目的研究hTERT mRNA 及 GGT mRNA-H 在小肝癌患者外周血中的表達(dá),并探討其對肝癌早期診斷的價(jià)值。方法采用RT-PCR方法檢測30例小肝癌患者、18例肝炎肝硬變患者以及12例正常受試者外周血hTERT mRNA及GGT mRNAH的表達(dá)。結(jié)果小肝癌組患者h(yuǎn)TERT mRNA及GGT mRNAH表達(dá)陽性率分別為80.0%（24/30）和46.7%（14/30），均高于AFP的檢測陽性率(26.7%,8/30)，Plt;0.05。正常對照組均未檢測到hTERT mRNA和GGT mRNAH的表達(dá)。肝炎肝硬變組患者h(yuǎn)TERT mRNA的表達(dá)陽性率為33.3%（6/18），未檢測到GGT mRNAH的表達(dá)。 聯(lián)合檢測小肝癌患者h(yuǎn)TERT mRNA及GGT mRNA-H表達(dá)的陽性率明顯高于AFP的陽性率（86.7%比26.7%），Plt;0.05。結(jié)論hTERT mRNA及GGT mRNA-H在小肝癌患者中特異性表達(dá)，聯(lián)合檢測外周血hTERT mRNA及GGT mRNAH 可提高小肝癌的早期診斷率。
目的研究胃癌增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表達(dá)與腹腔灌洗液端粒酶活性及腹膜轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，并比較腹腔灌洗液中端粒酶活性和細(xì)胞學(xué)檢測游離癌細(xì)胞預(yù)測腹膜轉(zhuǎn)移的應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用免疫組化SP法檢測60例胃癌患者胃癌組織中PCNA表達(dá),PCRTRAPELISA法檢測腹腔灌洗液中端粒酶活性,同時(shí)行腹腔灌洗液脫落細(xì)胞學(xué)(peritoneal lavage cytology,PLC)檢測； 并分析其與相關(guān)臨床病理因素的關(guān)系。結(jié)果胃癌患者腹腔灌洗液中端粒酶活性的陽性率為41.7%； 與漿膜侵犯、組織學(xué)類型、浸潤深度、漿膜受累面積及腹膜轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并隨著浸潤深度及漿膜受累面積的增加而升高(P＜0.05)。PLC檢測陽性率為25.0%； 在伴肉眼可見腹膜轉(zhuǎn)移灶(P1～3)者明顯增高，也隨著浸潤深度及漿膜受累面積的增加而升高。兩種方法檢測的陽性率總體上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但在未分化型癌、pT4、伴肉眼可見腹膜轉(zhuǎn)移灶(P1～3)者端粒酶活性陽性率明顯高于PLC。PCNA增殖指數(shù)（PI）在腹腔灌洗液端粒酶活性表達(dá)陽性者明顯高于表達(dá)陰性者，伴肉眼可見腹膜轉(zhuǎn)移灶(P1～3)者明顯高于無肉眼可見腹膜轉(zhuǎn)移灶（P0）者，漿膜受侵者明顯高于漿膜未受侵者（P均＜0.05）。結(jié)論兩種方法均適用于胃癌腹腔脫落癌細(xì)胞的診斷或腹膜轉(zhuǎn)移的預(yù)測，端粒酶活性檢測微量癌細(xì)胞的靈敏度優(yōu)于PLC法檢測； 胃癌端粒酶活性與惡性增殖活性密切相關(guān)； 胃癌高增殖活性是漿膜受侵及腹膜轉(zhuǎn)移的重要原因。
目的 用反轉(zhuǎn)錄PCR法，調(diào)取膽囊癌細(xì)胞內(nèi)的端粒酶RNA(hTR)基因，并針對其序列設(shè)計(jì)錘頭狀核酶切割基因序列，并將其構(gòu)建入真核表達(dá)載體pTriEx4內(nèi)。方法 根據(jù)hTR cDNA序列，設(shè)計(jì)引物，經(jīng)RT-PCR法從體外培養(yǎng)的膽囊癌細(xì)胞內(nèi)調(diào)取hTR模板區(qū)基因，根據(jù)其測序結(jié)果，合成錘頭狀核酶基因，與經(jīng)相應(yīng)酶切的真核表達(dá)載體連接，酶切鑒定重組體的正確性。結(jié)果經(jīng)RT-PCR從細(xì)胞內(nèi)調(diào)出68 bp序列，與hTR cDNA比較，與模板區(qū)域堿基序列一致。核酶基因重組子經(jīng)酶切鑒定序列正確。結(jié)論 RT-PCR法可調(diào)出膽囊癌hTR基因有效片段； 成功構(gòu)建了針對hTR模板區(qū)的核酶基因的真核表達(dá)載體，為膽囊癌的基因治療奠定了基礎(chǔ)。
目的 探討端粒酶作為大腸癌診斷、治療和預(yù)后參數(shù)的價(jià)值。方法應(yīng)用PCR-TRAP-ELISA方法，檢測大腸癌、癌旁和正常大腸粘膜組織的端粒酶活性表達(dá)。結(jié)果端粒酶在大腸癌、癌旁和正常大腸粘膜組織中表達(dá)的陽性率分別為84.8%(39/46)、20.0%(6/30)和0(0/20)，大腸癌組織中端粒酶表達(dá)陽性率明顯高于癌旁和正常大腸粘膜(P＜0.001)。早期大腸癌(Dukes A期)即有66.7%者存在端粒酶活化。腫瘤組織學(xué)分級越低，端粒酶表達(dá)陽性率越高(P＜0.05)。 結(jié)論 端粒酶可能是大腸癌惡性浸潤的早期事件，可作為診斷大腸癌的一個(gè)有用的輔助指標(biāo)，并有助于預(yù)測預(yù)后和指導(dǎo)治療方案的選擇。
目的 介紹端粒、端粒酶的性質(zhì)及其與腫瘤的關(guān)系，了解端粒、端粒酶在胃癌中的表達(dá)及意義。 方法綜述國內(nèi)外進(jìn)展。結(jié)果 端粒酶活性在85%～90%的胃癌中可以檢測到，在表達(dá)端粒酶陽性的患者比表達(dá)陰性的患者預(yù)后要差，表明端粒酶陽性的胃癌惡性程度更高。結(jié)論 胃癌端粒酶活性檢測不僅可用于診斷，且可用于表示預(yù)后，未來用于抑制端粒酶的藥物可以提供一種副作用較少的治療癌癥的方法。
目的 了解幾種常見甲狀腺病變組織中端粒酶活性的區(qū)別。方法 用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法測定19例甲狀腺癌、15例甲狀腺癌癌旁組織、21例甲狀腺腺瘤、17例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及13例正常甲狀腺組織端粒酶的活性。 結(jié)果 94.74%（18／19）的甲狀腺癌表達(dá)出端粒酶活性，與癌旁組織(6.67%)、甲狀腺腺瘤(4.67%)、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫（0%）及正常甲狀腺組織（0%）比較，差異均有顯著性意義（P＜０.0001）。結(jié)論 端粒酶是甲狀腺癌定性的良好標(biāo)志物，且在甲狀腺病變的鑒別診斷中具有重要意義。
目的 研究體外擴(kuò)增過程中，CD34+細(xì)胞內(nèi)B細(xì)胞特異單克隆鼠白血病毒整合位點(diǎn)基因1（B-cell-specific monoclonal leukemia virus insert site 1，Bmi1）和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因的表達(dá)水平與其擴(kuò)增特性的相關(guān)性。 方法采用含F(xiàn)BS、干細(xì)胞生長因子、Flt-3配體和促血小板生成素的IMDM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)臍血CD34+細(xì)胞，在28 d培養(yǎng)過程中檢測CD34+細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、CD34+細(xì)胞比生長速率以及集落形成率的變化趨勢，并采用熒光定量PCR檢測體外擴(kuò)增過程中CD34+細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT基因表達(dá)水平變化，分析以上基因表達(dá)水平與CD34+細(xì)胞擴(kuò)增特性之間的關(guān)系。 結(jié)果經(jīng)過28 d的體外培養(yǎng)，CD34+細(xì)胞共擴(kuò)增了（20.1 ± 3.5）倍，其占擴(kuò)增后總細(xì)胞的比例由培養(yǎng)前的95.5% ± 2.6%下降至2.1% ± 0.4%；CD34+細(xì)胞的比生長速率和集落形成率均在培養(yǎng)7 d后出現(xiàn)明顯下降，而細(xì)胞內(nèi)Bmi1和hTERT mRNA的表達(dá)水平在培養(yǎng)7 d時(shí)達(dá)最高，此后逐漸下降至培養(yǎng)前水平。 結(jié)論Bmi1和hTERT基因表達(dá)與CD34+細(xì)胞體外增殖能力可能存在一定相關(guān)性。
目的 探討缺氧缺血性腦損傷（hypoxia ischemia brain damage，HIBD）時(shí)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）的表達(dá)及神經(jīng)元凋亡情況。 方法 42 只清潔級7 日齡SD 大鼠，雌雄不限，體重12 ～ 18 g，隨機(jī)分為假手術(shù)組（6 只）和缺氧缺血組（36 只）。缺氧缺血組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，雙線結(jié)扎，縫合皮下組織及皮膚，并低氧處理，制備HIBD 動(dòng)物模型；假手術(shù)組僅將縫線從右側(cè)頸總動(dòng)脈下穿過，不結(jié)扎，縫合切口，不作低氧處理。分別于術(shù)后4、8、12、24、48 及72 h 處死大鼠取腦組織，采用免疫組織化學(xué)法檢測TERT 和CC3 蛋白表達(dá)，采用TUNEL 染色檢測細(xì)胞凋亡。 結(jié)果 缺氧缺血組TERT 蛋白表達(dá)于術(shù)后4 h 開始增加，24 ～ 48 h 達(dá)高峰，之后略有下降；CC3 蛋白表達(dá)于術(shù)后4 h 開始增加，24 h 明顯升高，48 h 及72 h 維持較高水平。假手術(shù)組TERT 和CC3 僅有少量弱陽性表達(dá)。缺氧缺血組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)TERT 及CC3 蛋白表達(dá)與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。TUNEL 染色顯示，缺氧缺血組術(shù)后4 ～ 8 h 神經(jīng)細(xì)胞凋亡開始增多，24 ～ 48 h 達(dá)高峰，72 h 仍維持在較高水平；假手術(shù)組偶見陽性細(xì)胞。缺氧缺血組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 缺氧缺血能誘導(dǎo)腦組織中TERT 表達(dá)增加，TERT 可能對神經(jīng)細(xì)胞凋亡起一定保護(hù)作用。
目的 探討端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）在神經(jīng)系統(tǒng)疾病修復(fù)中的研究進(jìn)展。 方法 廣泛查閱TERT 與各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病修復(fù)的相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果 TERT 是端粒酶的重要組成成分，也是其活性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它在神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、神經(jīng)發(fā)育缺陷及神經(jīng)損傷等各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用，已逐漸成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病修復(fù)治療的研究熱點(diǎn)。 結(jié)論 TERT 在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的修復(fù)治療中具有重要意義和應(yīng)用前景，需進(jìn)一步研究。
目的 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）是決定細(xì)胞生長與壽命的關(guān)鍵因素，也與細(xì)胞抵制應(yīng)激和減少凋亡密切相關(guān)。通過構(gòu)建腦神經(jīng)元體外缺氧缺血再灌注（hypoxia-ischemia-reperfusion，HI-RP）模型，探討大鼠TERT 轉(zhuǎn)染星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocytes，AS）的培養(yǎng)液對HI 損傷神經(jīng)元的影響。 方法 構(gòu)建大鼠全長TERT 表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-TERT。取20 只新生3 d SD 大鼠處死后取大腦皮層，分離培養(yǎng)AS，通過脂質(zhì)體介導(dǎo)用pcDNA3-TERT 及pcDNA3 轉(zhuǎn)染AS，作為pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組，以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的AS（未轉(zhuǎn)染組）作為對照。免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測各組AS 特異性標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及目的基因TERT的表達(dá)。分別收集pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組、pcDNA3 轉(zhuǎn)染組、未轉(zhuǎn)染組的AS 條件培養(yǎng)液（astrocyte conditioned medium，ACM），分別為TERT-ACM、p-ACM 及ACM。取60 只新生當(dāng)天SD 大鼠，處死后取大腦皮層進(jìn)行神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)8 ～ 9 d 的大鼠神經(jīng)元隨機(jī)分為對照組、ACM 組、p-ACM 組、TERT-ACM 組及正常組。前4 組分別于無血清DMEM培養(yǎng)基及含ACM、p-ACM、TERT-ACM 的無血清DMEM 培養(yǎng)基中進(jìn)行HI 培養(yǎng)3 h 后，再體外模擬RP 3、6、18、24、36 h；正常組神經(jīng)元不作處理。采用MTT 法測定神經(jīng)元存活率、比色法測定神經(jīng)元培養(yǎng)液中乳酸脫氧酶（loctate dehydrogenase，LDH）活性、TUNEL 法檢測神經(jīng)元凋亡情況。 結(jié)果 免疫細(xì)胞化學(xué)染色示，未轉(zhuǎn)染組、pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組及pcDNA3 轉(zhuǎn)染組的GFAP 陽性細(xì)胞百分率分別為98%、99%、98%；未轉(zhuǎn)染組與pcDNA3 組未見TERT 表達(dá)，pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染組TERT 陽性細(xì)胞百分率達(dá)98%。MTT 檢測顯示，對照組、ACM 組、p-ACM 組及TERT-ACM 組神經(jīng)元存活率均較正常組降低，其LDH 活性及TUNEL 檢測凋亡指數(shù)均較正常組增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。ACM 組、p-ACM 組與對照組比較，在HI 3 h 及RP 3 h 神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；但之后各時(shí)間點(diǎn)各項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)TERT-ACM 組與對照組、ACM 組和p-ACM 組比較，神經(jīng)元存活率均增高，LDH 活性及凋亡指數(shù)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；各時(shí)間點(diǎn)p-ACM 組與ACM 組各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 經(jīng)質(zhì)粒pcDNA3-TERT 轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液處理的大鼠神經(jīng)元對HI 損傷有更強(qiáng)的耐受性，轉(zhuǎn)染AS 培養(yǎng)液可能對HI 神經(jīng)元具有保護(hù)作用。