目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因?qū)CF-7細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及對(duì)化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對(duì)DLL4基因的序列設(shè)計(jì)具有特異性的shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，作為實(shí)驗(yàn)組，空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞為脂質(zhì)體組，未做任何處理的MCF-7細(xì)胞為對(duì)照組。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)3組細(xì)胞DLL4蛋白的表達(dá)情況；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期改變；采用噻唑藍(lán)（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測(cè)定3組細(xì)胞的增殖情況及對(duì)多西他賽的敏感性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組平均光密度值及陽(yáng)性面積率均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在24h、48h及72h時(shí)間點(diǎn)A值均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）； 轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h及96 h，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實(shí)驗(yàn)組G2/M期細(xì)胞比例高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組的IC50值較對(duì)照組和脂質(zhì)體組低（P＜0.05）。結(jié)論 RNAi技術(shù)抑制DLL4基因的表達(dá)能夠抑制MCF-7細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會(huì)成為乳腺癌治療的重要靶點(diǎn)。
目的 分析Delta樣配體4（Delta-like ligand 4，DLL4）及S100鈣結(jié)合蛋白A4（S100 calcium binding protein A4，S100A4）在不同乳腺癌分子亞型組織中的表達(dá)并討論其臨床意義。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)十堰市太和醫(yī)院 Luminal A型乳腺癌組織51例、Luminal B型乳腺癌組織26例、HER-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌組織17例、基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織14例和乳腺癌癌旁組織40例中DLL4和S100A4的表達(dá)情況，并分析其與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 在乳腺癌組織中，DLL4和S100A4的表達(dá)陽(yáng)性率分別為67.6%（73/108）和62.0%（67/108），均高于其在癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率〔22.5%（9/40），45.0%（18/40）〕，P＜0.05。在不同乳腺癌分子亞型組織中，HER-2過(guò)表達(dá)型和基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織中DLL4和S100A4的表達(dá)陽(yáng)性率均高于Luminal A型和Luminal B型（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，DLL4和S100A4呈高表達(dá) （P＜0.05）。乳腺癌組織中DLL4表達(dá)與S100A4表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（rs=0.217，P＜0.01）。結(jié)論 DLL4和S100A4在基底細(xì)胞樣型和HER-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌組織中呈高表達(dá)，與預(yù)后相關(guān)。DLL4和S100A4共同參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程。臨床聯(lián)合檢測(cè)兩種蛋白表達(dá)可評(píng)估乳腺癌的潛在轉(zhuǎn)移和預(yù)后。
目的檢測(cè)乳腺癌及乳腺良性病變患者外周血中人乳腺珠蛋白（human mammary gland globin，hMAM）mRNA的表達(dá)，為乳腺癌分子標(biāo)記選擇提供理論依據(jù)。 方法選取2011年6月至2012年10月期間筆者所在醫(yī)院收治的乳腺癌患者78例以及乳腺良性病變患者30例（乳腺增生癥15例，乳腺纖維腺瘤15例）作為研究對(duì)象，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)檢測(cè)其外周血中hMAM mRNA的表達(dá)，并分析其與患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)類型、腫瘤分期、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及ER、PR和HER-2表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果乳腺增生及乳腺纖維腺瘤患者外周血中均未檢出hMAM mRNA表達(dá)，乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性率為48.72%（38/78）其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.357，P=0.000）。乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、病理學(xué)類型以及ER、PR和HER-2表達(dá)無(wú)關(guān)（P＞0.05），但與腫瘤的臨床分期（Z=-2.214，P=0.027）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（Z=-2.754，P=0.006）。 結(jié)論外周血中檢出的hMAM mRNA表達(dá)是診斷乳腺癌相對(duì)特異性的標(biāo)志，外周血中hMAM mRNA的表達(dá)可能與乳腺癌患者的預(yù)后相關(guān)。
目的探索人異黏蛋白（metaherin，MTDH）mRNA及其蛋白在乙肝相關(guān)性肝癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)差異，并探索其臨床意義。 方法回顧性收集2012年7月至2013年10月期間湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院保存的乙肝相關(guān)性肝癌組織及其癌旁組織標(biāo)本，采用熒光定量PCR法和Western blot法分別檢測(cè)乙肝相關(guān)性肝癌組織及其癌旁組織中MTDH mRNA及其蛋白的表達(dá)水平（均為10例），并采用免疫組化染色方法檢測(cè)72例乙肝相關(guān)性肝癌組織中MTDH蛋白的表達(dá)情況，進(jìn)一步分析乙肝相關(guān)性肝癌組織中MTDH蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系。 結(jié)果乙肝相關(guān)性肝癌組織MTDH mRNA（8.50±0.84比4.55±0.81，t=10.797，P=0.000）及其蛋白（0.65±0.24比0.25±0.16，t=6.375，P=0.013）的表達(dá)水平均高于癌旁組織。在72例乙肝相關(guān)性肝癌組織中，42例MTDH蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)（58.3%），30例呈陰性表達(dá)（41.7%）。多因素logistic回歸模型結(jié)果顯示，在乙肝性相關(guān)性肝癌患者中，Edmondson分級(jí)為Ⅲ級(jí)（OR=4.783，95% CI：2.663～11.918，P=0.020）、有微血管浸潤(rùn)（OR=37.790，95% CI：2.227～99.434，P=0.005）及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（OR=7.332，95% CI：3.325～30.669，P=0.023）均與MTDH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)。 結(jié)論在乙肝相關(guān)性肝癌組織中存在MTDH mRNA及其蛋白的高表達(dá)，且MTDH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與患者較差的預(yù)后相關(guān)。
目的探索雌激素受體α（ERα）陽(yáng)性乳腺癌組織及乳腺纖維腺瘤組織中Mdm2的表達(dá)，并探索MDM2-siRNA對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、克隆及凋亡的影響。 方法①回顧性收集筆者所在醫(yī)院2012年6月至2015年10月期間的經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診的ERα陽(yáng)性乳腺癌組織石蠟標(biāo)本78例（乳腺癌組）及乳腺纖維腺瘤組織石蠟標(biāo)本10例（乳腺纖維腺瘤組），采用免疫組化染色方法檢測(cè)其Mdm2的表達(dá)，并分析乳腺癌患者中Mdm2表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系。②將MCF-7細(xì)胞分為MDM2-siRNA組、陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，MDM2-siRNA組和陰性對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染MDM2-siRNA及無(wú)效干擾siRNA，空白對(duì)照組不加入任何試劑。檢測(cè)3組細(xì)胞中Mdm2的表達(dá)、細(xì)胞增殖率、克隆形成數(shù)量及凋亡率，并進(jìn)行組間比較。 結(jié)果①乳腺纖維腺瘤組織中Mdm2均呈陰性表達(dá)，表達(dá)陽(yáng)性率為0（0/10）；ERα陽(yáng)性乳腺癌組織中Mdm2陽(yáng)性表達(dá)38例，陽(yáng)性表達(dá)率為48.7%（38/78），高于乳腺纖維腺瘤組織（χ2=12.357，P=0.000）；ERα陽(yáng)性乳腺癌組織中Mdm2表達(dá)與患者的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量均有關(guān)（P＜0.050），TNM分期越晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量越多，Mdm2的表達(dá)陽(yáng)性率越高。② MDM2-siRNA組細(xì)胞的Mdm2表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染后2、3及4 d時(shí)的細(xì)胞增殖率及細(xì)胞克隆形成數(shù)均低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組（P＜0.050），而細(xì)胞凋亡率高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組（P＜0.050），但空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染后1、2、3及4 d時(shí)的細(xì)胞增殖率，Mdm2表達(dá)水平，細(xì)胞克隆形成數(shù)及細(xì)胞凋亡率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.050）。 結(jié)論ERα陽(yáng)性乳腺癌患者中Mdm2的表達(dá)情況是診斷乳腺癌的相對(duì)特異性標(biāo)志物，靶向Mdm2可能在ERα陽(yáng)性乳腺癌患者的治療中具有一定價(jià)值。
目的 采用 meta 分析的方法評(píng)價(jià) DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶 1（DNA methyltransferase 1，DNMT1）基因 rs16999593 位點(diǎn)的多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病的關(guān)系。 方法 計(jì)算機(jī)檢索 PubMed、EMbase、Web of Science、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)及維普數(shù)據(jù)庫(kù)中關(guān)于 DNMT1 基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病關(guān)系的病例對(duì)照研究，檢索時(shí)間均為建庫(kù)至 2017 年 3 月。由兩位評(píng)價(jià)者按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)獨(dú)立篩選文獻(xiàn)，并對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)。提取相關(guān)資料，采用 RevMan 5.3 軟件進(jìn)行 meta 分析。 結(jié)果 最終納入 5 項(xiàng)病例對(duì)照研究，共計(jì) 1 741 例乳腺癌患者和 1 917 位健康對(duì)照者。meta 分析結(jié)果顯示：顯性遺傳模型 ［OR=0.63，95% CI 為（0.30，1.30），P=0.21］、純合子模型 ［OR=1.01，95% CI 為（0.70，1.47），P=0.95］、雜合子模型 ［OR=0.44，95% CI 為（0.18，1.04），P=0.06］ 及等位基因模型 ［OR=1.29，95% CI 為（0.90，1.86），P=0.16］ 均與乳腺癌的發(fā)生無(wú)關(guān)，但隱性遺傳模型 ［OR=1.74，95% CI 為（1.01，3.00），P=0.04］與乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。 結(jié)論 在亞洲人群中，DNMT1 基因 rs16999593 位點(diǎn)的 TT 基因型是乳腺癌發(fā)病的保護(hù)因素。
目的檢測(cè)乳腺癌腫塊表面皮膚浸潤(rùn)情況，從分子水平上探討乳腺癌腫塊表面皮膚乳腺癌細(xì)胞浸潤(rùn)的特點(diǎn)，為乳腺癌手術(shù)方式、防治復(fù)發(fā)、乳腺重建等方面提供重要的臨床指導(dǎo)。 方法應(yīng)用巢式-逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測(cè)人乳腺珠蛋白（hMAM）mRNA在15例乳腺增生組織及15例乳腺纖維腺瘤組織及相應(yīng)表面皮膚中的表達(dá)情況，同時(shí)檢測(cè)60例乳腺癌組織及乳腺癌患者腫瘤表面皮膚hMAM mRNA表達(dá)，并且分析其表達(dá)與年齡、腫瘤直徑、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤距乳頭中央距離、腫瘤分期的關(guān)系。 結(jié)果乳腺纖維腺瘤組織中hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性率為40.00%（6/15），乳腺增生組織中為53.33%（8/15），乳腺纖維腺瘤組織及乳腺增生組織表面皮膚均未檢出hMAM mRNA表達(dá)；60例乳腺癌組織中hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性率為83.33%（50/60），乳腺癌腫塊表面皮膚中檢查出3例(5.00%) hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性。乳腺癌組織中hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性率較乳腺纖維腺瘤組織及乳腺增生組織明顯增高（P＜0.05）。乳腺癌腫塊表面皮膚中hMAM mRNA表達(dá)與患者年齡、腫瘤直徑及腫瘤分期無(wú)關(guān)，但在腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移及腫瘤距乳頭中央距離＜4 cm患者的乳腺癌腫塊表面皮膚中hMAM mRNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于無(wú)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤距乳頭中央距離≥4 cm者。 結(jié)論從本組有限的數(shù)據(jù)結(jié)果初步得出，在乳腺癌組織中hMAM mRNA高表達(dá)，hMAM mRNA在乳腺癌的皮膚浸潤(rùn)診斷中可能具有一定的價(jià)值，在腋窩有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤距乳頭中央距離＜4 cm乳腺癌患者中容易發(fā)生腫瘤皮膚浸潤(rùn)。
目的 探討乳腺癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的表達(dá)及其與增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、微血管密度（MVD）及臨床病理因素的關(guān)系。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)乳腺纖維腺瘤、普通乳腺增生組織和乳腺癌組織中HIF-1α及PCNA蛋白的表達(dá)，用CD34單克隆抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞并計(jì)數(shù)MVD。結(jié)果 HIF-1α蛋白在乳腺纖維腺瘤、普通乳腺增生組織中不表達(dá)； 在乳腺導(dǎo)管內(nèi)原位癌中表達(dá)陽(yáng)性率為55.0%（11/20），浸潤(rùn)性乳腺癌中為85.0%（51/60）； HIF-1α表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及雌激素受體狀態(tài)有關(guān)(P＜0.01)。乳腺癌中PCNA高表達(dá)率為75.0%（60/80），其中導(dǎo)管內(nèi)原位癌中為65.0%（13/20），浸潤(rùn)性癌中為78.3%（47/60）。乳腺癌中HIF-1α表達(dá)與PCNA呈正相關(guān)（r=0.693，P＜0.01）,與導(dǎo)管內(nèi)原位癌中MVD亦呈正相關(guān)(r=0.682，P＜0.05)，與浸潤(rùn)性癌中MVD無(wú)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 HIF-1α在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào)，與腫瘤細(xì)胞增殖、血管形成、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體狀態(tài)相關(guān)，提示HIF-1α對(duì)乳腺癌的腫瘤細(xì)胞增殖、血管形成、生長(zhǎng)和侵襲、轉(zhuǎn)移起重要作用，有望成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。