǎng)(5%CO2，95%空氣，37℃)；C組：將缺氧環(huán)境培養(yǎng)24 h的細(xì)胞上清液加到正常環(huán)境培養(yǎng)的牛 RPE細(xì)胞中培養(yǎng)；D組：將正常環(huán)境培養(yǎng)24 h的細(xì)胞上清液加到正常環(huán)境培養(yǎng)的牛 RPE細(xì)胞中培養(yǎng)。24 h后分別取出行MTT比色法及抗bcl-2蛋白抗體染色。 結(jié)果 A組與B組、C組與D組比較，前者細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)吸光度(A)值［舊稱光密度(OD)］均高于后者(P＜0.05); 抗bcl-2蛋白抗體染色，A、B組陽性率分別為72.60%、38.64%； C、D組陽性率分別為83.20%、21.80%。陽性染色在細(xì)胞漿，近核膜處染色尤深，部分呈細(xì)顆粒狀。 結(jié)論 缺氧促進(jìn)牛RPE細(xì)胞增生及凋亡基因 bcl-2表達(dá)。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 293-295)