目的 使用基因芯片技術(shù)分析糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜血管凋亡相關(guān)基因表達(dá)概況。 方法 腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠模型。在血糖升高后的第6周分別處死正常組大鼠和糖尿病組大鼠各10只，提取20只眼的視網(wǎng)膜血管，一步法提取總RNA。使用(alpha;-32P)脫氧腺苷酸(dATP)標(biāo)記樣品制作探針，與含有1176個(gè)基因的尼龍膜芯片進(jìn)行雜交。使用計(jì)算機(jī)軟件對(duì)所獲結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。選擇3個(gè)差異表達(dá)的基因進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)驗(yàn)證。 結(jié)果 糖尿病大鼠第6周，136個(gè)基因具有差異表達(dá)，占檢測(cè)基因總數(shù)的11.5％。其中，表現(xiàn)為上調(diào)的基因90個(gè)，占7.6％；表現(xiàn)為下調(diào)的基因46個(gè)，占3.9％。差異表達(dá)涉及多種功能的多個(gè)基因。與凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)的72個(gè)基因中，有15個(gè)出現(xiàn)了表達(dá)的差異。表達(dá)上調(diào)的基因包括腫瘤壞死因子（TNF）家族中Fas相關(guān)的死亡域（FADD）、TNF受體家族成員12 （TNFRSF12）、TNF受體家族成員9 （TNFRSF9）和TRAIL；Bcl-2家族的bcl-2,bcl-w,bax和 bak1以及Akt等；表達(dá)下調(diào)的基因有Fas相關(guān)因子（FAF1)。 結(jié)論 糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜血管基因表達(dá)發(fā)生了復(fù)雜的變化，特別是多個(gè)凋亡相關(guān)通路的基因在糖尿病早期就發(fā)生改變，而且多數(shù)處在通路上游。提示糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生涉及多條凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路，分子生物化學(xué)水平上的變化還僅僅局限在凋亡的誘導(dǎo)期。 （中華眼底病雜志，2008，24：244-248）
目的 了解在視覺(jué)發(fā)育可塑期，NMDA-R1受體基因的mRNA構(gòu)型與斜 視性弱視貓視皮層神經(jīng)元細(xì)胞水平表達(dá)減少有關(guān)的。 方法 同胞 正常貓和斜視性弱視貓各兩對(duì)(共4只)。采用一系列地高辛核酸分子探針做貓腦片原位雜交 ，檢測(cè)NMDA-R1不同mRNA構(gòu)型在視皮層的表達(dá)情況。 結(jié)果 與正常貓相比，NMDA-R1 mRNAldquo;Panrdquo;探針和R1-a，R1-b，R1-1構(gòu)型探針在斜視性弱視貓視皮層的表達(dá)顯著減少，主要在第IV層。R1-3構(gòu)型的表達(dá)在斜視性弱視貓視皮層比正常貓?jiān)黾?，主要在第V-VI層。R1-2和R1-4構(gòu)型的表達(dá)在正常貓和斜視貓視皮層的差異不顯著。 結(jié)論 斜視性弱視貓視皮層NMDA-R1 mRNA特異構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄 抑制導(dǎo)致受體蛋白水平表達(dá)的改變。 （中華眼底病雜志，2000，16：71-138）
目的 探討線粒體DNA(mtDNA)11778、3460、14484位點(diǎn)突變與遺傳性視神經(jīng)病(Leberprime;s hereditary optic neuropathy,Leber病)之間的關(guān)系。 方法 應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒?單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)檢測(cè)臨床一對(duì)可疑Leber病同卵雙生子患者及其親屬，有突變者，對(duì)突變序列進(jìn)行序列測(cè)定。 結(jié)果 PCR-SSCP檢測(cè)同卵雙生子及母親11778、3460位點(diǎn)所在的DNA區(qū)段存在突變，14484位點(diǎn)所在的DNA區(qū)段均未檢出突變，將11778位點(diǎn)所在DNA區(qū)段克隆后測(cè)序顯示11778位點(diǎn)仍為CGC，但發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的突變位點(diǎn)(11915Trarr;A)。 結(jié)論 Leber病發(fā)病機(jī)制為mtDNA點(diǎn)突變。多位點(diǎn)突變也被看作為L(zhǎng)eber病的病因。11915位點(diǎn)可能也是多位點(diǎn)突變之一?？捎肞CRSSCP對(duì)臨床有視神經(jīng)萎縮和視神經(jīng)炎可疑為L(zhǎng)eber病患者(包括家系成員)做出遺傳性視神經(jīng)病的基因診斷。 (中華眼底病雜志, 1999, 15: 223-226)
目的 克隆大鼠視網(wǎng)膜緩慢變性/盤膜邊緣蛋白(retinal degeneration slow/PERIPHERIN,RDS,/peripherin)基因。 方法 以SD大鼠的視網(wǎng)膜polyA+RNA為模版，采用RT-PCR的方法擴(kuò)增一段約1555 bp的cDNA片段，并亞克隆至pBluescriptⅡKS(+)載體中，進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切和序列分析。 結(jié)果 證實(shí)所克隆的片段是大鼠的RDS/peripherin cDNA，與Begy等報(bào)道的序列[1]相比，除3prime;端非翻譯區(qū)的第1242位的堿基Ararr;G，第1409～1411位堿基CArarr;CCA外，其它序列基本一致[1]。 結(jié)論 已獲得大鼠RDS/peripherin基因的cDNA,為研究RDS/peripherin基因的功能及在視網(wǎng)膜變性疾病中的作用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 (中華眼底病雜志,1999,15:97-99)
目的；研究RB患者腫瘤及體細(xì)胞內(nèi)Rb基因的存在狀態(tài)、細(xì)微結(jié)構(gòu)、Rb基因突變的特征、起源與傳遞。方法；DNA分子雜交、SSCP分析、DNA序列測(cè)定。結(jié)果：108例RB腫瘤標(biāo)本中80例(?4％)存在Rb基因點(diǎn)突變，其中44例為純合型，20例有二個(gè)獨(dú)立發(fā)生的雜合型點(diǎn)突變，16例只檢出一個(gè)雜合型點(diǎn)突變。通過(guò)對(duì)比分析RB患者腫瘤與白細(xì)胞DNA、RB患者家庭成員白細(xì)胞DNARlo基因的結(jié)構(gòu)，揭示了Rb基因點(diǎn)突變的起源與遺傳特征。結(jié)論：Rb基因是與RB腫瘤形成關(guān)系最為密切的基因。RB腫瘤發(fā)生需二次突變事件導(dǎo)致Rb基因的二個(gè)等位基因失活，第一次突變事件突出表現(xiàn)為點(diǎn)突變；第二次突變事件主要是LOH，其次是點(diǎn)突變。（中華眼底病雜志，1997，13：12-16）
目的構(gòu)建pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體，為研究TFPI-2基因的功能做準(zhǔn)備。 方法從胎盤組織中提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以PCR法進(jìn)行擴(kuò)增。將擴(kuò)增的TFPI-2基因片段克隆到pEGFP-N3真核表達(dá)載體上，經(jīng)XhoⅠ和KpnⅠ雙酶切后，行1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，同時(shí)測(cè)定其DNA序列。將pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體以脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染Top10感受態(tài)細(xì)胞（轉(zhuǎn)染組），同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組（僅轉(zhuǎn)染pEGFP-N3質(zhì)粒）和未轉(zhuǎn)染組（不予轉(zhuǎn)染）。采用Western blot法檢測(cè)3組細(xì)胞中TFPI-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果總RNA經(jīng)分光光度法驗(yàn)證，其純度符合PCR法擴(kuò)增的要求。構(gòu)建的pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體經(jīng)XhoⅠ和KpnⅠ雙酶切后，行1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示，分別在708 bp處和4 700 bp處有特異擴(kuò)增條帶，大小與理論值一致。DNA序列測(cè)定結(jié)果證實(shí)，pEFFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體的序列完全正確。Western blot法結(jié)果顯示，TFPI-2蛋白的表達(dá)量轉(zhuǎn)染組為0.657 3±0.032 5，空白對(duì)照組為0.301 7±0.028 7，未轉(zhuǎn)染組為0.314 3±0.026 6，轉(zhuǎn)染組TFPI-2蛋白的表達(dá)量高于空白對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了pEGFP-N3-TFPI-2真核表達(dá)載體，為TFPI-2基因功能的研究奠定了基礎(chǔ)。
目的明確一國(guó)人低外顯率視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)家系基因突變位點(diǎn)。 方法對(duì)一個(gè)3代9人的漢族RB家系成員進(jìn)行臨床觀察。采集家系中6人外周靜脈血并提取基因組DNA。運(yùn)用外顯子結(jié)合目標(biāo)區(qū)域捕獲測(cè)序芯片進(jìn)行檢測(cè); 對(duì)候選致病性突變位點(diǎn)運(yùn)用Sanger驗(yàn)證, 確定致病性突變位點(diǎn)。 結(jié)果家系9人中, 先證者(Ⅲ2)為雙眼RB, Ⅲ1為單眼RB; Ⅲ3為雙眼RB, 已死亡。除先證者外, Ⅲ1左眼及其他所有受試者眼底檢查結(jié)果正常。基因檢測(cè)結(jié)果顯示, RB患兒及2名攜帶者(Ⅱ2、Ⅱ3)Rb1基因檢出一個(gè)錯(cuò)義突變c.1981C＞T (p.Arg661Trp); 2名正常者(Ⅱ1、Ⅱ4)未發(fā)現(xiàn)該突變。推測(cè)該家系RB外顯率為50%。 結(jié)論國(guó)人一RB低外顯率家系中發(fā)現(xiàn)Rb1基因錯(cuò)義突變c.1981C＞T; RB外顯率為50%。
目的觀察寧夏地區(qū)散發(fā)型視網(wǎng)膜色素變性（RP）的致病基因及其遺傳方式。 方法臨床檢查確診為散發(fā)型RP（sRP）的患者49例以及家庭成員128名納入研究。詳細(xì)收集患者病史、家族史；患者以及家庭成員均行最佳矯正視力、裂隙燈顯微鏡、間接檢眼鏡、眼底彩色照相、視野、光相干斷層掃描、全視野視網(wǎng)膜電圖檢查；采集患者及其家庭成員外周靜脈血，提取全基因組DNA。采用外顯子捕獲技術(shù)對(duì)目前已知的230個(gè)視網(wǎng)膜疾病致病基因進(jìn)行相關(guān)基因排查，確定候選致病基因突變位點(diǎn)；第二代測(cè)序技術(shù)直接測(cè)序法進(jìn)行驗(yàn)證，并在家庭成員中進(jìn)行共分離，分析其遺傳方式。 結(jié)果49例sRP患者中，24例患者檢測(cè)出致病基因16個(gè)，檢測(cè)陽(yáng)性率為49.0%；發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)41個(gè)。其中，新發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)32個(gè)，占78.0%。24例檢測(cè)出致病基因的患者中，致病基因USH2A 7例，占29.2%；C2orf71、RDH12、CNGA1各2例，分別占8.3%；RPGR1、IFT140、TULP1、CLRN1、RPE65、ABCA4、GUCA1A、EYS、CYP4V2、GPR98、ATXN7各1例，分別占4.2%。根據(jù)其家庭成員基因篩查結(jié)果分析，24例檢測(cè)出致病基因的患者中，隱性遺傳RP 20例，占83.3%；顯性遺傳RP 3例，占12.5%；X連鎖遺傳RP 1例，占4.2%。USH2A基因突變的7例患者中3例確診為Usher綜合征。 結(jié)論寧廈地區(qū)sRP患者主要致病基因?yàn)閁SH2A基因；檢測(cè)出致病基因的患者中83.3%為常染色體隱性遺傳RP。
目的研究1個(gè)常染色體顯性遺傳家族性滲出性玻璃體視網(wǎng)膜病變（FEVR）家系的致病基因突變。 方法一個(gè)3代常染色體顯性遺傳FEVR家系中3例患者及1例患者的配偶納入研究。先證者，男，5歲。其母親和外公眼底均表現(xiàn)為典型的FEVR改變；父親眼底檢查正常。采集所有受試者外周靜脈血，提取基因組DNA，擴(kuò)增候選致病基因Norrie病、卷曲蛋白4（FZD4）、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5、四旋蛋白12、鋅指蛋白408基因的全部編碼區(qū)及外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)剪切位點(diǎn)附近的序列，直接測(cè)序法檢測(cè)潛在致病基因突變。應(yīng)用分析軟件明確該基因突變位點(diǎn)的保守性、有害性及可能引起的蛋白結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果3例患者及先證者父親共檢測(cè)到5個(gè)單核苷酸變異，濾過(guò)最小等位基因頻率值高于0.001的高頻變異位點(diǎn)4個(gè)，可疑致病突變位點(diǎn)1個(gè)即FZD4基因c.478G>A。該突變位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的氨基酸改變?yōu)镕ZD4基因所編碼蛋白的第160號(hào)氨基酸從谷氨酸突變?yōu)橘嚢彼幔╬.E160K）?；蛐秃捅硇凸卜蛛x驗(yàn)證結(jié)果表明，F(xiàn)ZD4 p.E160K為該家系的致病突變位點(diǎn)。蛋白序列同源性分析結(jié)果顯示，該突變位點(diǎn)在多個(gè)物種中均高度保守；功能性分析結(jié)果顯示，該突變?yōu)橛泻π酝蛔?；晶體結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示，該突變能夠引起第160號(hào)氨基酸位點(diǎn)與第152號(hào)天冬酰胺間的氫鍵消失，影響蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)和正常功能。 結(jié)論發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了該家系FZD4 p.E160K為FEVR的新突變位點(diǎn)。