目的 觀察δ阿片受體激動(dòng)劑D-丙2，D-亮5腦啡肽（D-Ala2，D-Leu5-enkephali，DADLE）對(duì)膿毒癥大鼠肝細(xì)胞凋亡及肝組織bcl-2和caspase-3表達(dá)的影響，探討DADLE對(duì)肝臟保護(hù)作用的可能機(jī)理。方法 采用盲腸結(jié)扎加穿孔(CLP)法制作大鼠膿毒癥模型，SD大鼠54只(雌雄不限)，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為CLP組（n=18）、DADLE組（n=18）和假手術(shù)組（n=18）。在不同時(shí)間點(diǎn)(2、4及6 h)處死大鼠，原位末端標(biāo)記法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡情況，免疫組化法檢測(cè)肝組織中bcl-2及caspase-3蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化并觀察肝臟的病理改變。結(jié)果 CLP組大鼠肝組織病理損害明顯較假手術(shù)組嚴(yán)重，DADLE組肝臟的病理變化明顯改善； CLP組大鼠肝組織細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯較假手術(shù)組升高（P＜0.01），以4 h最顯著（P＜0.01），DADLE 組各時(shí)相肝細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯降低（P＜0.01）； CLP組大鼠肝組織caspase3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度比假手術(shù)組明顯增強(qiáng)（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達(dá)則明顯減弱（P＜0.05）； DADLE組肝組織caspase-3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度較CLP組明顯減弱（P＜0.01），而bcl-2蛋白的表達(dá)則明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。肝組織caspase-3的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.83，P＜0.01），bcl-2的表達(dá)與肝細(xì)胞凋亡指數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.65，P＜0.01)。結(jié)論 DADLE能明顯改善膿毒癥大鼠肝臟的病理變化，其作用機(jī)理可能與DADLE下調(diào)caspase-3表達(dá)、上調(diào)bcl-2表達(dá)，從而抑制肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。
研究白介素6(IL-6)在過氧化氫誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制。方法：以人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞A549細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，MTT法檢測(cè)IL-6對(duì)A549細(xì)胞增殖活性的影響，TUNEL檢測(cè)法檢測(cè)IL-6對(duì)A549細(xì)胞凋亡率的影響，Western blot觀察caspase-3和caspase-9蛋白量的變化。結(jié)果：IL-6能夠增加A549細(xì)胞的增殖活性，減少其凋亡。與模型組相比，IL-6干預(yù)組的caspase-3和caspase-9的蛋白表達(dá)量明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：IL-6能夠抑制過氧化氫誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞凋亡，并且與caspase-3和caspase-9蛋白的表達(dá)量下降有關(guān)。提示IL-6對(duì)肺泡上皮細(xì)胞的保護(hù)作用可能是通過抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白來實(shí)現(xiàn)的。
目的 探討軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中凋亡發(fā)生以及 caspase- 3的表達(dá)。 方法 采用 Annexin 和TU NEL 法檢測(cè)第 1～ 4代軟骨細(xì)胞在體外正常培養(yǎng)體系中第 3天和第 7天的凋亡率 ;RT- PCR和 Western blot分析caspase- 3表達(dá)水平 ;EL ISA檢測(cè) caspase- 3蛋白酶活性?！〗Y(jié)果 第 1～ 4代軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中均存在不同程度的凋亡現(xiàn)象 ,各代次軟骨細(xì)胞第 7天的凋亡率 15 .7%± 0 .3% ,明顯高于第 3天的 8.9%± 0 .6 % ,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (Plt;0 .0 1)。caspase- 3m RNA和蛋白質(zhì)在整個(gè)培養(yǎng)過程中都有表達(dá) ,隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)上調(diào) ,第 7天的表達(dá)水平高于第 3天。體外培養(yǎng) 7天后 caspase- 3被激活 ,可檢測(cè)到分子量為 2 0 ku的裂解片段。caspase- 3蛋白酶活性隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)也逐漸增高 ,與細(xì)胞凋亡程度基本一致?！〗Y(jié)論 軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中存在凋亡 ,caspase- 3參與了凋亡事件并發(fā)揮著重要作用。
【摘要】 目的 探討鐵螯合劑去鐵胺（DFO）對(duì)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞HL-60的分子機(jī)制。 方法 2003年7-12月用鈣黃綠素（calcein）檢測(cè)HL-60細(xì)胞LIP。臺(tái)盼藍(lán)活細(xì)胞拒染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞存活率測(cè)定；光鏡形態(tài)學(xué)觀察及流式細(xì)胞儀（FCM）等方法檢測(cè)HL-60細(xì)胞凋亡；比色法檢測(cè)caspase-3（基于pNA標(biāo)記底物的比色法）活性。 結(jié)果 ①不同濃度的DFO作用于HL-60細(xì)胞后，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)及DFO濃度的增加，動(dòng)態(tài)鐵池降低，細(xì)胞生存率逐漸下降，凋亡率增加，顯示一定的時(shí)間劑量依賴性。②HL-60細(xì)胞在不同濃度的DFO作用下，caspase-3的活性逐漸升高。50、100 μmol/L DFO作用于HL-60細(xì)胞24 h，caspase-3酶活性升高明顯，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.001）；相關(guān)分析結(jié)果顯示，HL-60細(xì)胞LIP的改變與caspase-3活性變化呈負(fù)相關(guān)系（r=-0.887，Plt;0.05）。 結(jié)論 DFO誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的作用可能與螯合細(xì)胞內(nèi)鐵，降低細(xì)胞LIP，激活caspase-3，最終實(shí)施細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。【Abstract】 Objective To observe the changes of caspase-3 activity during apoptosis of HL-60 cells induced by an iron deferoxamine (DFO). Methods Exponentially growing HL-60 cells (1×106/mL) were used in this experiment from July 2003 to December 2003. The study groups were divided as follows: DFO group, iron+DFO group and control group. The viability was detected by typanblue, apoptosis was assessed by morphological study and flow cytometry (FCM) assay, and the caspase-3 activity was detected by melorimetry. The intracellular label iron pool (LIP) was measured with a fluorimetric assay using the metalsensitive probe calcein-AM. Results ①When HL-60 cells were incubated with different concentrations of DFO, viability assay was lower than that in the control group at the 12th, 24th and 48th hour (Plt;0.05). ② The cells incubated with different concentrations of DFO showed dose-time dependence and was much higher than that in the control group (Plt;0.01). ③The caspase-3 activity was significantly higher in the apoptotic cells than that in the control cells. Conclusions The apoptosis of HL-60 cells induced by DFO may be correlated with the decrease of cellular LIP and activity of caspase-3.
目的:探討白藜蘆醇對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的凋亡相關(guān)因子caspase-3的作用。方法:應(yīng)用RT-PCR方法和Western-blot分別檢測(cè)凋亡因子caspase-3的RNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:白藜蘆醇能明顯促進(jìn)U251細(xì)胞的凋亡相關(guān)因子caspase-3的表達(dá),存在劑量依賴與時(shí)間依賴性。結(jié)論:白藜蘆醇能通過caspase－3途徑誘導(dǎo)U251細(xì)胞的凋亡。
目的研究大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中caspase-3、Toll樣受體4（TLR4）的表達(dá)與損傷時(shí)間的關(guān)系，為損傷時(shí)間的推斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法采用隨機(jī)數(shù)字表法將健康大鼠63只隨機(jī)分為正常對(duì)照組（3只）、生前造創(chuàng)組（33只）、死后造創(chuàng)組（12只）和死后穩(wěn)定性組（15只）。建立大鼠背部皮膚切創(chuàng)模型，運(yùn)用蘇木精-伊紅染色技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)觀察各組caspase-3和TLR4的表達(dá)情況；使用Image-Pro Plus圖像分析軟件、SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行處理。 結(jié)果caspase-3和TLR4主要在炎性細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，在正常皮膚組織的表皮層、毛囊及皮脂腺細(xì)胞內(nèi)也均有表達(dá)。生前造創(chuàng)組：除0 h組外，其余各組與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；傷后0.5 h，在創(chuàng)緣毛囊周圍中性粒細(xì)胞中可見少量caspase-3及TLR4表達(dá)；隨著炎細(xì)胞浸潤(rùn)，caspase-3及TLR4陽性細(xì)胞率增加，3 d時(shí)達(dá)峰值；而后逐漸降低，主要表達(dá)于成纖維細(xì)胞及單核-巨噬細(xì)胞；10 d時(shí)，炎細(xì)胞大量減少，陽性表達(dá)主要在成纖維細(xì)胞。死后造創(chuàng)組：細(xì)胞表達(dá)結(jié)果與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。死后穩(wěn)定性組：caspase-3、TLR4陽性細(xì)胞率與死后即刻比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中caspase-3、TLR4陽性細(xì)胞率具有一定的規(guī)律性及時(shí)間相關(guān)性，且兩者在25℃溫度環(huán)境中具有較好的穩(wěn)定性，可望成為法醫(yī)學(xué)損傷時(shí)間推斷的指標(biāo)。