摘要:目的:觀察小梁切除術聯(lián)合同種異體羊膜植入術治療難治性青光眼的療效。方法:對40例(54只眼)難治性青光眼行小梁切除術聯(lián)合羊膜移植手術,術后隨訪6～12個月。觀察術后濾過泡形態(tài)和功能,眼壓,視力變化,并發(fā)癥等情況。結果:54只眼術后全部形成并保持功能性濾過泡,眼壓除2只眼需局部應用降眼壓藥控制在21 mmHg以下外,其余眼壓均在10 mmHg～21 mmHg之間。未發(fā)現(xiàn)因羊膜植入所致的并發(fā)癥。結論:羊膜移植在難治性青光眼濾過性手術中的應用療效顯著,且無毒副作用,可推廣應用。
目的探討人羊膜修復雞足趾腱鞘缺損后防止肌腱粘連的可行性和有效性。 方法取行剖腹產(chǎn)術產(chǎn)婦自愿捐贈的胎盤，制備大小為1.5 cm × 1.0 cm的羊膜片。3～6月齡健康雄性來亨雞40只，體重（1.86 ± 0.04）kg，取雙足第3趾制備肌腱、腱鞘損傷模型?！?”字縫合修復肌腱后，右足采用羊膜片修復缺損腱鞘（A組），左足缺損腱鞘不作處理（B組）。術后1、2、4、6周各取10只實驗動物行大體及組織學觀察，并按照Tang等肌腱粘連大體觀察分級標準進行分級，生物力學試驗測定肌腱滑移度及總屈趾角度。 結果術后實驗動物均存活至實驗完成，切口均愈合良好。隨術后時間延長，大體及組織學觀察顯示兩組均有假鞘（新生腱鞘）形成，但A組假鞘較B組成熟、光滑。術后1、6周A組肌腱粘連分級均明顯優(yōu)于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。生物力學試驗測定示，術后1、2周兩組肌腱滑移度比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），4、6周時A組肌腱滑移度均較B組長（P lt; 0.05）。術后1、2、4、6周A組總屈趾角度均小于B組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論采用人羊膜修復雞腱鞘缺損能有效預防肌腱粘連，利于肌腱滑動功能的恢復。
目的 總結1例人脫細胞生物羊膜（human acellular amniotic membrane，HAAM）治療全身抗凝患者骨筋膜室綜合征切開減壓術后創(chuàng)面滲血的療效。方法 2012年6月收治1例74歲經(jīng)皮冠狀動脈介入治療后9 h發(fā)生右臂骨筋膜室綜合征的女性患者，因需持續(xù)全身抗凝治療，給予硝酸甘油對癥治療及切開減壓術后創(chuàng)面持續(xù)廣泛滲血。立即停用硝酸甘油，HAAM覆蓋創(chuàng)面，塔形敷料加壓包扎。切開減壓術后9 d腫脹消退，行創(chuàng)面縫合及大腿皮片游離植皮修復。結果 HAAM覆蓋創(chuàng)面48 h后創(chuàng)面滲血停止。術后隨訪4個月，患者右前臂植皮區(qū)創(chuàng)面愈合良好，右手功能正常，前臂及手部皮膚感覺無異常。結論 HAAM結合塔形敷料加壓包扎對控制創(chuàng)面廣泛滲血有良好效果，但尚需進一步積累病例觀察。
人羊膜上皮細胞（human amniotic epithelial cells，hAECs）具有干細胞特性及分化為成熟肝細胞的潛能，有望成為肝細胞移植理想的種子細胞。研究hAECs 移植入肝受損裸小鼠脾臟后的存活、遷移情況，探討其肝細胞特性的表達。 方法 取順產(chǎn)產(chǎn)婦自愿捐贈胎盤分離培養(yǎng)hAECs。30 只6 ～ 8 周齡裸小鼠，雌雄各半，體重20 ～ 22 g。將實驗動物隨機分為A、B、C 3 組，每組10 只。A、C 組制備肝切除（常規(guī)切除2/3 肝）模型，B 組僅開腹但未行肝葉切除；術后A、B 組分別自脾下極移植細胞密度為5 × 106 個 /mL 腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）載體介導綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因標記的第3 代hAECs 0.2 mL，C 組注射等量生理鹽水。4 周后處死動物，取肝、脾、心、肺、腦、腎行大體觀察，冰凍切片行組織學及免疫熒光檢測，追蹤hAECs 存活、遷移及肝細胞特性表達。 結果 3 組裸小鼠肝及脾組織未見異常癌性結節(jié)及腫塊，HE 染色未見腫瘤細胞。A 組肝及脾組織HE 染色可見大量類圓形、胞質(zhì)少、核大而深染的細胞；B、C 組肝、脾組織及3 組腎、心、肺、腦組織均未見異常細胞。熒光顯微鏡下A 組肝、脾組織中均發(fā)現(xiàn)綠色熒光信號的hAECs，且大部分表達白蛋白；B、C 組肝、脾組織及3 組腎、心、肺、腦組織未見綠色熒光細胞。 結論 AAV- GFP 轉(zhuǎn)染后的hAECs 移植入肝受損裸小鼠體內(nèi)可存活并保持部分肝細胞特性。
目的 人脫細胞羊膜（human acellular amniotic membrane，HAAM）含膠原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板層體等多種成分，這些成分能為細胞增殖、分化提供豐富營養(yǎng)。研究HAAM 與脂肪源性干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的生物相容性，探討HAAM 復合ADSCs 構建真皮替代物修復全層皮膚缺損的可能性。 方法 取健康4 月齡SD 大鼠30 只，雌雄不限，體重250 ～ 300 g，于腹股溝處獲取脂肪行ADSCs 體外分離、培養(yǎng)和傳代；取第3 代細胞行HE 染色及CD44、CD49d、CD34 免疫細胞化學染色鑒定。應用物理和酶消化法處理自愿捐贈的人羊膜獲得HAAM，行HE 染色觀察細胞是否脫除干凈，掃描電鏡觀察HAAM 結構特征。將第3 代ADSCs 以2 × 105 個/cm2 密度接種于HAAM 上皮面，體外共培養(yǎng)1 ～ 5 d 后分別行掃描電鏡和MTT 檢測，不加材料組設為對照組。將大鼠隨機分為3 組，每組10 只，建立背部直徑為2 cm 的全層皮膚缺損模型。A 組創(chuàng)面植入復合ADSCs 的HAAM，B 組植入單純HAAM，C 組常規(guī)包扎。術后行大體觀察，于術后1、2、4 周計算創(chuàng)面愈合率，并取創(chuàng)面皮膚行HE 染色和細胞角蛋白19（cytokeratin19，CK19）免疫組織化學染色觀察。 結果 HE 染色示第3 代ADSCs 呈梭形，胞核為橢圓形，位于細胞中央；免疫細胞化學染色示第3 代ADSCs 表達CD44 和CD49d，不表達CD34。HAAM 行HE 染色未見細胞殘留；掃描電鏡下見HAAM兩面具有不同的三維結構，上皮面為較致密的網(wǎng)狀纖維；基質(zhì)面為較稀疏的膠原纖維，未見纖維發(fā)生融合、斷裂和降解。ADSCs-HAAM 復合培養(yǎng)3 d 后掃描電鏡下可見細胞生長狀態(tài)良好，胞體肥大呈梭形隆起，胞膜外絨毛致密略有彎曲，胞體下方形成豐富的偽足牢固黏附于HAAM 上；培養(yǎng)1 ～ 5 d，MTT 檢測示實驗組和對照組吸光度值比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。移植術后1、2、4 周，A 組創(chuàng)面愈合率均高于B、C 組，B 組高于C 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。HE染色示A 組創(chuàng)面愈合速度快于B、C 組；A 組CK19 表達亦明顯高于B、C 組。 結論 HAAM 復合ADSCs 構建真皮替代物對大鼠全層皮膚損具有良好的促愈合作用。
目的 研究新型聯(lián)合基質(zhì)——BMSCs- 去上皮細胞羊膜（denuded human amniotic membrane，DHAM）橋接大鼠脊髓橫斷性損傷斷端，促進軸突再生及提高后肢運動功能的作用。 方法 取健康產(chǎn)婦正常剖宮產(chǎn)術后自愿捐獻的羊膜，經(jīng)聯(lián)合消化法徹底去除表面上皮細胞制備DHAM，并行HE 染色觀察。健康4 周齡雌性Wistar 大鼠4 只，取骨髓行BMSCs 分離、培養(yǎng)，取第4 代細胞以PKH26 標記后，以1 × 105 個/cm2 密度接種于DHAM 上制備聯(lián)合基質(zhì)（BMSCs-DHAM）。倒置相差顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 生長狀態(tài)。另取8 周齡雌性Wistar 大鼠40 只，體重200 ～ 220 g， 制備T9 脊髓橫斷性損傷模型，隨機分為4 組，每組10 只。A、C 組分別用BMSCs-DHAM 和單純DHAM包裹脊髓的2 個 斷端，B、D組分別于脊髓損傷中心注射10 μL 細胞濃度為1 × 104 個/μL 的BMSCs 和等量生理鹽水。術后12 周采用BBB 運動評分檢測大鼠后肢運動功能恢復情況，行皮層運動誘發(fā)電位（motion evoked potential，MEP）測定；生物素化葡聚糖胺（biopinylated dextan amine，BDA）順行示蹤檢測及神經(jīng)絲蛋白200（neurofilament protein 200，NF-200）免疫熒光染色觀察。 結果 HE 染色顯示聯(lián)合消化法成功制備DHAM。鏡下觀察到BMSCs 在DHAM 上生長狀態(tài)良好。術后12 周，A 組BBB 評分達（12.50 ± 1.26）分，明顯高于其余各組（P lt; 0.05）。MEP 測定顯示，A 組潛伏期（3.52 ± 2.45） ms 及波幅（480.68 ± 18.41）μV，恢復效果優(yōu)于其余各組（P lt; 0.05）。BDA 順行示蹤觀察示，A 組損傷平面以下BDA 通過損傷部位的軸突再生率為54.12% ± 3.30%，均高于其余各組（P lt; 0.05）；且A 組NF-200 免疫熒光染色亦可見大量再生軸突通過損傷部位。 結 論 新型聯(lián)合基質(zhì)BMSCs-DHAM 一定程度上提高了脊髓橫斷性損傷大鼠的后肢運動功能，是一種具有廣泛應用前景的基質(zhì)材料
對比新鮮與保存人羊膜異種移植后的免疫反應、組織改變及轉(zhuǎn)歸，客觀評價不同類型羊膜的臨床應用價值。 方法 取清潔級BALB/C 小鼠150 只，雌雄不限，體重18 ～ 20 g；建立BALB/C 小鼠皮下埋植實驗模型。按埋植物的不同將動物分為5 組，分別為甘油保存羊膜（glycerin preserved amniotic membrane，GPAM）組、新鮮羊膜（fresh amniotic membrane，F(xiàn)AM）組、雙層新鮮羊膜（double fresh amniotic membrane，DFAM）組、絨毛膜組（陽性對照組）和單純手術組（陰性對照組）。各組分別于術后1、2、4、8 及12 周取材行大體觀察、免疫組織化學法測定組織切片中主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ的表達，以及HE 染色觀察植片及周圍組織的變化，并行炎性細胞計數(shù)。 結果 術后各組小鼠飲食、活動正常，創(chuàng)面均Ⅰ期愈合。各羊膜組移植區(qū)MHC Ⅱ表達和炎性細胞計數(shù)均明顯弱于陽性對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）；術后1、8、12 周，各羊膜移植組間MHC Ⅱ抗原表達和炎性細胞計數(shù)兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；術后2 ～ 4 周，F(xiàn)AM 組與DFAM 組MHC Ⅱ抗原表達和炎性細胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），但均略多于GPAM 組（P lt; 0.05）；術后4 周，各羊膜組移植區(qū)MHC Ⅱ抗原表達和炎性細胞計數(shù)均較2 周前明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01）。HE 染色觀察：術后4 周新鮮羊膜植片上羊膜上皮細胞仍存活；術后早期，成纖維細胞從基質(zhì)層方向浸潤羊膜，并在上皮附近合成膠原纖維囊包裹；術后12 周，羊膜植片已與周圍組織融合難以區(qū)分。 結 論 人羊膜作為一種異源性移植材料，無論新鮮或保存，均具有良好的免疫相容性和組織相容性。含活上皮的新鮮羊膜較保存羊膜可能有更佳的修復重建效果。
目的 總結近年來羊膜的基礎及臨床應用研究進展。 方法 廣泛查閱國內(nèi)外有關羊膜的基礎和臨床應用研究文獻，總結其研究成果。 結果 羊膜來源廣泛、價格便宜、對細胞相容性好、抗原性低，羊膜上皮層含有羊膜上皮細胞及多種生長因子，基底膜含有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原，纖維連接蛋白及糖蛋白，這些獨特的結構使其對多種細胞生長有促進作用，羊膜已在眼科臨床中得到廣泛應用。結論 使用羊膜不違背倫理，隨著對羊膜的進一步深入研究，以及組織工程、生物工程對材料需求的進一步加大，其應用會更加廣泛。
目的 研究快速培養(yǎng)和純化豬角朊細胞的方法及觀察角朊細胞在脫細胞羊膜上的生長狀況,為組織工程皮膚研究提供實驗依據(jù)。 方法 采用加10％胎牛血清的人無血清角朊細胞培養(yǎng)基(defined keratinocyteSFM，DKSFM)培養(yǎng)原代豬角朊細胞，分別用DKSFM(A組)、加5％胎牛血清的DKSFM(B組)、加10％胎牛血清的DKSFM(C組)培養(yǎng)傳代豬角朊細胞，于接種后1、3、5和7 d觀察豬角朊細胞的形態(tài)及生長曲線。利用豬角朊細胞與培養(yǎng)瓶黏附牢固的特點，用0.02%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)和0.05％胰蛋白酶分步消化，純化細胞。 將第2代豬角朊細胞接種在凍干脫細胞羊膜上，直接蘇木素染色、石蠟切片、免疫組織化學染色等方法觀察豬角朊細胞在脫細胞羊膜上的生長狀況。 結果 采用加10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細胞，細胞生長速度快，形態(tài)好，培養(yǎng)5 d鋪滿培養(yǎng)瓶底60％~70％。B組培養(yǎng)的傳代豬角朊細胞生長速度較C組培養(yǎng)豬角朊細胞生長速度快。A組培養(yǎng)傳代的角朊細胞，細胞生長緩慢。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細胞，可獲得純度為95％以上的豬角朊細胞。將第2代豬角朊細胞接種在脫細胞羊膜后12 d，可形成單層細胞，呈多角形、鋪路石樣排列；14 d和16 d細胞進一步密集，16 d細胞出現(xiàn)老化。 結論 10％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)原代豬角朊細胞，5％胎牛血清的DKSFM培養(yǎng)傳代豬角朊細胞，細胞生長速度快。用0.02%EDTA和0.05％胰蛋白酶分步消化的方法純化豬角朊細胞，可以獲得高純度豬角朊細胞。脫細胞羊膜為豬角朊細胞提供良好的支架，接種培養(yǎng)后12 d，細胞形態(tài)最好。
目的 比較脫細胞羊膜與脫細胞小腸黏膜下層作為創(chuàng)傷性皮膚缺損覆蓋物,對創(chuàng)面修復的效果。方法 7只四川長白小豬,每只豬背部兩側各做3個4 cm×4 cm大小的皮膚缺損,深達深筋膜。每側缺損隨機分為3組,用不同敷料覆蓋。A組：雙層脫細胞羊膜；B組：雙層脫細胞小腸黏膜下層；C組：空白,生理鹽水紗布覆蓋。術后觀察創(chuàng)面局部情況、創(chuàng)面愈合率,10 d(2只,各組4個皮膚缺損)、20 d(2只,各組4個皮膚缺損)、30 d(3只,各組6個皮膚缺損)處死動物取材。行組織學觀查,炎性細胞、血管內(nèi)皮細胞及增殖細胞計數(shù),羥脯氨酸含量測定。 結果A、B組覆蓋的敷料與創(chuàng)面黏附緊密,與紗布無粘連,更換敷料時創(chuàng)面無滲血。C組紗布與創(chuàng)面黏附緊密,術后22 d前更換紗布時創(chuàng)面出血。組織學觀察：術后各時間點A、B組皮下組織內(nèi)炎性細胞數(shù)較C組少；C組皮下組織內(nèi)膠原分布較A.、B組紊亂。術后各時間點A、B組創(chuàng)面愈合率較C組高，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；C組術后各時間點炎性細胞計數(shù)、皮下組織及肉芽組織內(nèi)增殖細胞數(shù)明顯高于A、B組，術后20、30 d，痙脯氨酸含量高于A、B組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；3組內(nèi)皮細胞計數(shù)，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt; 0.05）。A、B組創(chuàng)面局部情況、創(chuàng)面愈合率、病理組織學檢查、炎性細胞數(shù)計數(shù)、血管內(nèi)皮細胞計數(shù)、增殖細胞計數(shù)和羥脯氨酸含量，差異均無統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。結論 采用脫細胞羊膜、脫細胞小腸黏膜覆蓋創(chuàng)傷性皮膚缺損，有提高創(chuàng)面愈合率、減少炎性反應，控制皮下組織及肉芽組織中細胞增殖，使膠原纖維有序排列的作用，能減少創(chuàng)面組織的出血和滲出。脫細胞小腸黏膜覆蓋創(chuàng)面具有與脫細胞羊膜覆蓋創(chuàng)面相近的修復效果。