目的 探討藍(lán)光光照強(qiáng)度、時(shí)間與大鼠視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞復(fù)制衰老的關(guān)系。方法 將36只鼠齡12~14周的Wistar大鼠置于懸有波長(zhǎng)為（450plusmn;10） nm的醫(yī)用藍(lán)光燈管的自制光照架中。隨機(jī)分為4組，每組9只大鼠，1組：無(wú)光照對(duì)照組；2組：自然光照組；3組：500 lx光照組；4組：1000 lx光照組。每組按照照射時(shí)間再分為1、2、3個(gè)月組3個(gè)亞組，分別在1、2、3個(gè)月時(shí)行10％水合氯醛腹腔注射麻醉后取出眼球，將右眼球行石蠟切片，蘇木精伊紅（HE）染色；左眼球行冰凍切片，采用衰老相關(guān)beta;半乳糖苷酶（SA-beta;-Gal）染色方法觀察RPE細(xì)胞染色陽(yáng)性情況。采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 不同光照強(qiáng)度組、不同光照時(shí)間組大鼠RPE 細(xì)胞SA-beta;-Gal染色陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝510.309，55.016；P＝0.000）；組間兩兩比較，除1組與2組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P＝0.154），其它各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）。在單一光照強(qiáng)度條件下，除1組大鼠RPE細(xì)胞SA-beta;-Gal染色陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外（P=0.897）,其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在單一時(shí)間條件下，各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.000）。結(jié)論 同一藍(lán)光光照強(qiáng)度下，隨著時(shí)間的增加大鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞逐漸出現(xiàn)復(fù)制衰老改變;同一時(shí)間條件下，隨光照強(qiáng)度增加大鼠視網(wǎng)膜RPE細(xì)胞也逐漸出現(xiàn)復(fù)制衰老改變。
神經(jīng)干細(xì)胞（NSC）是一類能向神經(jīng)細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞分化的特殊干細(xì)胞。Müller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜主要內(nèi)源性NSC，具有在視網(wǎng)膜損傷后進(jìn)入細(xì)胞周期增生并分化為神經(jīng)細(xì)胞的能力。在脊椎動(dòng)物中，視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞的內(nèi)源性NSC自發(fā)再生有著很高的效率，而哺乳動(dòng)物這一能力幾乎完全消失。深入研究發(fā)現(xiàn)，Ascl1、Sox2、Lin28、Atoh7等部分轉(zhuǎn)錄因子具有促進(jìn)Müller細(xì)胞增生并分化為神經(jīng)細(xì)胞的功能。而Ascl1聯(lián)合組蛋白脫乙酰酶抑制劑更能使小鼠Müller細(xì)胞分化的神經(jīng)細(xì)胞整合進(jìn)入已有的視網(wǎng)膜并能對(duì)光做出反應(yīng)，從而可能挽救視力。但與斑馬魚相比，哺乳動(dòng)物Müller細(xì)胞增生再生能力依然十分有限。尋找更多能增強(qiáng)Müller細(xì)胞分化能力的新因子將成為亟待解決的重要問(wèn)題。
目的分析增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變（PDR）25G玻璃體切割手術(shù)（PPV）后發(fā)生新生血管性青光眼（NVG）的危險(xiǎn)因素。方法回顧性病例研究。2017年1月至2018年12月在天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院首次行PPV治療的PDR合并玻璃體積血（VH）患者340例340只眼納入研究。其中，男性185例，女性155例；平均年齡（55.79±10.82）歲。患者平均糖尿病病程（13.01±7.70）年；平均空腹血糖（7.55±2.15）mmol/L。合并冠心病19例，合并腦梗死20例。所有患眼均行最佳矯正視力（BCVA）、眼壓、間接檢眼鏡、彩色眼底照相等檢查。BCVA檢查采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)Snellen視力表進(jìn)行，并將結(jié)果換算為最小分辨角對(duì)數(shù)（logMAR）視力記錄?；佳燮骄鵯ogMAR BCVA 2.04±0.73，平均眼壓（15.45±2.93）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）。VH持續(xù)時(shí)間3周～6個(gè)月，平均時(shí)間（2.98±1.46）個(gè)月。340只眼中，Ⅳ期93只眼（27.35%），Ⅴ期107只眼（31.47%），Ⅵ期116只眼（34.12%）；伴牽引性視網(wǎng)膜脫離（TRD）83只眼。所有患眼均行25G標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)睫狀體平坦部三通道PPV。57只眼手術(shù)前3 d行玻璃體腔注射抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）藥物治療，234只眼手術(shù)中剝除內(nèi)界膜，262只眼同時(shí)行白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)，141只眼手術(shù)完畢時(shí)行玻璃體腔注射抗VEGF藥物治療。手術(shù)后隨訪至少12個(gè)月，平均隨訪時(shí)間（10.80±5.79）個(gè)月。以裂隙燈顯微鏡或房角鏡檢查發(fā)現(xiàn)虹膜和（或）房角存在新生血管且眼壓＞21 mmHg者診斷為NVG。采用Kaplan-Meier法和Cox單因素、多因素回歸分析手術(shù)前基線因素、眼部因素、手術(shù)因素與手術(shù)后NVG發(fā)生的關(guān)系。結(jié)果340只眼中，PPV后發(fā)生NVG者66只眼（19.41%）；發(fā)生NVG的時(shí)間為手術(shù)后6～335 d，平均時(shí)間為（98.00±5.79）d。PPV后第3、6、12個(gè)月，NVG發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)比分別為11.50%、15.29%、20.75%。單因素Cox分析結(jié)果表明，年齡、合并冠心病或腦梗死疾病等手術(shù)前基線因素對(duì)手術(shù)后發(fā)生NVG有影響（P＜0.05）；PDR分期、合并TRD、手術(shù)前l(fā)ogMAR BCVA、手術(shù)前眼壓等眼部因素對(duì)手術(shù)后發(fā)生NVG無(wú)影響（P＞0.05）；聯(lián)合白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)、手術(shù)中剝除內(nèi)界膜、手術(shù)前3 d玻璃體腔注射抗VEGF藥物等手術(shù)因素對(duì)手術(shù)后發(fā)生NVG有影響（P＜0.05）。將Cox單因素分析有意義的變量納入多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析，逐步回歸探索手術(shù)后NVG的影響因素。結(jié)果顯示，年齡、合并冠心病或腦梗死、聯(lián)合白內(nèi)障超聲乳化和手術(shù)中內(nèi)界膜剝除是手術(shù)后發(fā)生NVG的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因素（P＜0.05）。結(jié)論低齡、合并冠心病或腦梗死、聯(lián)合白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)是PDR患者PPV后發(fā)生NVG的危險(xiǎn)因素，手術(shù)中剝除內(nèi)界膜可減少NVG的發(fā)生。
目的觀察27G玻璃體切割手術(shù)（PPV）聯(lián)合Healaflow覆蓋封閉視網(wǎng)膜裂孔和空氣填充治療原發(fā)性孔源性視網(wǎng)膜脫離（RRD）的安全性和有效性。方法以臨床為基礎(chǔ)的前瞻性連續(xù)研究。2017年3月至2018年5月于天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院檢查確診并行PPV治療的原發(fā)性RRD患者50例51只眼納入研究?；佳劬?7G PPV，視網(wǎng)膜完全復(fù)位后，視網(wǎng)膜裂孔周圍及變性區(qū)行激光光凝；使用27G鈍性針頭將Healaflow完全覆蓋于視網(wǎng)膜裂孔表面，注射量根據(jù)視網(wǎng)膜裂孔大小確定，以裂孔完全被包含為標(biāo)準(zhǔn)。手術(shù)后無(wú)體位限制。手術(shù)后平均隨訪時(shí)間（15.8±6.3）個(gè)月。觀察首次和最終視網(wǎng)膜復(fù)位率、BCVA、視網(wǎng)膜脫離復(fù)發(fā)情況；手術(shù)中、手術(shù)后并發(fā)癥等。結(jié)果50例51只眼納入研究。其中，男性29例（58.0%），女性21例（42.0%）。平均年齡（58.5±11.2）歲。單一裂孔28只眼（54.9%）；2～5個(gè)裂孔23只眼（45.1%）。是否累及黃斑區(qū)分別為32（62.7%），19（37.3%）只眼。首次視網(wǎng)膜復(fù)位50只眼（98.0%），最終所有患眼均復(fù)位（100.0%）。手術(shù)前、手術(shù)后3個(gè)月logMAR BCVA分別為0.95±0.80、0.22±0.17；手術(shù)前后logMAR BCVA比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.336，P＜0.001）。手術(shù)后一過(guò)性眼壓升高31只眼（60.8%）。隨訪期間無(wú)其他并發(fā)癥發(fā)生。結(jié)論27G PPV聯(lián)合Healaflow覆蓋視網(wǎng)膜裂孔和空氣填充治療原發(fā)性RRD，成功率高，視功能恢復(fù)快；安全、有效。
目的觀察病理性近視（PM）患者房水標(biāo)本中蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化。方法橫斷面研究。2019年1～8月在天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院收集32例老年性白內(nèi)障患者的房水樣本進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)。其中，男性11例，女性21例；年齡58～76歲，平均年齡（68.41±6.09）歲。將合并PM的16例作為PM組，不合并近視的16例作為對(duì)照組。所有患者在白內(nèi)障手術(shù)操作之前從手術(shù)眼收集100～150 μl前房水。采用蛋白定量和非標(biāo)記液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到差異表達(dá)蛋白。隨機(jī)選取5個(gè)差異蛋白進(jìn)行ELISA驗(yàn)證。然后用基因注釋功能富集、京都基因和基因組百科全書通路富集等生物信息學(xué)分析方法分析差異表達(dá)蛋白的功能。結(jié)果兩組房水標(biāo)本中共鑒定出583個(gè)可定量蛋白質(zhì)，其中101個(gè)蛋白存在差異表達(dá)，包括63個(gè)上調(diào)蛋白和38個(gè)下調(diào)蛋白。ELISA驗(yàn)證結(jié)果顯示，5個(gè)差異表達(dá)蛋白在PM組和對(duì)照組之間的表達(dá)變化趨勢(shì)均與非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果相一致。這些差異表達(dá)蛋白的分類主要包括蛋白結(jié)合活性調(diào)節(jié)因子、防御/免疫蛋白、蛋白質(zhì)修飾酶、代謝物間轉(zhuǎn)換酶、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等。生物信息學(xué)分析表明，PM與炎癥和免疫相互作用以及細(xì)胞外基質(zhì)的重塑密切相關(guān)。結(jié)論P(yáng)M患者房水標(biāo)本中蛋白質(zhì)表達(dá)譜較對(duì)照組有明顯變化，這些差異變化提示PM與炎癥和免疫相互作用以及細(xì)胞外基質(zhì)的重塑密切相關(guān)。
目的對(duì)比分析一站式玻璃體腔注射抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）藥物（以下簡(jiǎn)稱為玻璃體腔注藥）中心成立前后真實(shí)世界中玻璃體腔注藥的應(yīng)用情況和不同管理模式下的成效。方法回顧性臨床研究。2018年7月至2022年6月于天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院接受抗VEGF藥物治療的眼底疾病患者4 015例4 659只眼納入研究。其中，男性2 146例，女性1 869例。滲出型老年性黃斑變性（wAMD）968例1 090只眼；糖尿病黃斑水腫（DME） 654例855只眼；糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）980例1 158只眼；視網(wǎng)膜靜脈阻塞繼發(fā)黃斑水腫（RVO-ME）916例930只眼；病理性近視繼發(fā)脈絡(luò)膜新生血管（PM-CNV）275例294只眼；其他眼底疾病222例332只眼。共計(jì)注射13 796針抗VEGF藥物。將2018年7月至2020年6月于玻璃體腔注藥中心成立前接受抗VEGF藥物治療的1 252例1 403只眼作為對(duì)照組；2020年7月至2022年6月于玻璃體腔注藥中心接受抗VEGF藥物治療的2 763例3 256只眼作為觀察組。對(duì)比觀察對(duì)照組、觀察組玻璃體腔注藥的總體針數(shù)、按疾病分類后每種疾病接受抗VEGF藥物治療的分布狀態(tài)、選擇3+按需治療（PRN）方案的比例、不同抗VEGF藥物的臨床應(yīng)用分布，同時(shí)使用問(wèn)卷調(diào)查記錄患者等待時(shí)間和就醫(yī)體驗(yàn)。兩組間比較，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)。結(jié)果 4 659只眼13 796針抗VEGF藥物中，對(duì)照組1 403只眼4 762針，每只眼注射（3.39±3.78）針；觀察組3 256只眼9 034針，每只眼注射（2.78±2.27）針。兩組患眼平均注射針數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.900，P＜0.001）。對(duì)照組、觀察組患眼中，wAMD者分別注射1 728、2 705針，平均每只眼分別注射（5.14±4.56）、（3.59±2.45）針；DME者分別注射982、2 038針，平均每只眼分別注射（4.36±4.91）、（3.24±2.77）針；RVO-ME者分別注射942、2 179針，平均每只眼分別注射（3.98±3.71）、（3.14±2.15）針；PM-CNV者分別注射291、615針，平均每只眼分別注射（3.31±2.63）、（2.99±1.69）針；DR者分別注射683、1 029針，平均每只眼分別注射（1.60±1.26）、（1.41±1.05）針。對(duì)照組、觀察組患眼中接受3+PRN治療方案者，wAMD分別為223（66.4%，223/336）、431（57.2%，431/754）只眼，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.210，P=0.004）；DME分別為75（33.3%，75/225）、236（37.5%，236/630）只眼，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.220，P＞0.05）；RVO-ME分別為97（40.9%，97/237）、355（51.2%，355/693）只眼，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.498，P=0.006）；PM-CNV分別為39（44.3%，39/88）、111（53.9%，111/206）只眼，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.258，P＞0.05）。問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果顯示，對(duì)照組、觀察組患者間預(yù)約等待手術(shù)時(shí)間（t=1.340）、注藥當(dāng)天入院至進(jìn)入手術(shù)室時(shí)間（t=2.780）、手術(shù)前完成治療準(zhǔn)備至等待進(jìn)入手術(shù)室時(shí)間（t=8.390）、入院至離院時(shí)間比較（t=6.060），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論一站式玻璃體腔注藥模式可顯著提升工作效率，大幅增加注藥數(shù)量；極大縮短患者等待時(shí)間，患者整體就醫(yī)體驗(yàn)改善明顯。
目的觀察玻璃體腔注射（IVI）前不同方式預(yù)防感染后結(jié)膜囊微生物培養(yǎng)陽(yáng)性率的變化差異。方法前瞻性病例對(duì)照研究。2021年7月至2023年12月于天津醫(yī)科大學(xué)眼科醫(yī)院IVI中心接受IVI藥物治療的眼底疾病患者1 200例納入研究。按照IVI前3、1 d抗生素眼液點(diǎn)眼（前3 d、前1 d）、治療前不使用抗生素眼液（前0）和IVI前3 min、30 s聚維酮碘（PVI）眼局部消毒將患者隨機(jī)分為6組：前3 d抗生素+3 min PVI組、前1 d抗生素+3 min PVI組、前0+3 min PVI組、前3 d抗生素+30 s PVI組、前1 d抗生素+30 s PVI組、前0+30 s PVI組，每組均為200例。IVI前進(jìn)行結(jié)膜囊微生物采樣培養(yǎng)，比較各組陽(yáng)性率差異。多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。結(jié)果1 200例患者中，男性566例，女性634例；年齡（62.59±13.44）歲。糖尿病、高血壓分別為397、482例。IVI次數(shù)（2.35±2.34）次。IVI前結(jié)膜囊培養(yǎng)陽(yáng)性64例。各組患者年齡（F=1.468）、性別構(gòu)成比（χ2=2.876）、糖尿病例數(shù)（χ2=10.002）、高血壓例數(shù)（χ2=6.019）、IVI次數(shù)（χ2=4.507）、結(jié)膜囊細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性率（χ2=6.272）比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以IVI前抗生素應(yīng)用時(shí)長(zhǎng)為分層因素，不同IVI前抗生素應(yīng)用時(shí)長(zhǎng)組結(jié)膜囊培養(yǎng)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[χ2=0.414，P=0.520，合并比值比（OR）=0.819，95%可信區(qū)間（CI）0.493～1.360]。以PVI應(yīng)用時(shí)長(zhǎng)為分層因素，不同PVI消毒時(shí)間組結(jié)膜囊培養(yǎng)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.000，P=1.000，合并OR=1.000，95%CI 0.503～1.988）。結(jié)論IVI前0.5% PVI作用30 s可達(dá)到抑制結(jié)膜囊微生物菌落生長(zhǎng)的作用；IVI前眼局部抗生素眼液的應(yīng)用不能降低結(jié)膜囊細(xì)菌陽(yáng)性率。
目的觀察聚嘧啶束結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）高表達(dá)對(duì)糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)下RPE細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法將體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞分為正常對(duì)照組（N組）、空白對(duì)照組（N+AGAGEs組）、空載體對(duì)照組（Vec+AGEs組）、PSF高表達(dá)組（PSF+AGEs組）。N組RPE細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)；N+AGEs組只做轉(zhuǎn)染處理但不導(dǎo)入任何外源性基因的RPE細(xì)胞聯(lián)合AGEs誘導(dǎo)；Vec+AGEs組、PSF+AGEs組利用轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000將pcDNA空載體或pcDNA-PSF真核表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入RPE細(xì)胞聯(lián)合AGEs誘導(dǎo)。除N組以外，其余3組細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)的轉(zhuǎn)染處理，24 h后應(yīng)用150 μg/ml的AGEs刺激72 h。采用HE染色和Hoechst 33258染色觀察PSF高表達(dá)對(duì)RPE細(xì)胞凋亡相關(guān)形態(tài)改變的影響；通過(guò)ROS水平檢測(cè)分析PSF高表達(dá)對(duì)AGEs誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞ROS表達(dá)的影響；采用MTT比色法檢測(cè)PSF高表達(dá)對(duì)RPE細(xì)胞生存力的影響；采用Western blot檢測(cè)PSF不同作用時(shí)間及不同劑量對(duì)血紅素氧合酶1（HO-1）表達(dá)的影響。結(jié)果HE染色和Hoechst 33258染色觀察發(fā)現(xiàn)，N組細(xì)胞形態(tài)飽滿，細(xì)胞核呈圓形，細(xì)胞質(zhì)豐富，染色均一；N+AGEs組、Vec+AGEs組細(xì)胞體積縮小，嗜酸性染色增強(qiáng)，細(xì)胞核致密濃染、固縮甚至碎裂；PSF+AGEs組細(xì)胞形態(tài)尚飽滿，細(xì)胞漿染色較均勻，細(xì)胞核染色均一。MTT比色法檢測(cè)結(jié)果顯示，PSF高表達(dá)可有效提高RPE細(xì)胞生存力，但該作用可被ZnPP有效拮抗，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=33.26，P＜0.05）。DCFH-DA法檢測(cè)結(jié)果顯示，與N+AGEs組、Vec+AGEs組比較，PSF+AGEs組細(xì)胞中ROS產(chǎn)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.94，P＜0.05）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，PSF蛋白以時(shí)間、劑量依賴性的方式上調(diào)HO-1的表達(dá)水平。PSF蛋白作用24、48、72 h的HO-1相對(duì)表達(dá)水平較0 h明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=164.91，P＜0.05）。0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μg PSF蛋白作用下的HO-1相對(duì)表達(dá)水平較0.0 μg明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=104.82，P＜0.05）。結(jié)論P(yáng)SF可能通過(guò)上調(diào)HO-1的表達(dá)而抑制ROS產(chǎn)生，從而對(duì)AGEs誘導(dǎo)下的RPE細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
目的觀察慢病毒介導(dǎo)聚嘧啶束結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）對(duì)氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。方法5日齡C57BL/6J小鼠112只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、單純OIR模型組、OIR模型+慢病毒空載體處理組（以下簡(jiǎn)稱Vec組）及OIR模型+ PSF慢病毒處理組（以下簡(jiǎn)稱PSF組），分別為16、32、32、32只。小鼠7日齡時(shí)，正常對(duì)照組小鼠常規(guī)環(huán)境飼養(yǎng)；單純OIR模型組、Vec組及PSF組小鼠建立OIR模型。小鼠12日齡時(shí)，Vec組、PSF組小鼠玻璃體腔分別注射滴度為1×1011 TU/ml的空載體病毒或PSF慢病毒1 μl。正常對(duì)照組和單純OIR模型組小鼠不再做任何處理。小鼠17日齡時(shí)，采用HE染色計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核；作視網(wǎng)膜鋪片，測(cè)量各組小鼠視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)相對(duì)面積；采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中NF-E2相關(guān)因子2（Nrf2）和血紅素氧合酶1（HO-1）的mRNA相對(duì)表達(dá)量；采用Western blot檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相對(duì)表達(dá)量。組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果正常對(duì)照組、單純OIR模型組、Vec組、PSF組小鼠突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)分別為0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09個(gè)；視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)面積分別為0.00%、（35.71±2.81）%、（36.57±4.53）%、（15.33±4.75）%。4組間小鼠突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)及視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)面積比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.87、165.70，P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組較正常對(duì)照組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)增多，視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)面積增大；PSF組較單純OIR模型組、Vec組突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)減少，視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)面積減小，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)時(shí)定量PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，4組間小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、PSF mRNA相對(duì)表達(dá)量（F=53.66、83.54）以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對(duì)表達(dá)量（F=58.38、52.69、24.79）比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。組間兩兩比較，單純OIR模型組、Vec組小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、PSF mRNA相對(duì)表達(dá)量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對(duì)表達(dá)量較正常對(duì)照組明顯降低，PSF組小鼠視網(wǎng)膜Nrf2、PSF mRNA相對(duì)表達(dá)量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相對(duì)表達(dá)量較單純OIR模型組、Vec組明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的PSF可通過(guò)上調(diào)Nrf2及HO-1的表達(dá)抑制OIR小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成。
目的觀察多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（hRMECs）功能的影響。方法采用三質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建慢病毒顆粒（LV）-PSF。LV-PSF體外感染hRMECs后通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定其感染效率。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)經(jīng)LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表達(dá)水平。將實(shí)驗(yàn)分為體內(nèi)和體外兩部分。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：7日齡健康C57B/L6小鼠20只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）組、OIR+LV-空載體（Vec）組和OIR+LV-PSF組，每組5只。除正常組外，其余3組構(gòu)建OIR模型。OIR組除缺氧刺激外，不做其余處理。OIR+LV-Vec組和OIR+LV-PSF組小鼠分別玻璃體腔注射LV-Vec或LV-PSF。觀察LV-PSF對(duì)視網(wǎng)膜新生血管（RNV）形成的影響。體外實(shí)驗(yàn)：將hRMECs分為正常組、缺氧組、空載組、PSF高表達(dá)組。正常組為正常體外培養(yǎng)的hRMECs；缺氧組為缺氧刺激3 h恢復(fù)正常培養(yǎng)條件24 h的hRMECs；空載組、PSF高表達(dá)組分別為用LV-Vec、LV-PSF感染48 h，再用缺氧刺激3 h恢復(fù)正常培養(yǎng)條件24 h的hRMECs。采用MTT比色法觀察PSF對(duì)細(xì)胞增生能力的影響。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察PSF對(duì)缺氧刺激下細(xì)胞遷移能力的影響。采用RT-PCR觀察各組細(xì)胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建可穩(wěn)定高表達(dá)PSF的LV-PSF，流式細(xì)胞儀測(cè)定其感染效率為97%，RT-PCR測(cè)得經(jīng)LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明顯上調(diào)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：OIR組、OIR+LV-Vec組小鼠RNV面積較正常組明顯增加（t=18.31、43.71），OIR+LV-PSF組小鼠RNV面積較OIR組（t=11.30）、OIR+LV-Vec組（t=15.47）明顯減小，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。體外實(shí)驗(yàn)：MTT比色法檢測(cè)結(jié)果顯示，缺氧組hRMECs增生能力較正常組明顯增強(qiáng)（t=2.57），PSF高表達(dá)組hRMECs增生能力較正常組、缺氧組、空載組明顯降低（t=5.26、5.46、3.73），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，缺氧刺激3 h恢復(fù)正常條件24 h或48 h均可刺激缺氧組與空載組細(xì)胞明顯遷移（t=8.35、13.84，P＜0.05）；而與缺氧組與空載組比較，PSF高表達(dá)組細(xì)胞遷移不明顯（t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01，P＜0.05）。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常組和空載組微孔膜上染色的細(xì)胞數(shù)較多，而PSF高表達(dá)組微孔膜上染色的細(xì)胞數(shù)明顯減少（t=9.33、6.15，P＜0.05）。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常組比較，缺氧組、空載組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達(dá)明顯增加（t=15.23、21.09，P＜0.05），PSF mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化（t=0.12、2.15， P＜0.05）；與缺氧組、空載組比較，PSF高表達(dá)組hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表達(dá)明顯下降（t=10.18、13.10，P＜0.05），PSF mRNA表達(dá)明顯增加（t=65.00、85.79，P＜0.05）。結(jié)論P(yáng)SF可減少OIR模型小鼠RNV面積。PSF可能通過(guò)HIF-1α/VEGF信號(hào)通路抑制缺氧誘導(dǎo)的hRMECs增生和遷移。